CKD患者肾内小动脉ɑ-SMA的表达与颈动脉内膜厚度的关系

CKD患者肾内小动脉ɑ-SMA的表达与颈动脉内膜厚度的关系目的：通过研究各期CKD（ChronicKidneyDisease,）患者肾内小动脉α-SMA的表达程度的差异，肾内小动脉α-SMA的表达程度与颈动脉内膜厚度的关系，揭示肾组织α-SMA的表达与肾组织病变程度的关系。方法：选取63例CKD患者。按照eGFR分为3组，CKD1期病人26例，CKD2期病人21例，CKD3期病人13例，CKD4期病人3例，分别行PSA染色，PASM染色以及免疫组化染色，观察肾间质纤维化程度、肾内小动脉的表达程度。结果：1.肾内小动脉α-SMA的平均光密度：CKD1期组0.2816±0.0161；CKD2期组0.2681±0.0990；CKD3期组0.2172±0.0512，CKD4期组0.1916±0.0301,肾内小动脉α-SMA平均阳性面积百分比：CKD1期组22.2301±6.3452%；CKD2期组19.1032±9.3423%；CKD3期组14.3401±12.3427%，CKD4期组10.4049±11.6902%：各组之间两两比较均有统计学差异(P＜0.05）。2.肾小管损伤指数:CKD1期组0.1216±0.0161；CKD2期组0.1181±0.0390；CKD3期组2.2172±0.0541，CKD4期组3.1916±0.0401.前两组相比,肾小管损伤指数无统计学意义((P0.05),其余各组两两比较均有明显差异(P＜0.05）.3.颈动脉内膜厚度：CKD1期组患者0.9212±0.1401mm；CKD2期组1.6137±0.5014mm；CKD3期组2.2147±0.4116mm；CKD4期组2.8147±0.8016mm。各组之间两两比较均有统计学差异(P＜0.05）。结论：1.肾内小动脉α-SMA的表达的变化可能参与了CKD的发生发展。2.联合检测肾内小动脉α-SMA的表达程度与颈动脉内膜厚度的关系可为CKD患者发生心血管意外的可能性提供一定的依据。关键词：慢性肾脏病；α-SMA；肾小管损伤指数：颈动脉内膜厚度；心血管事件近年来，在全球范围内的发病率逐年增加，有统计显示，我国南方大城市中，CKD的患病率约为10%，北京40岁以上人中，至少有一项肾脏指标异常的人群达到了11%。CKD发病率随着肥胖、高血压、糖尿病人数的增加进一步升高。CKD如若未得到及时治疗，可呈进一步进行性发展，并进入终末期肾衰竭（Endstagerenaldisease，ESRD）阶段，此时则需长期肾脏替代治疗;CKD还能够增加心血管疾病的发生率，是CKD的主要死因之一。因此控制并治疗CKD，已成为全球特别是发展中国家的主要任务，可极大减少ESRD发生率,减轻社会经济负担。1材料1.1研究对象1.1.1研究对象选择：选取2012年3月至2012年9月在河北医科大学第二医院住院，经肾活检诊断明确为慢性肾脏病患者63例，其中CKD1期病人22例，CKD2期21例，CKD3期17例，CKD4期3例，留取肾组织石蜡切片备用。慢性肾脏病的分期标准：1期：肾损害：eGFR正常或升高[≥90ml/（min•1.73㎡）]。2期：肾损害伴eGFR轻度下降[60～90ml/（min•1.73㎡）]。3期：eGFR中度下降[30～60ml/（min•1.73㎡）]。4期：eGFR明显下降[15~30ml/（min•1.73㎡）]1.1.2入选标准：（1）年龄18周岁；（2）临床或病理诊断为肾实质性疾病；2方法2.1肾穿刺标本的处理肾组织经过FAA固定后进行石蜡包埋后切片机连续切片，厚度为2um，在水浴箱中展片，组织充分舒展以后，载玻片捞取组织后放入恒温箱60度烤片。3.2肾组织的PAS染色步骤（1）二甲苯脱蜡至水（2）梯度酒精水化（3）自来水清洗1分钟（4）加高碘酸氧10分钟（5）自来水清洗3分钟（6）滴加shiff氏液10分钟（7）自来水清洗3分钟（8）Mayers苏木素染色6分钟（9）自来水清洗3分钟（10）1%的盐酸酒精分化2秒（11）自来水清洗3分钟（12）1%氨水返蓝20秒（13）自来水洗3分钟（14）梯度酒精脱水（15）二甲苯1-2分钟（16）中性树胶封片（17）光镜下观察病理变化。3.3、PASM染色（1）2μm切片常规脱蜡至水；（2）1%高碘酸氧化20分钟（3）自来水冲洗；（4）现配制六胺银染色：60度温箱30min（随时镜下观察）；（5）自来水冲洗；（6）0.2%氯化金（5分钟）；（7）苏木素复染5分钟；（8）1%的盐酸酒精分化2秒；（9）Masson红复染2min，自来水洗；（10）快速脱水，透明，封片。3.4临床检测方法：3.4.1常规体格检查：受检者于晨起、空腹、脱鞋、免冠、穿衣相同等条件下测身高、体重，并计算出体重指数。体重指数(BMI)=体重(kg)/身高2(m2)。3.4.2生化指标的检测方法:获取所有受试者知情同意的情况下，于入院后24小时内，留取血尿标本待检测。每位受试者于采血前日19:00后禁食水，次晨7:00用EDTA抗凝管抽取肘静脉血8mL，经4000r/min离心后将血清置于-70℃的温冰箱中以待测。留取晨起清洁中段尿，尿标本容器为清洁一次性用品，上口直径大于4厘米，1小时内检测。24小时尿留取时，于清晨8:00排空膀胱，至次日8:00所有尿液收集后搅拌均匀，准确测量总量，记录具体数值后，取10ml待检。3.4.3cIMT的测定：受检者仰卧位，颈部垫一颈枕，颈部侧伸45度，用PHLIPSIE33超声多普勒8-14MHz高分辨率探头，测定颈总动脉与颈动脉分叉处平均内中膜最大值，所有受检者均由同一位有经验的专业医师完成。按2003年ESC高血压治疗指南标准,cIMT110mm判断为动脉壁增厚。4统计分析用SPSS13.0统计软件，计量资料以X±S表示，资料符合正态分布两组间均数比较采用两样本比较t检验，非正态分布资料转换正态分布资料后为采用两样本比较t检验，多组均数比较采用方差分析，不能用方差分析的采用秩和检验，两参数间的相关性用Pearson相关分析。P0.05为差异有统计学意义。2.结果1.各组受检者相关临床资料的比较（Tab.1)Tab.1：comparisonrelatedclinicaldataofCKD1、CKD2、CKD3、CKD4patients（x¯±s）指标CKD1(n=22)CKD2(n=21)CKD3(n=7)CKD4(n=3)BMI(kg/m2)23.89±1.2124.93±1.0624.23±1.1323.91±1.25FBG(mmol/L)4.65±1.124.94±0.974.57±1.224.71±0.98TG(mmol/L)2.88±0.642.63±0.35a2.30±0.46ac1.35±0.76bcfTC(mmol/L)5.82±1.615.32±1.77a4.57±1.82ac4.12±1.92bcfHDL-C(mmol/L)1.15±0.261.29±0.311.13±0.450.98±0.51收缩压（mmHg）130.87±12.23138.80±10.73a152.14±11.34bd163±10.54bdf舒张压（mmHg）77.08±9.2684.43±8.35a98.16±9.03bd109±12.31bdf血肌酐（μmol）56.23±6.32126.23±14.26276.23±19.12426.23±23.1224h尿蛋白定量（g/d）5.23±3.953.41±2.03b3.76±1.11bc2.33±1.43bdfCo2结合力（mmol/L）26.37±4.23b21.76±4.09b17.31±4.64bd13.02±3.89bdf血钾（mmol/L）4.41±1.204.62±1.14a4.92±1.34ac5.83±1.12bdeNote:vsCKD1group，aP0.05,bP0.01；vsCKD2group，cP0.05；dP0.01；vsCKD3group，eP0.05；fP0.01各期受检者，BMI、FBG的相互比较均无统计学意义（p0.05），差异无统计学意义；各组之间24小时尿蛋白定量两两比较CKD1期组CKD3期组CKD2期组CKD4期组，且均有统计学意义（P0.05）。血钾随肾脏病变进展的而增加，即各组之间血钾两两比较结果显示CKD4期组CKD3期组CKD2期组CKD1期组，且均有统计学意义（P0.05）。而CKD1期，CKD2期，CKD3期患者血钾水平虽然有明显升高趋势，但是血钾水平均处于正常范围内，CKD4期患者血钾水平明显高于正常水平;Co2结合力随肾脏病变程度的加重而降低，即各组之间Co2结合力两两比较结果示CKD1期组CKD2期组CKD3期组CKD4期组，且均有统计学意义（P0.01）。各组患者TG、TC结果两两比较示CKD4期组CKD3期组CKD2期组CKD1期组，且均有统计学意义（P0.05）。各组患者血压两两比较结果显示CKD4期组CKD3期组CKD2期组CKD1期组，且均有统计学意义（P0.05）。血肌酐水平随肾脏病变进展的而增加，即各组之间血肌酐水平两两比较结果显示CKD4期组CKD3期组CKD2期组CKD1期组，且均有统计学意义（P0.05）。而CKD1期，CKD2期，患者血钾水平虽然有明显升高趋势，但是血钾水平均处于正常范围内，CKD3期组，CKD4期患者血钾水平明显高于正常水平。2.CKD1期组、CKD2期组、CKD3期组、CKD4期组患者肾组织α-SMA的平均光密度值的相互比较（Tab.2)Tab.2:comparisontheaverageopticalofɑ-SMAinKidneytissuesandcarotidintimathicknessofCKD1、CKD2、CKD3、CKD4patients（x¯±s）组别动脉壁α-SMAcIMT(mm)肾小管损伤指数CKD10.2816±0.01610.9212±0.14010.1216±0.0161CKD20.2681±0.0990a1.6137±0.5014a0.1181±0.0390aCKD30.2172±0.0512ac2.2147±0.4116bd2.2712±0.0541bdCKD40.1916±0.0301ace2.8147±0.8016bdf3.1916±0.0401bdfNote:vsCKD1group，aP0.05，bP0.01；vsCKD2group，cP0.05，dP0.01；vsCKD3group，eP0.05；fP0.01所有标本组化以及PAS，PASM,染色均大致为同一平面的肾组织结构，镜下观察均有2条以上肾活检组织，每张片子内肾小球数目均大于5个，平均肾小球数目18±8个，CKD1期患者免疫组化示肾内小动脉壁各层可见棕黄色的颗粒物沉积，颗粒较粗大，图像分析结果平均光密度值为0.2816±0.0161。PAS以及PASM染色可见相应部位小动脉壁无明显增厚，动脉各层结构清晰，肾间质内可见少量炎性细胞浸润，无水肿，无萎缩，无纤维化，少量的尿蛋白以及红细胞管型。CKD2期患者免疫组化示肾内小动脉壁各层可见黄色的颗粒物沉积，但动脉中层颗粒物沉积较CKD1期患者稀疏，图像分析平均光密度值为0.2681±0.0990。PAS以及PASM染色可见相应部位小动脉壁内膜轻度增厚，中膜增厚，内膜厚度小于中膜。CKD3期组患者免疫组化示肾内小动脉壁各层可见黄色颗粒物沉积，中层颗粒物较稀疏，图像分析平均光密度值为0.2172±0.0512，PAS以及PASM染色可见组化染色组织相应部位小动脉壁内膜增厚较明显，中膜结构欠清晰，内膜厚度小于中膜。肾间质内可见弥漫的炎性细胞浸润，间质明显水肿，部分肾小管肥大，肾小管萎缩面积可达40%。CKD4期组患者免疫组化示肾内小动脉壁各层可见黄色颗粒物沉积，颗粒物十分稀疏，染色浅，图像分析平均光密度值为0.1916±0.030