基因工程乳酸菌表达载体的构建与应用

基因工程乳酸菌表达载体的构建与应用研究院穆熙军提供营养促进生长维持肠道菌群平衡刺激肠道免疫组织产生免疫球蛋白降低动物血清胆固醇含量促进小肠局部细胞免疫和体液免疫乳酸菌＋抗原来源（病原体）抗原名称宿主菌猪源A组轮状病毒（PRV）VP7嗜酸乳杆菌VP4嗜酸乳杆菌，乳酸乳球菌猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白乳酸乳球菌，干酪乳杆菌N蛋白乳酸乳球菌，干酪乳杆菌流行性腹泻病毒（PEDV）S糖蛋白（COE基因）乳酸乳球菌S蛋白（ps420基因）乳酸乳球菌新城疫病毒NDV融合蛋白（F蛋白）嗜酸乳杆菌血凝素一神经氨酸酶(HN)嗜酸乳杆菌鹅细小病毒(GPv)VP3乳酸杆菌，乳酸乳球菌犬细小病毒CPVVP2乳酸乳球菌猪细小病毒（PPV）VP2干酪乳杆菌禽流感病毒H5N1HA1蛋白乳酸乳球菌幽门螺杆菌黏附素alpA乳酸乳球菌中性粒细胞激活蛋白NAP乳酸乳球菌尿素酶UreB亚基乳酸乳球菌热休克蛋白A（hspA）乳酸乳球菌鼠疫耶尔森菌V乳酸乳球菌大肠杆菌O157:H7EspA乳酸乳球菌产肠毒素大肠杆菌ETEC黏附素FaeG乳酸乳球菌铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF/H乳酸乳球菌炭疽杆菌PA植物乳杆菌，乳酸乳球菌禽肠炎沙门氏菌外膜蛋白OMPX乳酸乳球菌弓形虫棒状体蛋白1、膜蛋白P30乳酸乳球菌球虫TA4糖蛋白乳酸乳球菌SO7嗜酸乳杆菌表达抗原蛋白……口服疫苗表达细胞因子细胞因子来源宿主菌白细胞介素-12小鼠乳酸乳球菌白细胞介素-10人干酪乳酸杆菌人β-干扰素人乳酸乳球菌内皮抑素大鼠乳酸乳球菌多肽来源宿主菌乳链菌肽NisA乳酸乳球菌NIZOR5乳酸乳球菌乳链菌肽NisZ乳酸乳球菌AL2乳酸乳球菌Apidaecin乳酸乳球菌乳酸乳球菌Nisin—Apidaecin乳酸乳球菌HZL-NA乳酸乳球菌β-防御素鸡肝乳酸乳球菌抗菌肽Bactenecin7化学合成乳酸乳球菌表达抗菌多肽……表达活性酶/功能性蛋白酶/蛋白/激素来源宿主菌肌酐水解酶恶臭假单胞菌1978保加利亚乳酸杆菌斯氏假单胞菌A1501乳酸乳球菌尿酸氧化酶产朊假丝酵母乳酸乳球菌纤维素酶玉米青贮专用乳酸菌β-葡聚糖酶地衣芽孢杆菌乳酸乳球菌苯丙氨酸脱氢酶乳酸乳球菌血红素加氧酶大鼠乳酸乳球菌UDP-葡萄糖焦磷酸化酶大肠杆菌BL21乳酸乳球菌猪乳铁蛋白LF猪干酪乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、戊糖乳杆菌GFP果糖乳杆菌、氏乳杆菌乳亚种嗜酸乳杆菌乳酸杆菌降钙素鲑鱼乳酸乳球菌胰岛素人乳酸乳球菌，干酪乳杆菌……文献分析1文献分析2文献分析3宝来利来研发中心芽孢杆菌芽孢杆菌Subject1eGFP基因电泳图1.3eGFP基因PCR产物2DL2000Marker123pMG36e载体图谱pMG36epMG36e12pMG36e-GFP质粒电泳图1.pMG36e-GFP2.DL15000MarkerSubject2产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)是一种重要的人兽共患病原菌，能引起动物坏死性肠炎(Necroticenteritis,NE)、人类食物中毒等。Cperfringens是一种条件性致病菌，能产生多种致病作用的外毒素，其中α、β、ε和ι是主要的致死性毒素。乳酸菌来源的细菌素一般称为乳酸菌素，分子量一般小于6KDa，能抑制或杀死食品中多数革兰氏阳性致病菌和腐败菌，少数乳酸菌素对革兰氏阴性菌有效，产生菌对其乳酸菌素具有自身免疫性。有资料显示，乳酸菌片球菌属产生的细菌素对产气荚膜梭菌有抑菌活性。TCTAGAATGAAAAAAATTGAAAAATTAACTGAAAAAGAAATGGCCAATATCATTGGTGGTAAATACTACGGTAATGGGGTTACTTGTGGCAAACATTCCTGCTCTGTTGACTGGGGTAAGGCTACCACTTGCATAATCAATAATGGAGCTATGGCATGGGCTACTGGTGGACATCAAGGTAATCATAAATGCTAGAAGCTTpMG36e载体图谱pNZ8048载体图谱1234567pNZ8048-Pediocin转NZ9000菌液PCR电泳图1-5菌液PCR产物6DL2000Marker7pNZ8048-Pediocin质粒扩增产物pMG36e-Pediocin转化NZ9000菌液PCR筛选电泳图1阴性对照2-12菌液PCR产物13pMG36e-Pediocin质粒扩增产物14DL2000Marker1234567891011121314Subject3产肠毒素性大肠杆菌ETEC鸡大肠杆菌病鸡致病性大肠杆菌APECFimH是1型菌毛特异性粘附素新生仔猪大肠杆菌性腹泻K88是仔猪腹泻的主要抗原FimH/K88DC诱导肽融合表达Summary一菌两用安全、无毒可直接口服,无须静脉注射高效性，同时诱导粘膜免疫和系统免疫Bacillussubtilis益生菌表达载体平台的构建益生型粘膜免疫佐剂YeastLacticacidbacteriaTHANKYOU!