提脓祛腐煨脓长肉法对慢性难愈合创面成果汇报

“提脓祛腐，煨脓长肉”法对慢性难愈合创面AGEs/RAGE/NF-κB信号通路的影响课题成果汇报项目组成员姓名单位职务主要贡献项目负责人主治医师组织实施项目主要参加人主任医师项目指导副主任医师项目实施护师动物实验主治医师动物实验医师动物实验目录CONTECTS04030201研究方法研究结果课题结论学术价值社会效益0501研究方法ResearchTechniqueLoremipsumdolorsitamet,consecteturadipiscingelit,seddoeiusmodtemporincididuntutlaboreetdoloremagnaaliqua.Utenimadminimveniam,quisnostrud实验材料ExperimentalMaterials石香膏贝复济50只清洁级雄性SD大鼠，体重300g-350g，由贵州医科大学实验动物中心（贵州省实验动物工程技术中心）提供，生产许可证号：SCXK（黔）2012-0001，于贵州医科大学实验动物中心实验室分笼饲养核因子－κBP65一抗，内皮型一氧化氮合酶一抗，荧光定量PCR试剂，sybrgreenI，RT试剂，DEPC处理水，RNA提取剂（TRIzol）实时荧光定量PCR仪，电泳仪，凝胶成像仪，GDS8000凝胶扫描系统受试药物实验动物主要试剂主要仪器石香膏制备过程将乳香150g、没药150g、赤石脂150g、栀子150g、煅龙骨150g、冰片150g一同打成细粉末状以方便制备。将约2L麻油倒入锅中加热，充分加热至冒烟后，缓慢加入炉甘石500g并充分搅拌，防止锅内液体起泡溢出。待炉甘石搅拌均匀后，分别倒入已经磨好的乳香粉、没药粉、赤石脂粉、栀子粉、煅龙骨粉、冰片粉，持续充分搅匀，约一小时熬成面糊状约即可，此时加入约200g蜂蜡，待冷却后石香膏即制备完成。此操作于贵州省中医医院中药制剂室制备。实验动物分组及造模50只清洁级雄性SD大鼠分笼饲养，维持饲养环境稳定，湿度50%左右，温度25℃左右，明暗周期12h，自由饮水和进食，适应性喂养3周后称重记录，随机分为5组，分别为正常对照组（正常组）、正常创面对照组（正常对照组）、慢性难愈合创面组（难愈合组）、贝复济处理慢性难愈合创面组（贝复济组）、石香膏处理慢性难愈合创面组（石香膏组），共设2时间点（分别为造模后7d/14d）,每组每时间点5只，共50只造模前禁食18h，可自由饮水；造模前先测量大鼠体重，并记录，比较大鼠前后体重有无显著性差异。用采血针于尾静脉处采血，血糖仪测定血糖，分别记录各大鼠血糖值；然后以pH值为4.0，浓度为0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液溶解链脲佐菌素（STZ）配制成1%溶液，将配置好的溶液以65mg/kg的标准一次性腹腔注射于难愈合组、贝复济组、石香膏组大鼠体内，72h后用上述测血糖方法测量，若随机血糖值＞16.7mmol/L，即为诱导糖尿病模型。若测得随机血糖＞33.3mmol/L，按血糖升高程度，肌肉注射诺和灵R（1-4U/d）控制血糖，提高实验数据准确性，减少误差。正常对照组组大鼠仅注射浓度为0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液作为对照。实验动物分组建立诱导糖尿病大鼠模型Groupingandmodelingofexperimentalanimals实验动物分组及造模Groupingandmodelingofexperimentalanimals注射一周后，剃去正常对照组、难愈合组、贝复济组、石香膏组大鼠背部毛发，予以硫化钡再次脱毛，用盐酸氯胺酮（100mg/kg）腹腔注射进行麻醉，将腰椎正中偏上处定为造模区标记一直径约3cm的圆形区域，术前备皮，在标准无菌操作下沿圆形区域剪去皮肤、皮下组织直至显露肌筋膜，形成大鼠全层皮肤缺损开放性创面。待大鼠创面充分止血后用药，给药剂量按《中药药理研究方法学》所提供的“实验动物与人按体表面积比等效剂量换算比率表”倍数折算，计算出人鼠等效剂量为11.61g/kg。贝复济组创面外用贝复济约0.2ml，石香膏组创面外敷石香膏厚度约2mm，保证完全覆盖创面，正常对照组、难愈合组、贝复济组、石香膏组均以两层无污染清洁纱布敷料覆盖，胶布充分固定牢靠。从术前1天起开始计算，连续4天对各大鼠肌注青霉素（4000U/只），防止感染。饲养方法同前。建立慢性难愈合创面大鼠模型动物用药标本采集分别在创面造模后第7天、第14天予以盐酸氯胺酮(100mg/kg)腹腔注射进行麻醉，取正常对照组、难愈合组、贝复济组、石香膏组大鼠背部创面肉芽组织标本。部分肉芽组织标本用10%甲醛溶液固定，制成石蜡块保存；部分置于-70℃冰箱中保存。检测用切片机将石蜡块中的组织切成5μm厚的薄片，经烤片、脱蜡、复水后HE染色，光镜下观察大鼠背部创面生长情况病理变化。使用Trizol法提取大鼠背部创面肉芽组织标本中的RNA统计学分析原始数据采用Excel表格进行保存，采用IBMSPSSStatisticsforwindows22.0进行统计分析。计量资料以±s表示，先进行正态性分布及方差齐性检验，若满足正态性和方差齐性，多组比较采用方差分析；不满足正态性和方差分析，采用非参数多重比较，P＜0.05为差异有统计学意义。02研究结论AnalysisconclusionLoremipsumdolorsitamet,consecteturadipiscingelit,seddoeiusmodtemporincididuntutlaboreetdoloremagnaaliqua.Utenimadminimveniam,quisnostrud创面大体形态观察正常对照组（B1、B2）与难愈合组（C1、C2）在造模14天后创面仍未完全修复，而贝复济组（D1、D2）与石香膏组（E1、E2）在造模14天后创面修复情况较好，且石香膏组比贝复济组愈合情况更好。创面组织镜下观察正常对照组（B1、B2）与难愈合组（C1、C2）在造模14天后镜下仍可见大片未修复组织，而贝复济组（D1、D2）与石香膏组（E1、E2）在造模14天后创面组织修复情况较好，镜下可见较多的纤维细胞和成纤维细胞，促进新生血管形成及创面修复。对比两者，可见石香膏组修复情况较好。干预7/14天后各组RAGEmRNA、NF－κBp65mRNA和eNOSmRNA相对表达量（±s）注：与同时间点正常对照组比较：（1）P＜0.01；与同时间点难愈合组比较：（2）P＜0.01；与同时间点贝复济组比较：（3）P＜0.01。03课题结论SubjectConclusionLoremipsumdolorsitamet,consecteturadipiscingelit,seddoeiusmodtemporincididuntutlaboreetdoloremagnaaliqua.Utenimadminimveniam,quisnostrud课题结论本次研究通过建立实验性慢性难愈合创面大鼠模型，观察了中药“石香膏”外敷对其创面RAGE、NF－κBp65、eNOS信号通路mRNA表达情况。研究表明，和慢性难愈合创面组相比，石香膏处理慢性难愈合创面组与贝复济处理慢性难愈合创面组RAGEmRNA、NF－κBp65mRNA相对表达量降低，eNOSmRNA相对表达量升高。其中RAGEmRNA、NF－κBp65mRNA降低程度在7天、14天时石香膏处理慢性难愈合创面组均优于贝复济处理慢性难愈合创面组。而对于eNOSmRNA，在7天时石香膏处理慢性难愈合创面组其表达量优于贝复济组，在14天时，两者未见明显差异。综上所述，石香膏对于难愈性创面的修复效果优于贝复济。本次动物实验研究初步阐明了中药石香膏对于慢性难愈合创面具有修复作用，推测其作用机制之一为抑制RAGEmRNA、NF－κBp65mRNA表达，减少细胞组织损害，从而促进eNOSmRNA的表达，增加NO分泌，有助于创面的血管新生和伤口愈合，为临床上中医治疗慢性难愈合创面开拓了新的思路与方法。04学术价值AcademicValueLoremipsumdolorsitamet,consecteturadipiscingelit,seddoeiusmodtemporincididuntutlaboreetdoloremagnaaliqua.Utenimadminimveniam,quisnostrud学术价值三、培养硕士研究生一名四、重点学科一、发表SCI论文一篇二、发表北大核心论文一篇05社会效益Post-workplanLoremipsumdolorsitamet,consecteturadipiscingelit,seddoeiusmodtemporincididuntutlaboreetdoloremagnaaliqua.Utenimadminimveniam,quisnostrud社会效益1、本病在全国范围甚至全世界的发病率非常高，该项目的研究成功，能更好促进创面修复，减轻患者痛苦，具有较好的社会和经济效益。2、目前该中药制剂已经初步运用于临床并取得了良好的效果，下一步我们可以将该方更广泛地运用于临床中，更好地造福广大人民群众。感谢您的耐心观看Thankyouforyourpatience贵州中医药大学第一附属医院汇报人：费冀Loremipsumdolorsitamet,consecteturadipiscingelit,seddoeiusmodtemporincididuntutlaboreetdoloremagnaaliqua.Utenimadminimveniam,quisnostrud