SNT 2864-2011 囊(尾蚴)虫病检疫技术规范

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２８６４—２０１１囊（尾蚴）虫病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犮狔狊狋犻犮犲狉犮狅狊犻狊２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９和ＳＮ／Ｔ１２２５—２００７给出的规则起草。本标准参照国际动物卫生组织（ＯＩＥ）公布的《ＭａｎｕａｌｏｆＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＴｅｓｔｓａｎｄＶａｃｃｉｎｅｓｆｏｒＴｅｒｒｅｓｔｒｉａｌＡｎｉｍａｌｓ》（２００８版）中２．９．５章Ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｏｓｉｓ，结合我国囊（尾蚴）虫病检疫工作实践编写。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河南出入境检验检疫局、中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本标准主要起草人：张巨洲、张子宏、徐超、李应国、郑腾、李国全、苗丽、李轲、杨向莹、杨娜、刘生峰。Ⅰ犛犖／犜２８６４—２０１１囊（尾蚴）虫病检疫技术规范１　范围本标准规定了动物囊（尾蚴）虫病宰后检疫，病原检查、鉴定和囊（尾蚴）虫病抗体检测（ＥＬＩＳＡ）方法。本标准适用于动物（猪、牛、羊）的囊（尾蚴）虫病检疫。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ１８５４４　猪囊尾蚴病诊断技术ＮＹ／Ｔ４６７　畜禽屠宰卫生检疫规范３　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。３．１囊尾蚴　犆狔狊狋犻犮犲狉犮狌狊绦虫（狋犪狆犲狑狅狉犿）的中绦期幼虫称为囊尾蚴。参见附录Ａ。３．２猪囊尾蚴　犆狔狊狋犻犮犲狉犮狌狊犮犲犾犾狌犾狅狊犪犲猪囊尾蚴，是猪带绦虫（犜犪犲狀犻犪狊狅犾犻狌犿）的中绦期幼虫。成熟的猪囊尾蚴，外形椭圆，呈白色半透明的囊泡状，约黄豆大，长径６ｍｍ～１０ｍｍ，短径约５ｍｍ，囊内充满液体，囊壁为一层薄膜，壁上有一个圆形黍粒大的乳白色小结，其内有一内翻的头节，头节上有四个圆形的吸盘，前端顶突上有许多个角质小钩，分为两圈排列。３．３牛囊尾蚴　犆狔狊狋犻犮犲狉犮狌狊犫狅狏犻狊牛囊尾蚴（犆狔狊狋犻犮犲狉犮狌狊犫狅狏犻狊），是牛带绦虫（犜犪犲狀犻犪狊犪犵犻狀犪狋犪）的中绦期幼虫。外形与猪囊尾蚴相似，半透明椭圆形囊泡，囊泡白色，长约７．５ｍｍ～９ｍｍ，宽３ｍｍ～６ｍｍ。内有一个乳白色头节，头节上有四个吸盘，但无顶突和钩。３．４羊囊尾蚴　犆狔狊狋犻犮犲狉犮狌狊狅狏犻狊羊囊尾蚴（犆狔狊狋犻犮犲狉犮狌狊狅狏犻狊），是羊带绦虫（犜犪犲狀犻犪狅狏犻狊）的中绦期幼虫。呈囊泡状，豌豆至鸡蛋大小，内含透明液体，囊壁上附有一个乳白色且具有细长颈部的头节。４　动物宰后检疫４．１　囊尾蚴在宿主体内的嗜生部位４．１．１　猪囊尾蚴：猪囊尾蚴主要嗜生部位为咬肌、深腰肌和膈肌，其他可检部位为心肌、肩胛外侧肌和１犛犖／犜２８６４—２０１１股部内侧肌等。４．１．２　牛囊尾蚴：牛囊尾蚴的主要嗜生部位为咬肌、舌肌、深腰肌和膈肌。小于６周或小于３２ｋｇ犊牛通常不检查。４．１．３　羊囊尾蚴：主要嗜生部位为膈肌、心肌、肝脏。羊在肠系膜和胃肠浆膜等腹腔浆膜上可见大小不一的成熟囊尾蚴囊泡。严重时，一只羊可见几十甚至上百个囊泡，成串悬挂在腹腔浆膜上，并可见局部腹膜炎。４．２　动物宰后检查程序４．２．１　对切开的畜体肌肉表面和内脏器官进行观察。４．２．２　检查咬肌、两侧腰肌、膈肌和股内侧肌。必要时剖检肩胛外侧肌。每侧需作一个或两个切口。４．２．３　观察、触摸舌部，必要时纵向切开舌根检查。４．２．４　心包膜和心脏检查。心脏先检查外部，沿心间隔切开后反转检查内部。４．２．５　去除腹膜后，观察横膈膜，必要时切开检查。４．２．６　食道和肝脏的观察。囊尾蚴在肝内移行时，破坏肝组织，形成孔道，在肝被膜下和实质内，可见直径１ｍｍ～２ｍｍ的弯曲索状病灶，初期呈暗红色，后期转为黄褐色。肝脏表面可见数量不等、大小不一并被包膜包裹的虫体。４．２．７　根据屠宰动物的种类，按照囊尾蚴在不同宿主体内的嗜生部位，重点检查。如果发现畜体有可疑囊泡，该批次畜体则需取样进行实验室检测。４．３　结果判定如果猪、牛、羊酮体及脏器内发现有疑似囊（尾蚴）虫结节者，可进行初判并采集样品送实验室确诊。５　实验室诊断技术５．１　样品处理与病原鉴定５．１．１　样品采集与处理５．１．１．１　样品采集采集猪、牛、羊的咬肌、舌肌、内腰肌、隔肌、肋间肌、肩胛肌等，亦可采集脑、心、肝、肺等组织。５．１．１．２　样品处理将有疑似囊尾蚴的组织样品，用手术刀和镊子剥离疑似囊尾蚴，生理盐水洗净后滤纸吸干。５．１．２　病原鉴定５．１．２．１　压片制备用剪刀剪开囊壁，取出完整的头节，再以滤纸吸干囊液后，将其置于两张载玻片之间，于两张载玻片间加入１滴～２滴生理盐水，压片后置于显微镜下镜检。５．１．２．２　镜检以低倍（物镜８倍、目镜５倍）观察囊尾蚴头节的完整性。５．１．２．３　结果判定成熟的猪囊尾蚴为椭圆形，（６ｍｍ～１０ｍｍ）×５ｍｍ，半透明的囊壁内充满液体，上有一个黍粒大２犛犖／犜２８６４—２０１１小的白色小结节即为头节和颈节。脑内寄生的则为圆球形。低倍镜检，可见到头节的顶部有顶突，顶突上有内外两圈排列整齐的小钩，顶突的稍下方有四个均等的圆盘状吸盘。牛囊尾蚴外形与猪囊尾蚴相似，半透明椭圆形囊泡，囊泡白色，长约７．５ｍｍ～９ｍｍ，宽３ｍｍ～６ｍｍ。内有一个乳白色头节，头节上有四个吸盘，但无顶突和钩。羊囊尾蚴囊壁上附有一个乳白色且具有细长颈部的头节。具有以上特征者即可判定为囊（尾蚴）虫病。５．２　酶联免疫吸附试验（犈犔犐犛犃）５．２．１　器材ＥＬＩＳＡ反应板、酶联免疫检测仪、加样器、洗板机、１０ｃｍ×１ｃｍ普通滤纸条等。５．２．２　试剂猪囊尾蚴层析抗原、葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记物（ＨＲＰＳＰＡ）、猪囊尾蚴标准阳性全血滤纸片、猪囊尾蚴标准阴性全血滤纸片。囊（尾蚴）虫病酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法检测动物囊（尾蚴）虫抗体，因动物种类和定性或定量检验目的的不同，允许按照试剂的说明书操作并进行结果判定。５．２．３　被检猪全血血片将１０ｃｍ×１ｃｍ普通滤纸条的一端标记被检猪号码，另一端吸取被检猪任何部位血液１滴～２滴。于室内阴干后，置于４℃冰箱内保存。５．２．４　溶液配制抗原包被液、稀释液、底物溶液、终止液等溶液配制方法见附录Ｂ。５．２．５　操作方法５．２．５．１　抗原包被首先用抗原包被液（见Ｂ．１）洗涤ＥＬＩＳＡ反应板各孔三次。用抗原包被液将抗原按使用说明书稀释至工作浓度。用加样器加工作浓度抗原至ＥＬＩＳＡ反应板各孔内，每孔１００μＬ，加盖后置于室温（１１℃～２９℃）过夜。注：包被过夜的ＥＬＩＳＡ反应板加盖后置于冰箱冷冻室内（可保存６个月）。或将包被过夜的ＥＬＩＳＡ反应板按５．２．５．２方法洗涤后，晾干，装入塑料袋内密封置于４℃冰箱内（可保存１个月）。５．２．５．２　洗涤弃去包被过夜的ＥＬＩＳＡ反应板孔内的抗原包被液，每孔加入洗涤液（见Ｂ．２）３００μＬ，浸泡３ｍｉｎ后，弃去洗涤液，并用滤纸吸去残留的洗涤液和驱除孔内气泡，重新加入洗涤液，按同样方法共洗涤３次。５．２．５．３　血片的处理将被检血片、标准阴性血片及标准阳性血片均剪成１ｃｍ×１ｃｍ大小，分别置于青霉素瓶内，每１ｃｍ×１ｃｍ血片加入稀释液（见Ｂ．２）３００μＬ，浸泡２０ｍｉｎ，血片变白后即可。５．２．５．４　加样、处理每份被检血片浸液加两孔，每孔１００μＬ。标准阴性、标准阳性对照孔加相应血片浸液两孔，每孔３犛犖／犜２８６４—２０１１１００μＬ。空白对照孔加稀释液两孔，每孔１００μＬ。加样后加盖，室温（１１℃～２９℃）放置３０ｍｉｎ后洗涤。洗涤方法同５．２．５．２。加酶标ＳＰＡ，ＨＲＰＳＰＡ标准物按使用说明书以稀释液稀释至工作浓度。被检孔、标准阴性孔和标准阳性孔每孔加ＨＲＰＳＰＡ标记物１００μＬ。空白对照孔亦加１００μＬ。加盖，室温（１１℃～２９℃）放置３０ｍｉｎ后洗涤。洗涤方法同５．２．５．２。每孔加现配制的底物溶液（见Ｂ．３）１００μＬ，于室温（１１℃～２９℃）放置１０ｍｉｎ后，每孔加终止液（见Ｂ．４）５０μＬ，以终止反应。５．２．６　判定在对照孔成立的前提下，即标准阳性孔呈深黄色，标准阴性孔呈无色或浅黄色，空白孔呈无色。判定结果。用酶标仪以４９０ｎｍ波长测定。以空白对照孔调零，测定被检孔透光（ＯＤ）值。当ＯＤ≤０．２２，判定为ＥＬＩＳＡ法阴性（－）；当ＯＤ值≥０．２６，判定为ＥＬＩＳＡ法阳性（＋）；当０．２３≤ＯＤ值≤０．２５，判定为ＥＬＩＳＡ法结果疑似（±），疑似者用该份血清复检一次，仍为疑似则判为阳性。４犛犖／犜２８６４—２０１１附　录　犃（资料性附录）囊（尾蚴）虫病概述犃．１　囊（尾蚴）虫病简介囊（尾蚴）虫病（ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｏｓｉｓ）是猪、牛、羊等几十种哺乳动物和人的常见人畜共患寄生虫病。其病原为扁形动物门绦虫纲（ＣｌａｓｓＣｅｓｔｏｄａ）的各种绦虫（犮犲狊狋狅犱犲）的中绦期幼虫———囊尾蚴（犆狔狊狋犻犮犲狉犮狌狊）。该病在世界范围内均有发生，但主要在非洲、拉丁美洲、高加索地区、南／中亚、东地中海国家和许多欧洲国家。在国内，常见的是人畜共患的猪囊（尾蚴）虫病和牛囊（尾蚴）虫病。多数囊尾蚴不引起或仅仅引起轻微的病变。但个别囊尾蚴能引起严重症状。囊（尾蚴）虫寄生在人和家畜的肌肉组织和眼部则会引起皮下或肌肉囊（尾蚴）虫病和眼囊（尾蚴）虫病。如：猪囊尾蚴可能导致人的脑囊（尾蚴）虫病，严重时导致视觉损伤、神经失调，甚至有致死风险。销毁感染囊尾蚴虫病动物的胴体及内脏会导致巨额的经济损失。囊尾蚴是绦虫的中绦期幼虫。成年绦虫背腹扁平，长度从２０ｃｍ～５０ｃｍ到几米。头节上有四个吸盘和可能有一个顶突。顶突周围常有两圈小钩。小钩的长度和数量与品种特征有关。头节后是颈节，其后是由未成熟节片、成熟节片和最后的孕节组成。囊尾蚴由一个充满液体的囊球组成，头节的构造和成虫一样。囊尾蚴在死后和肉类检查中变得粗大可见，但是轻微感染常被漏检。中枢神经感染可通过成像技术诊断。犃．２　囊（尾蚴）虫病临床症状犃．２．１　猪囊（尾蚴）虫病一般无明显症状，严重感染的猪营养不良、生长受阻、贫血和肌肉水肿等。由于病猪不同部位的肌肉水肿，导致两肩显著外展，或臀部异常肥胖宽阔，或头部呈大胖脸形或前胸、后躯及四肢异常肥大，体中部窄细。整个猪体从背面观呈哑铃状或葫芦形，前面看呈狮子头形。病猪走路前肢僵硬，后肢不灵活，左右摇摆，似“醉酒状”，不爱活动，反应迟钝。严重感染时器官可出现相应的症状，如呼吸困难，声音嘶哑与吞咽困难，视力消失及一些神经症状，有时产生急性脑炎而突然死亡。外观患猪的舌底、舌的边缘和舌的系带部有突出的白色囊泡，触摸猪的舌底和舌的系带部可感觉到游离性的米粒大小的硬结。生前诊断比较困难，只有当舌部浅表寄生时，触诊可发现结节，但阴性者不能排除感染。犃．２．２　牛囊（尾蚴）虫病除个别感染特别严重的外，一般均无明显症状。犊牛则常有明显的症状。盲眼、肌肉僵硬，肩部肌肉水肿，两肩增宽，臀部隆，咀嚼、吞咽困难，声音嘶哑，出现肌肉痉挛、震颤，行走不稳等疑似症状。犃．２．３　羊囊（尾蚴）虫病成年羊除个别特别严重的感染外，一般均无明显症状。羔羊常表现为虚弱、消瘦、黄疸；如有急性腹膜炎时，体温升高并有腹水，约２周后可转变成慢性病程。羊囊尾蚴俗称水铃铛，呈囊泡状，豌豆至鸡蛋大小，内含透明液体，囊壁上附有一个乳白色且具有细长颈部的头节。主要侵害绵羊（２月龄～１２月龄的羊感染率最高）。５犛犖／犜２８６４—２０１１犃．３　常见绦虫的幼虫示意图图犃．１　常见绦虫的幼虫示意图６犛犖／犜２８６４—２０１１附　录　犅（规范性附录）溶液配制犅．１　抗原包被液（碳酸盐缓冲液，狆犎９．６）Ａ：碳酸钠（Ｎａ２ＣＯ３）　　　　　　　　　３．１８ｇ　　　　　蒸馏水３００ｍＬＢ：碳酸氢钠（ＮａＨＣＯ３）５．８６ｇ蒸馏水７００ｍＬＡ，Ｂ两液混合即为抗原包被液，测ｐ