梅毒的实验室诊断2017

梅毒的实验室诊断技术宿炳林雅安市名山区人民医院梅毒螺旋体的一般特性梅毒螺旋体是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体。细长，形似细密的弹簧，螺旋弯曲规则。有生活发育周期，分为颗粒期、球形体期及螺旋体期梅毒螺旋体对外界的抵抗力极弱，离体后1～2小时即死亡，对热和干燥特别敏感，在体外干燥环境下1～2小时或50℃加热5分钟即死亡。血液中4℃放置3天可死亡，因此血库4℃存放3天以上的血液无传染梅毒的危险。对肥皂水和常用化学消毒剂亦敏感，1%～2%石炭酸内数分钟就死亡。抗原分为三类：1.螺旋体表面特异性抗原:刺激机体产生特异的凝集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解螺旋体。2.螺旋体内类属抗原:可产生补体结合抗体，与非病原性螺旋体有交叉反应。3.螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原:复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素。可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂质抗原起沉淀反应(康氏试验)或补体结合反应(华氏试验)。梅毒的危害梅毒对人体的危害是很大的，不仅对患者的正常生活及身心影响都是极大的，而梅毒的症状也较为复杂，若不了解典型症状，则很容易错过早期梅毒的最佳治疗时机。1、传给伴侣或儿女，危害他人健康。造成早产、流产及死产，少数活产的胎儿也很可能有胎传性梅毒。2、皮损不适症状，影响正常的生活。生殖器出现的溃疡、脓疱、斑疹等不适症状，造成分泌物多，形成恐惧心理，影响正常生活。3、引发功能丧失，导致残疾或死亡。由于螺旋体变异后毒性增强，对身体器官的损伤程度加重，引起组织和器官破坏，功能丧失，导致残疾或死亡。部分梅毒患者往往还并有泌尿生殖系统的其他感染。梅毒的研究难点梅毒疫苗的研究近年来，尽管科学家们付出相当的努力,做出了大量探索，但迄今为止,国内外仍然没有切实有效的疫苗能预防梅毒螺旋体感染。阻碍疫苗研究进展的主要原因：无法体外培养。尚无法对其进行基因敲出和敲入。细菌外膜结构不稳定，实验中易被破坏梅毒的传播梅毒螺旋体只感染人类。因而梅毒患者是唯一传染源。先天性梅毒:也称胎传梅毒。螺旋体通过患病孕妇经胎盘进入胎儿血循环，引起胎儿的全身性感染。梅毒螺旋体在胎儿的肝、脾、肾上腺等器官大量繁殖导致流产、早产、死胎或出生活的梅毒儿。早期病变有梅毒性鼻炎，梅毒性天疱疮和斑丘疹:晚期呈现锯状形牙、先天性耳聋和间质性角膜炎等。获得性梅毒:又称后天梅毒。主要经性接触传染，少数也可通过接吻、哺乳和接触有传染性损害的病人带菌的日常用品而传染。此外，输带病原体的新鲜血也可传染(血源性传播）。梅毒的诊断病史临床表现、体征实验室检查（对确诊有决定性意义）1、梅毒螺旋体特异性抗原试验，梅毒螺旋体非特异性抗原试验2、生物学假阳性3、复查、定期检测梅毒的诊断与分期一期梅毒（1）病史：有感染史，潜伏期一般为2～3周。（2）临床表现：一期梅毒感染部位的溃疡或硬下疳，病损附近淋巴结肿大。（3）实验室检查：①暗视野显微镜检查：皮肤粘膜损害或淋巴结穿刺液可查见梅毒螺旋体。②梅毒血清学试验：梅毒血清学试验阳性。如感染不足2～3周，梅毒血清学试验可为阴性。应于感染4周后复查。疑似病例：具备⑴及⑵为疑似病例。确诊病例：疑似病例加⑶任何一项为确诊病例。梅毒的诊断与分期2、二期梅毒⑴病史：有感染史，可有一期梅毒史，病期2年以内。⑵临床表现：皮肤黏膜损害及淋巴结肿大。⑶实验室检查：①暗视野显微镜检查：二期皮疹尤其扁平湿疣、湿丘疹及粘膜斑，易查见梅毒螺旋体。②梅毒血清学试验（非梅毒螺旋体抗原试验及梅毒螺旋体抗原试验）为强阳性。疑似病例：具备⑴及⑵为疑似病例。确诊病例：疑似病例加⑶任何一项为确诊病例。梅毒的诊断与分期3、三期梅毒（晚期梅毒）⑴病史：有感染史，可有一期或二期梅毒史。病期2年以上。⑵临床表现：心脏、神经、胃、眼、耳受累及树胶肿损害等。⑶实验室检查：①梅毒血清学试验：非梅毒螺旋体抗原试验大多阳性，亦可阴性，梅毒螺旋体抗原试验为阳性。②组织病理检查：有三期梅毒的组织病理变化。③脑脊液检查：神经梅毒：淋巴细胞、蛋白量升高。疑似病例：具备⑴及⑵为疑似病例。确诊病例：疑似病例加⑶任何一项为确诊病例。梅毒的诊断与分期4、潜伏梅毒（隐性梅毒）⑴有感染史，可有一期、二期、或三期梅毒史。⑵无任何梅毒性的临床症状和体征。⑶非梅毒螺旋体抗原试验2次以上阳性或梅毒螺旋体抗原试验阳性（需排除生物学假阳性）。脑脊液检查阴性。⑷病期2年内为早期潜伏梅毒，2年以上为晚期潜伏梅毒。梅毒的诊断与分期5、先天梅毒（胎传梅毒）⑴生母为梅毒患者。⑵临床表现：①早期先天梅毒（2岁以内）：相似获得性二期梅毒，可有梅毒性鼻炎及喉炎、淋巴结肿大、肝脾肿大、贫血等。②晚期先天梅毒（2岁以上）：相似获得性三期梅毒，但以间质性角膜炎、赫秦生齿、马鞍鼻、神经性耳聋等为较常见的特征，还可出现皮肤、粘膜树胶肿及骨膜炎等。⑶实验室检查：①早期先天梅毒皮肤及粘膜损害中可查到梅毒螺旋体。②梅毒血清学试验阳性。梅毒的诊断与分期6、妊娠梅毒孕期发生或发现的活动性梅毒或潜伏梅毒称为妊娠梅毒。梅毒的实验室诊断技术显微镜检查采取一期及二期梅毒硬性下疳、梅毒疹的渗出物等1、暗视野显微镜检查：在皮损处，用玻片刮取组织渗出液或淋巴结穿刺液，见有活动的梅毒螺旋体。（诊断早期梅毒唯一快速，可靠的方法）2、免疫荧光染色：在荧光显微镜下可见绿色的梅毒螺旋体。3、活体组织检查梅毒螺旋体，如用银染色法或荧光抗体染色，可查见梅毒螺旋体，呈黑褐色，有螺旋结构，位于真皮毛细血管周围。梅毒的实验室诊断技术血清学实验梅毒螺旋体非特异性抗原实验VDRL,RPR,USR,TRUST等.梅毒螺旋体特异性抗原实验ELISA,CLIA,RT,WB等.TPPA/TPHA,FTA-ABS.梅毒的实验室诊断技术梅毒螺旋体非特异性抗原血清实验反应原理：抗原抗体结合形成复合物的絮状反应试验抗原基本成分：心磷脂（来自牛心肌）、卵磷脂和胆固醇（来自鸡蛋黄）梅毒的实验室诊断技术性病研究实验室试验(VDRL)试剂现配现用，血清需加热灭活，显微镜下观察结果用于检测脑脊液，是诊断神经性梅毒最特异的方法。快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)加入活性炭颗粒，肉眼可观察结果不加热血清反应素实验(USR)需现配现用，血清无需加热灭活，显微镜下观察结果甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）加入甲苯胺红颗粒，肉眼可观察结果梅毒的实验室诊断技术梅毒TRUST试剂梅毒TRUST试验震荡器水平旋转仪（旧）（新）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）：梅毒的实验室诊断技术加样：分别在相应的试验卡漆圈内加入待测样品及阴，阳性对照50ul，并均匀涂开。加抗原：用专用塑料滴管吸取抗原，分别垂直滴加一滴（20ul）于圈内血清中。反应：在23-29°C条件下，按每分钟100转动卡片8分钟立即在亮光下观察结果。梅毒的实验室诊断技术结果解读：阳性反应（+++-++++）：可见中等或较大的粉红色凝块。弱阳性反应（+-++）：可见较小的，明显的粉红色凝块。阴性反应：可见粉红色均匀沉淀物无凝集物。1:21:41:81:16（-）（+）梅毒的实验室诊断技术梅毒螺旋体非特异性抗原实验临床意义：1.适用于梅毒筛查，疗效观察，复发或再感染的检查。2.抗体水平与疾病严重程序成正比。3.评价监测治疗效果，此抗体治愈后可消失。4.此抗体不具有特异性。全身性疾病的活动期如：SLE，病毒性肝炎，活动性肺结核等，都有可能出现。梅毒的实验室诊断技术梅毒螺旋体特异性抗原血清实验以梅毒螺旋体本身或其成分为抗原，检测血清中特异性抗体。常用实验方法有：荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS），梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA），梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）酶联免疫吸附实验（ELISA),免疫层析法-快速检测（RT)，化学发光法(CLIA)，梅毒PCR法。意义：螺旋体抗原血清试验的敏感性及特异性均高。即使患者经过足够的抗梅毒治疗，一旦阳性，则不管治疗与否或疾病是否活动，通常终身保持阳性（只有在治愈的一期梅毒患者中．15%~25%的患者在2~3年后螺旋体抗原血清试验可以转为阴性）。所以主要用来做确诊试验，不能用于观察疗效、复发和再感染。梅毒的实验室诊断技术TPPA实验TPPA试剂梅毒的实验室诊断技术ELISA方法是近年来发展起来的梅毒血清学检测方法，广泛应用于各实验室进行梅毒初筛。它具有结果判断客观、价格低廉、可实现自动化等优点。部分人群（老年人，孕妇）具有一定假阳性率。此外，梅毒ELISA试剂的品牌众多，所用抗原及生产工艺各不相同，造成产品质量上的差异也较大，因此在选用时应充分做好评估工作。梅毒的实验室检测结果的临床解读梅毒初筛推荐用梅毒螺旋体特异性抗原血清试验。阴性可基本排除梅毒，阳性时再加做梅毒螺旋体非特异性抗原血清试验。两个试验均呈阳性反应，结合临床症状，应考虑进行治疗。若梅毒螺旋体特异性抗原血清试验阳性而梅毒螺旋体非特异性抗原血清试验阴性，应询问病人是否有既往的梅毒感染和治疗史；若病人否认有既往史，则应进行随访观察或用另一方法学的梅毒螺旋体特异性抗原血清试验进行重复测定（特别有争议时可选用FTA-ABS进行测定），并结合临床情况做出最终的判断。梅毒的实验室检测结果的临床解读最理想的是：以梅毒螺旋体特异性抗原血清试验和梅毒螺旋体非特异性抗原血清试验的组合进行初筛，再以另一方法学的梅毒螺旋体特异性抗原血清试验进行确认。梅毒的实验室检测结果的临床解读产前检查时也应选择敏感性高且不能区分既往和现症感染的梅毒螺旋体抗原血清试验。感染过梅毒的孕妇即使经过足量治疗而症状消失，在怀孕的应激状态下也易出现复发等情况。因此，无论是现在或者过去曾经感染梅毒，都应提醒临床特别加以注意。梅毒的实验室诊断推荐程序孕产妇梅毒检测及服务流程接受初次产前保健的孕产妇选用梅毒螺旋体抗原血清学实验进行筛查（如TPPA、ELISA或快速检测试验等）报告“梅毒螺旋体抗原血清学试验”阴性孕产妇按照未感染梅毒处理继续进行常规产前保健采用非梅毒螺旋体抗原血清学试验进行复检⊙既往感染梅毒⊙极早期梅毒⊙部分晚期梅毒诊断梅毒感染进行传染病信息报告立即给予孕妇一个疗程的治疗每月进行非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测连续三个月给予两个疗程的规范治疗；进行非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测和随访住院分娩，产时安全助产，所生儿童按要求处理阴性阳性阴性阳性先天梅毒实验室诊断程序梅毒感染产妇新生儿显微镜检测到梅毒螺旋体梅毒螺旋体IgM抗体检测阳性“非梅”实验阳性，滴度≥分娩前母体4倍且“TP”阳性随访中出现“非梅”实验由阴转阳性或滴度上升，且“TP”阳性，18月龄不能诊断，18月龄后“TP”仍然阳性先天梅毒任意一项阳性