华北理工药物分析课件14维生素类药物的分析

概述维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。人体不能自行合成维生素。如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。例如:VitA缺乏—夜盲症VitB1缺乏—脚气病、D2、D3、E、K1等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPP第一节维生素ACH3CH3CH2ORCH3CH3CH3具有一个共轭多烯醇侧链的环己烯（一）结构与性质一、具有UV吸收存在多种立体异构化合物新维生素Aa32875%新维生素Ab320.524%新维生素Ac310.515%异维生素Aa32321%异维生素Ab32424%相对生物效价maxl易发生脱氢、脱水、聚合反应CH2OHCH2△或有金属离子存在时氧化共轭多烯侧链易被氧化（二）酸醛环氧化物、氧化剂紫外线、VitAVitAVitAOO][2对酸不稳定(lewis酸/无水氯化氢乙醇溶液)，脱水，生成去水维生素A，活性降低。（三）与三氯化锑发生呈色反应溶解性（四）不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等CHCl3紫红色蓝色3SbClVitA三氯化锑反应（Carr-Price）条件:无水无醇鉴别二、CHCl3紫红色蓝色3SbClVitA（BP2000）λmax为326nm1个吸收峰UV法（二）λmax为350～390nm3个吸收峰VitAVitAHCl去水△无水乙醇（VitA3）↓VitACH3CH3CH2ORCH3CH3CH3CH2法（三）（VitA2）去水维生素A（VitA3）UV法（一）含量测定三、三点校正法（ChP2010）1.原理：（1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。波长的选择：（1）l1VitA的lmax（328nm）（2）l2l3分别在l1的两侧各选一点=-()()3403163283282523AAA.A--=校正==()334310325325260455528156A.A.A.A--=校正测定方法（1）基本步骤:第一步吸光度A选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除注意：C为混合样品的浓度第二步求)()(%cm1%cm1纯样EE)(%cm1样E)(LCAcm×=E(%)%1样第三步求效价换算因数由纯品计算而得：换算因数)效价(样样×=%)(cm1)(Eg/IU/%)(cm1EgIU纯)效价(换算因数＝=2907000g344.0g101g/IU6=mm×=）效价（15302907000Eg/IU%)(cm1=纯）效价（换算因数＝µ=3330000g300.0g101g/IU6=mm×=）效价（18203330000Eg/IU%)(cm1=纯）效价（换算因数＝第四步：求标示量％％标示量丸标示量％＝100/×IU％标示量平均丸重＝100g/IU××％标示量平均丸重换算因数100CA×××=•方法：(2)直接测定法维生素A醋酸酯分别于300、316、328、340、360nm处测Aiml/IU159溶液～环己烷样品•判断是否在326～329nm之间在326～329nm之间改用皂化法是否•求算并与规定值比较maxl328iA/Amaxl规定值差值=-=-=-=-=-299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA328360328340328328328316328300？？？？328iA/A•判断差值是否超过规定值的有一个以上超过无超过•计算A328（校正）•用A328计算02.0±02.0±()()3403163283282523AAA.A--=校正%100AAAf328328)(328×-=校正－15%－3%皂化法皂化法328AA328(校正)的含量测定精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物0.1287g至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度如下：：0.374A316：0.592A328：0.663A340：0.553A360：0.228A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.344求本品中VitA的含量？：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.009－0.0140+0.023+0.045－－－－－=====()()()637.0553.0592.0663.0252.3252.3340316328328=--×=--=AAAA校正()%9.93%1001000007985.01005015021287.01900637.0%100)ml100/g(C1900A%328=××××××=×××=标示量平均丸重标示量校正%)3~%15(%92.3%100328328)(328---=×-=AAAf校正醇（等吸收比法、6/7A法）第一法无法消除杂质干扰时用此法（3）皂化法样品处测、、、于～稀释至溶解异丙醇除去植物油的干扰甘油和脂肪酸盐植物油醇醋酸酯皂化液挥干乙醚乙醚提取乙醇•判断lmax是否在323～327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定•计算是否325300AA•判断A300/A325是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定•计算A325(校正)()334310325325260455528156A.A.A.A--=校正%100AAAf325325)(325×-=校正－3%（二）高效液相色谱法测定维生素A的含量为ChP2010新增的分析方法，适用于维生素A醋酸酯原料及其制剂中维生素A的含量测定。高效液相色谱法．仪器与色谱条件•(1)仪器：高效液相色谱仪，紫外检测器。•(2)色谱条件与系统适用性试验：•填充剂：硅胶•流动相：正己烷-异丙醇(997:3)•检测波长：325nm。•进样量：10µl。•维生素A醋酸酯主峰与其顺式异构体峰的分离度应大于3.0。•对照品溶液连续进样5次，主成分峰面积的相对标准偏差不得过3.0%。对照品（约相当于维生素A醋酸酯300mg）碘试液0.2ml混匀放置10min定量转移至200ml量瓶中正己烷稀释精密量取1ml置100ml量瓶中系统适用性试验溶液供试品（约相当于15mg维生素A醋酸酯）正己烷100ml量瓶精密量取5ml定量，摇匀50ml量瓶定量，摇匀正己烷供试品溶液另精密称取维生素A对照品适量(约相当于15mg维生素A醋酸酯)，同法制成对照品溶液。按外标法以峰面积计算含量。三氯化锑比色法（二）优点:简便快速λmax618nm～620nm标准曲线法缺点呈色不稳定（5~10s内）水分干扰与标准曲线温差≤1℃专属性差三氯化锑有腐蚀性SbOClSbClOH23蓝色+3SbClVitA(三)氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)第二节维生素B1·HClCl-NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+（一）溶解性1.易溶于水2.水溶液呈酸性（二）UV共轭双键λmax=246nm结构与性质一、嘧啶环——伯氨噻唑环——季铵1.可与酸成盐2.与生物碱↓→↓3.含量测定——非水碱量法（三）硫色素反应（四）碱性[]蓝色荧光硫色素正丁醇-OOH鉴别试验二、（一）硫色素反应荧光消失蓝色荧光硫色素正丁醇）（环合+-HCNFeKOHNaOHVitB6321-OH硫色素(O)环合-H2（二）沉淀反应()4242HgIH]B[HgIK·淡黄()OH4WO12OHSiO]B[23222···H+白色