Folin-Ciocalteu比色法

Folin-Ciocalteu比色法（FC酚法）一、仪器UV-2401PC型紫外分光光度计；超声波清洗仪；恒温水浴锅二、试剂没食子酸标准品；钨酸钠；磷钼酸；85%磷酸，碳酸钠，以上试剂均为分析纯。水为蒸馏水。1、福林试剂的配置在250ml的圆底烧瓶内加入20g钨酸钠，5g钼酸钠、140ml蒸馏水，85%的浓硫酸10ml及浓盐酸20ml，充分混匀，以小火回流10h，再加入硫酸锂及15ml双氧水，开口继续煮沸15min，待双氧水全部挥发，呈亮黄色。冷却后移入250ml容量瓶定容，置于棕色试剂瓶中，放入冰箱中备用。2、碳酸钠溶液的配制称取40g碳酸钠，溶于200ml蒸馏水中，即为20%（g/L）的碳酸钠溶液。三、方法与结果1、标准曲线的制作精密称取没食子酸标准品0.0110g，用蒸馏水并定容至100ml，得浓度为0.11mg/ml的标准液。准确吸取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml置于25ml的容量瓶中，加蒸馏水6.0ml，然后分别加入FC试剂0.5ml，混匀，在30s~8min内加入1.5ml20%的碳酸钠溶液，充分混合后定容，30℃避光放置30min，以不加标准液的6.0ml蒸馏水为空白对照，760nm下测定吸光值，每个样品平行测定3次。2、供试品液的制备样品液总酚含量的测定：准确量取制备好的乙醇粗提液0.5ml于50ml容量瓶中，加入9.5ml蒸馏水，摇匀，再加入0.5ml福林试剂，在30s~8min内加入1.5ml20%的碳酸钠溶液，充分混合后定容，30℃避光放置30min，以没食子酸标准液为空白对照，760nm下测定吸光度值，每个样品平行测定6次（A为6次平行测得的吸光度）。3、以没食子酸为标准品的标准曲线：C0=0.11mg/ml4、以没食子酸在反应体系中的质量浓度C为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线。次数12345678样品V（ml）00.40.60.81.01.21.41.6A