常州工程职院仪器分析测试技术课件5-2高效液相色谱法：基本操作

任务2高效液相色谱仪的基本操作î液相色谱分析法模块之p能基本操作液相色谱仪及描述液相色谱分析流程p能讲述液相色谱仪的基本组成î能力目标p复习气相色谱仪的基本组成和分析流程î课程引入î操作过程演示1p配制流动相Ø把二次蒸馏水和色谱纯级甲醇以15：85的比例混合Ø取混合均匀的溶液，经0.45µm的有机膜过滤，再脱气15分钟即可î操作过程演示2p更换色谱柱p把流动相贮液器放置在略高于高压泵的位置，插入带有不锈钢滤芯的输液管p开启高压泵电源开关，打开排放阀p设置流动相比例和流速等参数p揿下高压泵启动鍵“ON/OFF”，再按“Purge”鍵，仪器开始清洗高压泵和排除管路中的气泡。p观察废液出口，若没有气泡，按“Purge”鍵，停止排放，关闭排放阀。p打开检测器电源开关，设置检测波长î操作过程演示3p待仪器运行平衡后，用液相进样针进样，一般为定量管的3~5倍的体积。p工作站对所注射样品进行分析测试，并绘制分离色谱图。p色谱工作站对测试数据进行计算，并将结果在屏幕上显示出来î操作过程演示4î学生分组练习p根据实验室的实际情况，安排学生分组练习，一部分学生练习配制流动相，一部分学生练习操作仪器(以苯试样为例）。î液相色谱法分析流程p高压输液泵将贮液器中的流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入，流动相将样品依次带入预柱、色谱柱，在色谱柱中各组分被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至工作站记录、处理和保存。î高压输液系统p贮液器Ø材质：玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚醚酮（PEEK）Ø容积：0.5～2.0LØ放置位置：高于泵体，保持一定的输液静压差Ø注意：密封、过滤î高压输液系统p高压输液泵要求：泵体材料能耐化学腐蚀；能在高压（30～60MPa）下连续工作；输出流量稳定（±1%），无脉冲，重复性高（±0.5%），而且输出流量范围宽；适用于梯度洗脱。类型：一般可分为恒压泵和恒流泵两大类恒压泵恒流泵气动放大泵注射泵单柱塞泵双柱塞泵隔膜泵并联泵串联泵色谱泵î高压输液系统p流动相过滤与脱气装置Ø流动相过滤装置分为在线过滤和真空过滤Ø流动相脱气装置分为在线真空脱气和超声波脱气p六通阀进样器：用于固定体积进样î进样系统六通阀进样示意图î进样系统p液相色谱进样针：类似于气相色谱进样针，只是其针头为平头，以免扎破六通阀管路。用于可变体积进样p自动进样器î分离系统p色谱柱分离系统的主要部件是色谱柱，柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。安装和更换色谱柱时一定要使流动相能按箭头所指方向流动。一般在色谱柱前要求安装保护柱，起到保护延长分析柱寿命的作用。有些物质的分离条件要求有一定的温度，因此，给色谱柱配一个柱温箱是非常有必要的。î检测系统p分类Ø通用型：示差折光检测器（RID）、电导检测器（ECD）和蒸发光检测器（ELSD）,它们检测物质总体物理性质的变化情况Ø专用型：紫外检测器（UV-Vis）、荧光检测器（FD，它们检测某一物理或化学性质的变化î数据处理系统（工作站）p打开工作站，选择工作通道p编辑方法文件，设置方法名称、运行时间及定量方法p输入路径名、样品名、操作者等p样品分离完成后，记录谱图文件名和色谱峰峰高、峰面积和保留值等î下次课程问题p甲苯常作为化工中间体的原料试剂，按物料入库要求，需要抽样检查，如何测定甲苯试剂的纯度？（提示：1、可查阅文献资料；2、可参照国标。）