华北理工药物分析实验指导

华北理工大学药物分析实验指导目录前言………………………………………………………………………………2实验一葡萄糖的杂质检查（一般杂质检查）…………………………………3实验二药物特殊杂质检查………………………………………………………6实验三苯巴比妥的鉴别、区别（微晶反应）及含量测定（银量法）………7实验四安妥碘的含量测定（氧瓶燃烧-可见分光光度法）…………………9实验五盐酸普鲁卡因注射液的提取中和滴定法……………………………10实验六硫酸阿托品注射液的测定……………………………………………11实验七酚磺乙胺注射液的含量测定…………………………………………11实验八复方新诺明片中磺胺甲基异恶唑及甲氧苄氨嘧啶的双波长分光光度法…………………………………………………………………12实验九维生素C注射液的分析………………………………………………13实验十复方乙酰水杨酸片的含量测定………………………………………15实验十一维生素B1片剂的含量测定（差示分光光度法）…………………16实验十二氯霉素滴眼液的高效液相色谱分析法……………………………18Exp13DeterminationofAlcoholinBelladonnaTincture………20实验十四设计性实验………………………………………………………22前言药物分析是药学专业的一门专业课程，也是一门综合性应用学科。药物分析实验是本课程的重要组成部分，通过实验课学习培养学生树立药品质量观念，熟悉药品检验程序，并能较系统地掌握药典常用的分析方法和实验技术，从而培养学生独立进行药品检验工作的能力。按照教学大纲规定，学生应做到以下几方面：1.了解药物分析工作的程序和要求，加深对本学科专业理论知识的理解。2.掌握实验教材中各类代表药物的常用分析方法，包括药物的鉴别、杂质检查、含量测定等基本理论和常用仪器的操作技术。3.培养实事求是的科学态度和严谨的工作作风。4.实验课前做好预习，明确实验目的和要求，了解实验内容和操作方法及注意事项。5.按实验规程认真操作，仔细观察实验现象，并做好原始记录，记录要清楚工整，用钢笔或圆珠笔直接记于实验记录本上，不得涂改或编写记录。6.认真分析实验结果，正确进行数据处理，力求得出准确可靠得结论。认真完成实验报告。7.遵守实验室规则，爱护仪器，防火、防爆，节约水电，注意废溶剂的回收。8.值日生认真清理实验台，打扫实验室并检查门、窗、水、电等安全事宜。本实验讲义内容是根据药学专业（四年制）教学计划结合我院实际情况编写的，使用时可根据教学时数选择，也可作为实例用做课堂教学参考。实验一葡萄糖的杂质检查（一般杂质检查）1.目的要求1.通过葡萄糖分析了解一般杂质检查项目和意义。2.掌握杂质检查的原理和方法。1.实验内容和操作方法1.标准溶液的配制1.标准氯化钠溶液的制备称取氯化钠0.165g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀作为贮备液。临用前精密量取贮备液10ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度摇匀，既得（每1ml相当于10g的Cl）。2.标准硫酸钾溶液的制备称取硫酸钾0.181g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，既得（每1ml相当于100g的SO42-）。3.标准铁溶液的制备称取硫酸铁胺[FeNH4（SO4）212H2O]0.863g，置1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前精密量取贮备液10ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度摇匀，既得（每1ml相当于10g的Fe）。1.标准铅溶液的制备称取硝酸铅0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前精密量取贮备液10ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度摇匀，既得（每1ml相当于10g的Pb）。配制与贮存用的玻璃容器均不得含有铅。1.标准砷溶液的制备称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前精密量取贮备液1ml置100ml量瓶中，加稀硫酸1ml，用水稀释至刻度摇匀，既得（每1ml相当于10g的As）。（二）葡萄糖的杂质检查1.酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.20ml，应显粉红色。1.溶液的澄清度与颜色取本品5g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10ml，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（取浊度标准原液5.0ml，加水95.0ml配制）比较，不得更浓；如显色与对照液（取比色氯化钴液3ml、比色用重铬酸钾液3ml与比色用硫酸铜液6ml，加水稀释成50ml）1.0ml加水稀释至10ml比较，不得更深。1.乙醇溶液的澄清度取本品1.0g，加90%乙醇30ml，置水浴上加热回流约10分钟，溶液应澄清。4．氯化物取本品0.6g，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化钠溶液（每1ml相当于10μg的Cl-）6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照品溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，供试液与对照液比较，不得更浓（0.01%）。5．硫酸盐取本品2.0g，加水溶解使成约40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液（每1ml相当于100μg的SO42-）2.0ml，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5ml，用水稀释至50ml，充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，供试液与对照液比较，不得更浓（0.01%）。6．亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1.0g，加水10ml溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。7．干燥失重取本品混合均匀（如为较大的结晶，应先迅速捣碎使成2mm以下的小粒），取约1g，置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称瓶中，精密称定，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过9.5%。8．炽灼残渣取本品1.0~2.0g，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫酸0.5~1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700~800℃炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700~800℃炽灼至恒重，所得炽灼残渣不得超过0.1%。9．蛋白质取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液（15）3ml，不得发生沉淀。10．铁盐取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液（30100）3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液（每1ml相当于10μg的Fe）2.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。11．重金属取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液（每1ml相当于10μg的Pb）2ml与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水稀释成25ml；取本品4.0g置乙管中，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml；再在甲乙两管中分加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上而下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深，含重金属不得过百万分之五。硫代乙酰胺的制备：临用前取混合液5.0ml，加硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。12．砷盐取本品2.0g加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾溴试液0.5ml，置水浴中加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾试液适量，并随时补充蒸散的水分，放冷，加盐酸5ml与水适量使成28ml，置试砷瓶中加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴。在室温中放置10分钟后，加锌粒2.0g，迅速将瓶塞（瓶塞已放好装有醋酸铅棉花60mg及溴化汞试纸的试砷管）塞紧，保持反应温度在35~37℃间（视反应快慢而定，但不应超过40℃）。45分钟后取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与标准砷溶液（每1ml相当于1μg的As）2ml制成的标准砷斑比较，颜色不得更深（0.001%）。标准砷斑的制备：精密吸取标准砷溶液2ml，置另一试砷瓶中，加盐酸5ml与水21ml，照上述方法，自加碘化钾试液5ml……起依法操作（古蔡氏法），即得标准砷斑。思考题：1.什么是一般杂质？2.药物中杂质的来源主要有哪些途径？如何计算杂质限量？实验二药物特殊杂质检查一、目的要求1．了解本实验中药物特殊杂质的来源和检查目的。2．掌握本实验中药物杂质的检查方法。二、实验内容及操作方法薄层板制备：取硅胶G（或硅胶H）3g，（可稍过量），加0.5%CMC-Na9ml于乳钵中，按同一方向研磨至适宜稠度，分别均匀铺于520cm玻璃板上，凉干，于105℃活化一小时，置干燥器内备用。显色剂的配制（由实验室制备）1.碱性四氮唑蓝试液：0.2%四氮唑蓝甲醇液10ml，加12%NaOH甲醇液30ml制成。2.对二甲氨基苯甲醛溶液：2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成。（三）操作方法1．氢化可的松中其他甾体的检查：取本品，加氯仿-甲醇（9:1）制成每1ml中含3mg的溶液。作为供试品溶液。精密量取适量，加氯仿-甲醇（9:1）稀释成每1ml中含60μg的溶液，作为对照溶液，照薄层色谱法（中华人民共和国药典2005年版附录）试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别占于同一硅胶G薄层板上。以二氯甲烷一乙醚-甲醇-水（38.5:6:3:0.2）为展开剂，展开后，晾干，在105℃烘10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视，供试品溶液所显的杂质斑点不得超过3个，其颜色与对照溶液的斑点比较，不得更深。2．盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查：精密量取本品适宜，加乙醇稀释使成每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。另取对氨基苯甲酸，加乙醇制成每1ml含30μg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中华人民共和国药典2005年版附录）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（28:2:2:8）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液喷雾显色。供试溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深（1.2%）。思考题：1.薄层层析法检查氢化可的松中其它甾体的原理是什么？为何用稀释液作对照？2.试计算两种药物的杂质限量。实验三苯巴比妥的鉴别、区别（微晶反应）及含量测定（银量法）一、目的要求1．掌握用银量法测定巴比妥类药物含量的方法原理及其操作条件。2．了解苯巴比妥的鉴别反应的原理及微晶反应的观察。二、鉴别1．取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与10ml振摇2分钟，滤过（如不浑浊可不必滤过）。滤液中逐滴加入硝酸银溶液，即发生白色沉淀，振摇，沉淀即溶解，继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。2．取供试品约50mg，加吡啶溶液（110）5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml，即显紫色或产生紫色沉淀。3．取本品约10mg，加硫酸2滴与亚硝酸钠约5mg，混合，即显橙黄色，随即转橙红色。4．取本品约500mg，置试管中，加甲醛试液1ml，加热煮沸，冷却，沿管壁缓缓加硫酸0.5ml使成两液层，置水浴中加热，接界面显玫瑰红色。三、微晶反应：取3-5%的巴比妥钠的水浴液一滴，滴于载玻片上，在其边缘上加1滴稀硫酸，即生成巴比妥的特殊结晶为长方形结晶。取3-5%的苯巴比妥钠的水溶液一滴，滴于载玻片上，在其边缘上加1滴稀硫