DB21T 1730-2009 北虫草菌种生产技术规程

DB21DB21DB21辽宁省地方标准DB21/T1730—2009北虫草菌种生产技术规程2009-07-01发布2009-08-01实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T1730—2009I目次前言.................................................................................II1范围................................................................................12规范性引用文件......................................................................13定义................................................................................14制作要求............................................................................15标志................................................................................46贮存................................................................................4DB21/T1730—2009II前言本标准由葫芦岛市质量技术监督局提出并归口；本标准起草单位：中国农函大食用菌生态培训科研示范基地、沈阳旭源生物科技有限公司、葫芦岛农函大玄宇食用菌野驯繁育有限公司、沈阳农业大学食品学院、辽宁农业职业技术学院；本标准主要起草人：马世宇、董亚贤、赵春燕、李鸿相、林文飞、王振龙、牛长满、李春艳、刘艳梅、王宏伟。DB21/T1730—20091北虫草菌种生产技术规程1范围本标准规定了北虫草菌种定义，制作要求，质量要求，标志及贮存要求。本标准适用于北虫草菌种生产。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T191-2008外包装储运图示标志GB/T6388-1986运输包装收发货标志NY/T528-2002食用菌菌种生产技术规程《食用菌菌种管理办法》（中华人民共和国农业部第62号令发布3定义本标准采用下列术语和定义。3.1北虫草菌种北虫草生物学分类地位属子囊菌纲、肉座菌目、麦角菌科、虫草属、蛹虫草（Cordycepsmilitaris）。它是以中国北方野生蛹虫草为样本，采用组织或孢子分离法，经分离、纯化、驯化，选育获得的具有一致性、稳定性、结实性的真菌菌种（TypeCulture），经人工培养进一步扩大繁殖以及用于栽培生产的纯菌丝培养物，包括固体母种和液体生产种。3.2固体母种北虫草菌种的纯菌丝固体培养物及其继代固体培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位，又称一级菌种、试管菌种。3.3液体生产种由固体母种接种于液体培养基扩繁而来的纯菌丝液体培养物，培养容器为玻璃瓶或发酵罐，只用于生产不能用于菌种扩繁。4制作要求4.1技术人员具有生产北虫草菌种的专业技术人员。4.2环境条件4.2.1环境卫生场地要求远离禽畜设施、垃圾（粪便）场、无污水和其它污染源，通风、透光，地面及四周无灰尘、无飞虫、无螨类、无老鼠。4.2.2设置和布局DB21/T1730—20092按NY/T528中的4.3规定执行。4.2.3设备设施按NY/T528中的4.4规定执行。4.3菌种生产工艺流程4.3.1流程顺序培养基配制—→分装—→灭菌—→冷却—→接种—→培养—→检查—→成品4.3.2培养原料用马玲薯、玉米粉、蚕蛹粉、大豆粉、豆粕粉、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏（粉）、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1等为原料，经配制后做为北虫草的营养基质。其中，玉米粉、蚕蛹粉、大豆粉、豆粕粉为市售产品，要求无结块无变质；马玲薯出芽变绿的不能使用；蛋白胨、酵母膏（粉）为生化试剂；葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁为化学纯以上级试剂；琼脂、维生素B1为食品级以上产品；水为自来水等可饮用水。4.3.3培养容器4.3.3.1固体母种生产容器使用玻璃试管和胶塞，试管规格为18×180mm或20×200mm，试管塞一般采用胶塞，保存时间短直接用于液体生产种的可以使用棉塞，不能使用脱脂棉做试管塞。4.3.3.2液体生产种生产容器使用250ml、500ml玻璃输液瓶，用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封口。4.3.4培养基配制与分装4.3.4.1固体母种培养基配制与分装4.3.4.1.1固体母种培养基配方a）马铃薯200.0g，葡萄糖20.0g，，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，维生素B110.0mg，琼脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0。b）葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，琼脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0。4.3.4.1.2固体母种培养基配制与分装按配方称好各种原料，将马铃薯洗净去皮去芽眼（出芽、变绿禁用），称取200g，切成3～5mm薄片，加水1000ml，文火煮沸20～30分钟，用4层纱布过滤，滤液放回锅内，加入琼脂充分溶化，再依次加入其它成分，搅拌溶解后，加开水补足至1000ml，趁热分装试管，装量为试管的1/4～1/5，塞入胶塞。4.3.4.2液体生产种培养基配制与分装4.3.4.2.1液体生产种培育基配方a）马铃薯200.0g，蚕蛹粉10.0g，葡萄糖20.0g，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，维生素B150水1000ml，pH值6.0～7.0。b）葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，琼脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0。4.3.4.2.2液体生产种培养基配制与分装按配方称好各种原料，将马铃薯去皮去芽眼，称取200g，切成3～5mm厚的薄片，与蚕蛹粉（或其它配方中的玉米粉、大豆粉、豆粕粉等农产品原料）一起放入锅中，文火煮沸20～30分钟，用8层纱布过滤，滤液用开水补足至1000毫升，再依次加入其它成分，搅拌溶解，然后装入玻璃输液瓶中，液体装量不宜超过容器总容积的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封口。4.3.5培养基灭菌与冷却4.3.5.1固体母种培养基灭菌与冷却按NY/T528中的4.7.5规定执行。DB21/T1730—200934.3.5.2液体生产种培养基灭菌与冷却采用常压灭菌或高压蒸汽灭菌，灭菌方法和规程可参照固体母种培养基灭菌。要点为：高压蒸汽灭菌0.11MPa保持30分钟；常压灭菌100℃保持6～8小时；高压蒸汽灭菌一定要等灭菌器的压力降为零时，才可以开启灭菌器，取出菌种瓶；菌种瓶冷却至室温后方可接种。4.3.5.3培养基灭菌效果的检查按NY/T528中的4.7.6规定执行。4.3.6接种4.3.6.1固体母种接种接种方法按NY/T528中的4.7.8规定执行。4.3.6.2液体生产种接种在无菌操作条件下，用接种钩从母种斜面中切取1cm²菌面(可稍带培养基)放入液体菌种培养瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封扎瓶口，每支母种可接种10～15瓶液体生产种。4.3.7菌种培养4.3.7.1培养条件4.3.7.1.1菌种培养温度18～23℃。4.3.7.1.2菌种培养湿度60～65%。4.3.7.1.3菌种培养光线为黑暗条件。4.3.7.1.4菌种培养空气为环境清新无异味。4.3.7.2培养时间4.3.7.2.1固体母种7～10天可长满试管。4.3.7.2.2液体生产种的生产，主要采用摇床振荡培养，震荡频率依据摇床性能和菌种性质等进行适当调节，要求培养的菌种菌球密度大、菌丝挂瓶壁少、培养周期短以及接种后定殖能力强、发菌快。一般往复式摇床60～70次/分钟，旋转式摇床100～120转/分钟，振荡培养时间为4～6天；没有设备条件的可采用静止培养，静止培养时间为7～10天。4.3.8培养期的检查4.3.8.1检查次数培养期间定期检查，一般每天检查2次，及时淘汰染菌或劣势菌种。4.3.8.2质量要求4.3.8.2.1固体母种质量要求固体母种质量要求应符合表１的规定。表１固体母种质量要求项目要求菌丝菌丝长满基质斜面，菌苔粉末状或短绒毛状，橘黄色或橘红色，厚薄均匀一致，无明显白色绒毛状气生菌丝；无杂菌；菌苔底部呈黄色原基母种试管在2～4℃的条件下长时间保存可出现原基转代次数一代母种转代不超过3次镜检菌丝丝状，均匀一致，无杂菌4.3.8.2.2液体生产种质量要求液体生产种质量要求应符合表２的规定。表２液体生产种质量要求项目要求菌丝菌丝絮状或小球状，均匀一致，挂瓶壁的菌丝短绒毛状，淡黄色DB21/T1730—20094杂质无任何杂质培养液菌液澄清透明，菌球在菌液中分散均匀、无上浮、无沉淀气味有北虫草独有的菌香味、无异味镜检菌丝直径与分枝均匀一致，无其它真菌和细菌5标志5.1合格的菌种必须贴有标签，应符合GB/T191、GB/T6388的规定。5.2标签应标明厂名、厂址、生产单位、接种日期、保质期、注意事项等。6贮存6.1固体母种经储存一段时间后再使用，应进行转代扩繁和出草试验。6.2液体生产种在2～4℃环境中保质期7～10天。