华北理工药物分析课件04药物的含量测定方法与验证

L/O/G/O第四章药物的含量测定方法与验证2023/3/82第四章药物的含量测定方法与验证定量分析方法的分类与特点1样品分析的前处理方法2药品质量标准分析方法验证32023/3/83第四章熟悉1.分析法的原理2.不同前处理方法的适用范围3.不同方法对验证内容的要求掌握1.容量,光谱和色谱分析法2.滴定度与含量计算3.系统适用性试验内容与要求4.样品分析的前处理方法5.分析方法的验证内容学习要求1.滴定液的配制与标定2.分析仪器的校正和检定了解2023/3/84概述含量方法剂型方法学验证2023/3/85第一节定量分析方法的分类与特点一、容量分析法二、光谱分析法三、色谱分析法2023/3/86一、容量分析法(一)特点与适用范围(1)方法简便易行(2)方法耐用性高(3)测定结果准确(4)方法专属性差适用于原料药含量测定(二)有关计算:1.滴定度与滴定度计算2.含量计算(1)直接滴定法(2)间接滴定法生成物滴定法剩余量滴定法也称滴定法:将已知浓度滴定液滴加至被测药物溶液中,至滴定终点,根据滴定液的浓度,体积和滴定度,计算含量容量分析法2023/3/87自动电位滴定仪2023/3/88(二)相关计算每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量,mg1.滴定度DCBAdcbaBBAAbMWaMWABBABABBAMbaVmMbanaMbMWWBAVTWMbamT）（mg/mlHI2OHCIOHC6662686）（mg/ml806.813.1761105.0T每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O62023/3/8101.滴定度溴酸钾法测定异烟肼(C6H7N3O=137.14)的含量,溴酸钾滴定液浓度为0.01667mol/L(KBrO3为单元)反应式:每1ml溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)相当于3.429mg的异烟肼(C6H7N3O)OH3KBr2N3NOHC3KBrO2ONHC3222563376滴定度:）（mlmg429.314.1372316670.0T2023/3/8112.含量测定直接滴定法生成物滴定法剩余量滴定法(1)(2)(3)2023/3/812(1)直接滴定法%100(%)WTV含量规定摩尔浓度实际摩尔浓度F%100%100'100%'(%)WFTVWTVWTV含量注意掌握滴定反应的原理,药物与滴定剂在反应中的摩尔比正确计算滴定度和百分含量直接滴定法计算容量分析法取Vc约0.2g，精密称定（0.2011g），加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.05005mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪,消耗滴定液22.50ml，求含量（99.0%)。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。Mw=176.13OCOHHCH2OHOHOOH+OCOHHCH2OHOOOI2H++2HI2023/3/814(2)生成物滴定法%100%100'100%'(%)WFTVWTVWTV含量注意摩尔比的替换药物与A作用生成B,用滴定液滴定B百分含量计算方法与直接滴定法相同2023/3/815(2)生成物滴定法滴定度23-5ISbI2Sb-264--2322OSI2OS2I葡萄糖酸锑钠含量测定:本品约0.3g,加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml,暗处放置10分钟,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定每1ml硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg锑(Sb)反应式:）（mg/ml088.676.121211.0MbamT2023/3/816(3)剩余量滴定法(回滴法)加入定过量滴定液A,用滴定液B滴定剩余的A注意:滴定度为滴定液A的滴定度%100)((%)ABBAAWTFVFV含量%100)((%)ABSBOBWTFVV含量无空白进行空白校正2023/3/817(3)剩余量滴定法司可巴比妥钠含量测定:本品约0.1g,加水10ml溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml,再加盐酸5ml,放置15分钟,加碘化钾试液10ml,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定,滴定的结果用空白试验校正W=0.1022g;硫代硫酸钠滴定液F=1.038;供试品消耗硫代硫酸钠滴定液15.73ml;空白23.21mlI2＋2Na2S2O3＝2NaI＋Na2S4O6KBrO3＋5KBr＋6HCl＝3Br2＋6KCl＋3H2O+Br2（定量过量）CONHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaCONHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaBrBrBr2(剩余)＋2KI＝2KBr＋I22023/3/819(3)剩余量滴定法滴定度(mg/ml)01.1327.2601105.0MbamT司可巴比妥钠M=260.27,与溴摩尔比为1:1%8.98%10010001022.001.13038.1)73.1521.23(%100)((%)2322322BrOSNaOSNaS0WTFVV司可巴比妥含量2023/3/820(3)剩余量滴定法滴定液A与滴定液B浓度是相当的溴滴定液(0.05mol/L)与硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当因为溴(Br2)等摩尔转化为碘(I2),而碘(I2)与硫代硫酸钠(Na2S2O3)反应的摩尔比为1:2,所以溴滴定液与硫代硫酸钠滴定液的浓度比也是1:2滴定液A与滴定液B经浓度校正后的消耗体积(V’=V×F)是相当的2023/3/821二、光谱分析法定义分类UV-Vis利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法——光谱分析法IRAAFluorFP(flamephotometry)2023/3/822(一)特点与适用范围F-IR2023/3/823(一)紫外-可见分光光度法1.特点与适用范围(1)方法简便易行(2)方法灵敏度高(3)结果准确度较高(4)方法专属性较差制剂含量测定与定量检查2.仪器校正和检定(1)波长(2)吸光度的准确度(3)杂散光3.测定法对照品比较,吸收系数计算光谱,比色法基于对紫外光区(200~400nm)和可见光区(400~760nm)单色光吸收特性的分析方法原理:UV-VisEclTA1lg2023/3/824(1)对照品比较法原料药制剂RRXXAcAc%100(%)XWDc含量%100(%)XBWWDc标示量氟康唑片溶出度检查:取本品(规格:100mg),盐酸溶液(9→1000)1000ml为溶出介质,经45分钟时,取溶液滤过;取续滤液,在261nmm波长处测定吸光度;另取氟康唑对照品适量,精密称定,加溶出介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液,同法测定,计算每片的溶出量%100%)(RRXBADcA标示量溶液浓度2023/3/825(2)吸收系数法原料药制剂%100(%)XWDc含量%100(%)XBWWDc标示量溶液浓度100)ml/g(%11cmXEAcX盐酸氯丙嗪注射液(规格：xxml:xxmg)的含量测定：精密量取适量(Vml,相当于盐酸氯丙嗪50mg),置200ml量瓶中,用盐酸溶液(91000)稀释至刻度,摇匀;精密量取2ml,置100ml量瓶中,用盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,在254nm的波长处测定吸光度,按吸收系数()为915计算1%1cmE%1001001000(%)1%1cm标示量标示量BVEVDA(3)标准曲线法1.作标准曲线，测出Ax，求Cx2.求回归方程，y=aX+b，代入Ax，计算Cx2023/3/827(二)荧光分析法1.特点(1)高灵敏度(2)荧光自熄灭(3)易受干扰(4)线性范围窄(RX–RXb)/(Rr–Rrb)=0.5~22.消除干扰(1)溶剂:空白对照(2)溶液:稀,净,充氮,pH(3)器皿:洁净,无机清洁液3.测定法:对照品比较物质受UV或Vis照射激发后能发射出比激发光波长长的荧光;激发光停止照射,荧光随之消失;激发和发射光谱用于定性,荧光强度用于定量FluorRrbrXbXXcRRRRc2023/3/828三、色谱分析法特点与应用分类依据分离原理：(1)高灵敏度:ng-µg/ml(2)高专属性:选择性检测(3)高效能与高速度吸附;分配;离子交换;分子排阻色谱法复方制剂含量测定的首选方法依据分离方式：纸色谱;薄层色谱;柱色谱;气相色谱;高效液相色谱法2023/3/829F-IR2023/3/830(一)高效液相色谱法1.仪器(RP-HPLC)(1)色谱柱:ODS最常用;粒径一般在3-10m;温度≯40℃(2)检测器:UV(DAD,PDA);Fluor,ELSD,RID,ECD,MS(3)流动相:首选甲醇-水(末端波长检测:乙腈-水),有机相≮5%;pH2-82.系统适用性试验(1)色谱柱的理论板数(n)(2)色谱峰的分离度(R)(3)色谱系统的重复性(RSD%)(4)色谱峰的拖尾因子(T)3.测定法(1)内标法(2)外标法不得改变：固定相种类,流动相组分,检测器类型可以改变：色谱柱内径,长度,载体粒度流动相流速,混合流动相各组分的比例柱温;进样量;检测器的灵敏度HPLC2023/3/8312.系统适用性试验分离度(R):用于评价组分的分离程度;关键指标重复性:用于评价连续进样系统响应的重复性能拖尾因子(T):用于评价色谱峰的对称性理论板数(n):用于评价色谱柱的分离效能n=(tR/)2=16(tR/W)2;n=5.54(tR/Wh/2)2212R1R)(2WWttR)(70.1)(22/,22/,12R1RhhWWttR;RSD≤2.0％1h05.02dWTR1.5T=0.95-1.052023/3/8323.测定法与计算(2)外标法氨酚待因片(I)的含量测定取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量,置250ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,滤过,取续滤液10µl进样;另精密称取磷酸可待因与对乙酰氨基酚对照品适量,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含磷酸可待因0.03mg和对乙酰氨基酚2mg的溶液,同法测定(1)内标法RRSS)(CACAf校正因子SScAAfcXX)(含量RXRX)(AAcc含量WWDAAcRXR)(mg/片含量(二)气相色谱法2023/3/833GC色谱柱：常用毛细管柱——熔融石英或玻璃内径一般为0.25mm,0.32mm或0.53mm;柱长5~60m，内壁或载体经交联或涂渍固定液;固定液膜厚0.1~5.0m固定液:甲基聚硅氧烷,苯基甲基聚硅氧烷,聚乙二醇2023/3/834(二)气相色谱法1.检测器——FID2.进样方式(1)溶液直接进样:不超过数微升(l);毛细管柱分流(2)顶空进样:供试液于密闭小瓶中,加热至待测组分达到液-气平衡,进样器自动吸取一定体积的顶空气进样2.系统适用性试验同HPLC3.测定法(1),(2)同HPLC(3)标准溶液加入法对照品溶液适量,精密加入到供试品溶液中,测定含量,扣除加入的对照品溶液含量即得XXXXiscccAA1)/(XisXXAAcc1.头孢唑啉钠的含量测定色谱条件与适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸氢二钠枸橼酸溶液（取无水磷酸氢二钠1.33g与枸橼酸1.12g，加水溶解并稀释成1000ml)-乙腈（88:12）为流动相；监测波长254nm。供试品溶液:取本品适量，精密称定为0.0252g，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。精密量取该溶液1.0ml置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。对照品溶液:取头孢唑啉对照品适量，精密称定为10.62mg,置100ml量瓶中，加流动相溶