细胞生物学实验思考题

细胞生物学实验思考题1、为什么暗视场照明的视场暗黑，而样品像明亮？相差显微镜镜检时，为什么要用绿色滤色镜观察活体样本？暗视场显微镜照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的；为获得好的效果，要用波长范围窄的单色光，选用绿色滤光镜，不但可满足这个要求，而且绿色可吸收红外光，减少发热。2、为什么活细胞不易染色，从细胞生物学角度解释原因。染色剂一般有剧毒，而细胞膜具有选择透过性，会将一部分对细胞有害的物质阻挡在细胞外，所以活细胞难以染色。而当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，染色剂得以进入，细胞就被染色。3、简述中性红染液、詹纳斯绿B染液用于细胞超活染色的原理。JanusgreenB活体细胞染色的机理：JanusgreenB是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。Neutralred碱性染料活体染色的机理：neutralred为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。4、什么是细胞骨架？它有何主要功能？生物学中细胞骨架指真核细胞中与保持细胞形态结构和细胞运动有关的纤维网络。包括微管、微丝和中间丝。细胞骨架不仅在维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用，而且还参与许多重要的生命活动，如：在细胞分裂中细胞骨架牵引染色体分离，在细胞物质运输中，各类小泡和细胞器可沿着细胞骨架定向转运；在肌肉细胞中，细胞骨架和它的结合蛋白组成动力系统；在白细胞(白血球)的迁移、精子的游动、神经细胞轴突和树突的伸展等方面都与细胞骨架有关。另外，在植物细胞中细胞骨架指导细胞壁的合成。5、列举你所知道的动、植物细胞中由微丝组成的结构。肌原纤维、微绒毛、应力纤维6、显示细胞骨架的原理是什么？说明实验中使用的TritonX-100、戊二醛、考马斯亮蓝R-250的作用。原理：用考马斯亮蓝对细胞骨架进行染色，染色观察前，应首先用去垢剂抽提掉胞质中的除骨架以外的其他蛋白。TritonX-100：非离子型去垢剂，可使细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提。戊二醛：固定细胞考马斯亮蓝R-250：蛋白质染料，对细胞骨架染色。7、显示脂类时，制片及染色有何特殊之处？制片时需要用10%甲醛钙固定液进行固定，要求用苏丹Ⅲ饱和溶液染色，但是对不同部位的脂类进行处理时有区别。8、简述Fenulgen反应的原理和实验的关键步骤。原理：DNA经弱酸水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷脂键打开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基，醛基在原位与Schiff试剂结合，形成紫红色复合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色的阴性反应。关键步骤：①Schiff试剂遮光染色30min，一定要遮光；②压片时，一定要压均匀，否则细胞会重叠，影响观察；③洗玻片上的试剂，要注意样品不被洗掉。9、试述差速离心法分离细胞器的原理。在一定的离心场中（选用离心机的一定转速），球心颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的黏度。在一均匀的悬浮介质中离心一定时间，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同将停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。10、试述密度梯度离心法分离细胞器的原理。用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。11、为什么要事先向小鼠腹腔注射淀粉肉汤悬浮液？吞噬细胞的变形运动及吞噬作用的生物学机理是什么？①诱导小鼠腹腔大量产生巨噬细胞，使其聚集；②细胞膜具有一定的流动性。