北大植物生物学实验指导21附录二：怎样作徒手切片

附录2.怎样作徒手切片附录2.怎样作徒手切片用光学显微镜观察的样品必须是透明的薄片，因此待观察的植物材料只有被切成很薄的切片后，才能在显微镜下观察。显微镜的制片分永久制片和临时制片，永久制片的制作方法和步骤比较复杂，有兴趣者可查阅有关植物制片技术的书籍，在植物学实验教学过程中，指导教师已预先准备了所需用的永久制片。在教学过程中，要求同学做的主要是临时制片。临时制片种类很多，包括涂片、压片等等，这里主要介绍用新鲜材料制作切片的徒手切片法。作徒手切片不需要复杂的设备，只需要一把锋利的剃刀或一片刀片就可以进行，方法简单，而且易于保持细胞的生活状态。徒手切片法所作的切片通常不经染色或经简易染色后，封藏于水中即可观察。用剃刀切片，材料不能太大，一般以表面不超过3-5mm2为宜。切片最要紧的是平而薄，无需很完整，比如茎的横切面，无需切片整圆形，只需一角就够了。所有切片前的准备工作，如截取材料、削平切面，都应使用解剖刀或用过的刀片，不可用剃刀，以保持剃刀的锋利。为了成功地切片，应掌握正确的用刀方法。一般用左手的大拇指、食指和中指三个手指捏住材料，使材料突出在指尖之上，避免切片时割伤手指；用右手平稳地拿住剃刀，把刀口放在经解剖刀削平的材料平面中间，轻轻地压住它，以均匀的动作，从剃刀刀口下方起，斜着向后拉切。切时要用臂力而不是腕力，并且不必太用力，否则就不易切薄。在切的过程中，决不能以剃刀直接挤压材料，或以剃刀来回拉割材料，并且要始终保持材料与剃刀在水平状态，否则会由于切面偏斜而影响观察。切下的切片应该薄而透明，形状则不要求非常完整，可以用刀不同的部位一次作几个切片，然后用蘸水的毛笔取下切片，置于盛水的培养皿中。有些较柔嫩的器官，例如幼叶，难以直接拿住进行切片，因而需借助一些维持物，一般用胡萝卜根或土豆块茎作为维持物，把要切的材料夹于其中，进行切片，以利于把握操作。将切下的薄片放在载玻片上时，要先在玻片中央加一滴水，把材料放到水滴中，然后用镊子夹住盖片，将盖片的一侧先接触到载玻片中央的水滴，然后用镊子顶住盖片的另一侧，慢慢放下，使盖玻片与载玻片之间充满水，如有气泡，要掀起盖片，重新放置。徒手制作的切片可以直接在光镜下观察，也可以经过简易的染色，以使结构看得更清楚。常用的染料有：0.1%亚甲基蓝、0.5-1%中性红或1%番红水溶液等。染色的方法是将切片放在载玻片上后，用吸水纸吸去多余的水分，滴上一滴染料，经过1－2分钟后，用水冲洗一下，盖上盖玻片，在显微镜下观察。附图2.1切、取附图2.2盖片