复旦仪器分析实验课件6荧光分光光度法测定面粉中的核黄素

19:09:42荧光分光光度法测定荧光分光光度法测定荧光分光光度法测定面粉中的核黄素面粉中的核黄素面粉中的核黄素（（（VBVBVB222）））一、实验目的二、实验原理和内容讲解三、F-4500型仪器简介四、F-4500型仪器的使用方法五、思考题复旦大学化学教学实验中心雷杰19:09:42一、实验目的一、实验目的一、实验目的学习荧光分析法的基本原理。掌握面粉样品的消化方法，了解分子荧光分光光度计的主要结构及工作原理，掌握其正确使用方法。学习测绘核黄素的激发光谱和荧光光谱，了解溶液的pH值等对核黄素荧光强度的影响。19:09:42二、二、二、实验原理和内容讲解实验原理和内容讲解实验原理和内容讲解z授课对象：化学系三年级本科生，每次四人。z教学手段：讨论、提问。•同学生一起回顾本学期做过的其他仪分实验，类比、过渡到本次实验；•重点类比紫外-可见分光光度法(普化实验涉及、本学期会再做到)，以实验名称中的关键词“分子”、“荧光”、“面粉”、“核黄素”等为主线，提问实验原理、步骤等。19:09:42z试比较分子荧光和紫外-可见分光光度法。1.从结构化学角度激发、去活化；吸收、发射；分子、原子。2.从仪器构造的角度光源、单色器、监测器、样品池等。3.比较两种方法的优缺点灵敏度、选择性、使用范围等4.专业术语（基本概念）方面入射光、透射光；激发光（谱）、荧光（光谱）、三维等。原理讲解方案一、类比、讨论原理讲解方案一、类比、讨论原理讲解方案一、类比、讨论19:09:421.分子光谱和原子光谱的最主要区别及成因？吸收光谱、发生光谱；带状、线状；分子荧光、原子荧光。2.荧光产生的机制？吸收辐射、再发射；振动弛豫、荧光发射、内部转换、体系间跨越、磷光发射等4.荧光有无方向性？固体样品如何测量？样品池如何设计？3.关于分子荧光光度法的一些基本概念激发光谱、荧光光谱、三维荧光光谱原理讲解方案二、提问、讨论原理讲解方案二、提问、讨论原理讲解方案二、提问、讨论19:09:42z三维荧光光谱示意图：用途？19:09:42z面粉的主要成分？淀粉、蛋白质、脂肪、矿物质、维生素等z核黄素结构、发荧光机制、稳定性、生理作用等NNNHNH3CH3COOCH2CHOHCHOHCHOHCH2OH关于待测样品面粉及核黄素关于待测样品面粉及核黄素关于待测样品面粉及核黄素氧化型还原型+2H-2H19:09:42z溶液配制：防止浪费or不够z浓盐酸的浓度z用NaOH调节pH值，理论计算？z配制好的核黄素样品的保存具体实验注意事项：具体实验注意事项：具体实验注意事项：19:09:42三、仪器简介三、仪器简介三、仪器简介F-4500型荧光分光光度计：比色皿：？样品槽：19:09:42F-4500型荧光分光光度计光路图：19:09:42四、四、四、FFF---450045004500型仪器的使用方法型仪器的使用方法型仪器的使用方法z开机PowerXelampMain19:09:42启动FLSolutionsProgram19:09:42五、思考题五、思考题五、思考题1.在荧光测量中，为什么激发光的入射与荧光的接收不在一直线上，而呈一定角度？2.试述荧光分光光度计与紫外-可见分光光度计在结构上的有哪些不同点？3.定量测定维生素B2可用的方法有哪些？试比较各种方法的优缺点。结束结束结束19:09:42结束结束结束