Waters四极杆质谱培训

QuattroLC/Micro液质联用培训讲义©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训内容仪器质量校正定性实验调谐仪器定量实验维护及故障排除常用备件号©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正1.注射泵注入校正溶液，以碘化钠铯（异丙醇/水=1：1,NaI2ug/L,CsI50ng/L）溶液为例，流速5ul/min在质谱调机页面（MSTune）监看四个扫描质量：172.9,622.6,1072.2,1971.6确认讯号良好及注射针内样品量充足!©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正ESI+参数设置(参数设置确保校正样品最大质谱信号响应)50GasFlow-Cone350GasFlow-Desolvation200DesolvationTemp100SourceTemp0.3RFlens(V)3Extractor(V)30Cone(V)3.5Capillary(kV)©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正LMResolution1（15.0）HMResolution1（15.0）IonEnergy1（0.5）Entrance（50）Collision（2）Exit（50）LMResolution2（15.0）HMResolution2（15.0）IonEnergy2（0.5）此为第一段和第二段扫描模式参数。这是因为在进行质量校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。2.在质量分析器页面（Analyzer）设定以下的数值，括号内的数值即为设定值：©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正3.在质谱调机页面（MSTune）选择校正仪器以开启的质量校正页面。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正4.开启质量校正页面后，质量校正前请先确定目前仪器处于未校正的状态，所有六种校正都为未校正（NoCalibration），若不然则开启一个未校正（Uncal.cal）的档案。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正5.从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质量范围两千以内可选择Naics2。确认后按开始键。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正6.按开始键后会跳出自动校正选单请勾选所有种类（Type）处理程序部分选择讯号采集和校正（Acquire&Calibrate），可勾选打印报告（PrintReport）勾选完成后点压采集参数（AcquisitionParameters）！注意，在设定采集参数前请不要按OK键。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正staticcalibration静态精确校正:使四极杆质量分析器准确地‘停’在指定的质荷比上(如：Tuning，SIR，MRM)。scanningcalibration扫描校正:能确保所采集到的质谱峰进行准确质量测量(如在全扫描方式)scanspeedcompensation扫描速度补偿:当仪器进行快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正7.设定采集参数：选择适当的校正质量范围，校正大范围的全质量从22校正到2000，其余的参数可以使用预设参数default即可，设定完后按OK键。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正8.按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时按此页面OK键就会开始进行质量校正。9.当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新档（SaveAs）。输入所欲储存之文件名称后按OK即可。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正10.输入所欲储存之文件名称后按存盘即可，确认所有的扫描模式都已经被校正。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训仪器质量校正11.根据实验要求，分别按上述步骤实验LM/HM=15，LM/HM=14，LM/HM=13三条校正曲线。用途:根据实验需求分别调用不同分辨率的校正曲线.©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器1．全扫描fullscanMS1MS2CollisionCellScanning(m/zM)RFonly实验要点:通过调谐仪器各项参数,不同化合物ESI/APCI的响应,毛细管电压,锥孔电压,RFlens,离子能量,去溶剂化气温度,去溶剂化气流量,反吹气流量等参数,找出目标化合物最佳响应参数,发挥最佳仪器检测灵敏度.©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器样品：利血平标样,调谐最佳实验锥孔conevoltage(CV)、毛细管电压、RFlens、离子能量等参数，进行全扫描获最大分子离子峰609。样品：利血平1ppm(乙腈：水=1:1配置)ESI+scan:609(CV=45)©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器2．子离子扫描daughterscanMS1MS2CollisionCellStatic(m/z609.1)ScanningArgongasArgongasPrecursorPrecursorProductsProducts利血平标样,根据全扫描获得最佳实验锥孔CV、毛细管电压、RFlens、离子能量等参数，调谐碰撞能量collisionenergy(CE)、碰撞压力，进行子离子扫描实验准备。Daughterscan：609/195，448，397，174©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器碰撞压力3×10-3mbar©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器3.多反应监控MRMMS1MS2CollisionCellStaticm/z609.1Staticm/z195.1ArgongasArgongasPrecursorsPrecursorsProductProduct©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器样品1．利血平标样1ppm,根据全扫描获得最佳实验锥孔（CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行多反应监控MRM实验准备ESI+MRM:609/195(CV=45,CE=55)样品2.对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲酸丁酯1ppm实验，调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞能量（CE）ESI-对羟基苯甲酸甲酯MRM:151/136,92CV30/CE15/CE20对羟基苯甲酸丙酯MRM:179/136,92CV30/CE15/CE20对羟基苯甲酸丁酯MRM:193/136,92CV30/CE18/CE25©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器4．母离子扫描MS1MS2CollisionCellScanningStaticm/z92ArgongasArgongasPrecursorPrecursorProductsProducts样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸丁酯实验与氨基酸混合液。调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞能量（CE），对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲酸丁酯三种化合物有共同碎片92，可进行母离子扫描将其与氨基酸区别开。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器5.中性丢失扫描neutralloss：MS1MS2CollisionCellScanning(m/zM)Scanning(m/zM-46Da)ArgongasArgongasPrecursorPrecursorProductsProducts样品：混合氨基酸实验中性丢失46(甲酸)中性丢失63(甲酸+NH3)©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器常见17种混合氨基酸m/zM+H+天门冬氨酸(Asp或D)134丝氨酸(Ser或S)106谷氨酸(Glu或E)148甘氨酸(Gly或G)76*组氨酸(His或H)156*精氨酸(Arg或R)175苏氨酸(Thr或T)120丙氨酸(Ala或A)90●脯氨酸(Pro或P)116半胱氨酸(Cys或C)121▼酪氨酸(Tyr或Y)182缬氨酸(Val或V)118蛋氨酸(Met或M)150*赖氨酸(Lys或K)147异亮氨酸(Ile或I)132亮氨酸(Leu或L)132▼苯丙氨酸(Phe或F)166备注：*碱性氨基酸易中性丢失63(甲酸+NH3)▼带苯环氨基酸●仲氨酸易中性丢失46(甲酸)©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器6.混合扫描样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸丁酯采用母离子扫描氨基酸采用中性丢失扫描©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器Fullscan(MS),daughterscan(MS/MS),MRM实验参数设置建议如下：Fullscan(MS)MRM(MS/MS)daughterscan(MS/MS)©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器parentscan(MS/MS),neutrallossscan(MS/MS)实验参数设置建议如下：parentscan(MS/MS)neutrallossscan(MS/MS)©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器7.其它参数设置Interscandelaytime：一般设定为0.1s,如果选择正负离子同时扫描，扫描间隔要设为0.3s。Interchanneldelaytime：一般设定为0.02s。Dwelltime：停留时间，一般设定为1s，（最少不低于0.1s），较长的停留时间可以增加灵敏度。停留时间设置与色谱图采集点数有关，通常要求色谱图采集点数至少为15个，一个色谱图出峰时间15秒计，停留时间设定为1s,Dwelltime还与实验采集的通道有关,检测通道数目增加,要保证色谱图采集点数为15个,需适当减少Dwelltime时间。©2005WatersCorporationWaters四极杆质谱培训定性实验调谐仪器液相梯度：2695带11条梯度曲线，inletmethod编辑中可更改curve，从而实现液相梯度的调整。©2