华北理工药物分析教案第3章 药物的杂质检查

1课程名称：《药物分析》第3周，第6讲次摘要授课题目（章、节）第三章药物的杂质检查第一节、药物的杂质与限量【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握药物的杂质与限量及其相关计算。【重点】杂质限量计算。【难点】杂质限量计算。内容【本讲课程的引入】药物能够绝对纯净吗？板书“杂质限量”。【本讲课程的内容】第一节、药物的杂质与限量一、药物的杂质与纯度：1.杂质：任何影响药品纯度的物质均称为杂质。2.杂质无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害。3.药品纯度：指药物的纯净程度，是反映药品质量的一项重要指标。（1）主要由药品质量标准中的“检查”项下的杂质检查来控制。（2）药物纯度的评价：应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。（3）药物纯度与化学纯度的区别：共同点：均规定所含杂质的种类和限量不同点：A.药物纯度：1）又称为药用规格,主要从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑2）只有合格品和不合格品，不分等级3）按国家药品标准进行检查B.化学试剂的纯度：1）是从杂质可能影响化学使用的目的加以规定，不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用。2）根据试剂的使用范围和使用目的划分等级.3）按国家试剂标准检查.二、杂质的来源：1.生产过程中引入：药物在合成过程中未反应的原料、中间体和副产物、所用的试剂、溶剂、还原剂、金属器皿、装置等。（1）原料药生产中引入的杂质（2）制剂生产中引入的杂质（3）无效、低效异构体或晶型：1）光学异构体：左旋体和右旋体生物活性不同2）几何异构体（顺式体，反式体）：顺式体与反式体的生物活性不相同3）多晶型：晶型不同，理化常数、溶解度、稳定性、体内吸收和疗效不同。2.贮藏过程中引入：外界条件的变化或微生物的作用可能发生的水解、氧化、异构化、晶型转化、聚合等变化而产生的有关杂质2（1）易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等（2）易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等三、杂质的种类与分类1.按来源分：（1)一般杂质:在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐等(2)特殊杂质:在个别药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。如阿司匹林中的游离水杨酸、甲硝唑中的2-甲基-5-硝基咪唑等。2.按毒性分:（1)信号杂质:本身一般无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平，称其为“信号”杂质。如氯化物、硫酸盐等属于信号杂质。(2)毒性杂质:对人体有毒害的杂质。重金属、砷盐、氰化物等,应严格加以控制，以保证用药安全。3.按化学类别和特性分类：（1）无机杂质:来源于生产过程，一般是已知的和确定的，直接影响药物的稳定性，反映生产工艺情况(2)有机杂质:合成中未反应完全的原料、中间体、副产物、降解产物等（3）残留溶剂：生产中使用的有机溶剂四、杂质的限量1.定义：药物中所含杂质的最大允许量2.表示：百分之几或百万分之几（ppm）3.计算：若用ppm表示杂质限量注意:①单位是否统一②供试品是否有稀释③表示方法%或ppm五、检查方法1.限度检查法（1）对照法：样品管和标准管比较；注意平行操作原则。（2）灵敏度法：在供试品溶液中加入一定量的试剂，在一定反应条件下不得有正反应出现，从而判断供试品中所含杂质是否符合限量规定（3）比较法：取一定量供试品依法检查，测定特定待检杂质的参数与规定的限量比较，不得更大％供试品的量杂质的最大允许量杂质限量＝100％供试品的量体积标准液浓度＝100%100SVC(%)L610SCV)ppm(L3【本讲课程的小结】今天我们主要讲了药物的杂质及其分类、检查方法和杂质限量计算。希望同学们重点学习杂质限量计算方法。【本讲课程的作业】1．溴化钠中砷盐检查：方法：中国药典规定：取标准砷溶液2.0mL(每1mL相当于1µg砷)制备砷斑,规定含砷量不得超过4ppm,计算：应取供试品量(g)？2．胃复康中检查二苯羟基乙酸的方法如下：取本品0.5g，酸性下用乙醚提取后蒸干，残渣用无水乙醇10mL溶解后，在258nm波长处测定吸收度，不得超过0.02,求胃复康中二苯羟基乙酸的限量（以百分表示，二苯羟基乙酸在258nm波长处的E1%cm=19.7）3.溴化钠中硫酸盐检查法如下：称取溴化钠0.5g，置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，加稀盐酸2mL，加入25%氯化钡溶液5mL，用水稀释至刻度。精密吸取硫酸钾标准溶液（100μgSO42-/mL）2.0mL，依法检查，求溴化钠中的硫酸盐的限量为百分之几？4.异戊巴比妥钠中重金属的检查：取本品1.0g，加水43mL溶解后，缓缓加稀盐酸3mL，随加随用强力振摇，滤过，弃取初滤液；取续滤液23mL，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL，依法检查，含重金属不得超过20ppm，求应取标准铅溶液（浓度为10μgPb2+/mL）多少mL？5.肾上腺素中肾上腺酮的检查：称取肾上腺素0.250g，置于25mL量瓶中，加0.05mol/L盐酸液至刻度，量取5mL置另一25mL量瓶中，用0.05mol/L盐酸液稀释至刻度，用此液照分光光度法，在310nm处测定吸光度，不得大于0.05，问肾上腺素的限量是多少？（以百分表示，肾上腺素Ecm1%=453）4课程名称：《药物分析》第4周，第7讲次摘要授课题目（章、节）第三章药物的杂质检查第二节杂质的检查方法【目的要求】通过本讲课程,学习杂质的检查方法。【重点】色谱方法。【难点】TLC法和HPLC法。内容【本讲课程的引入】如何检查药物中的杂质？板书“杂质的检查方法”。【本讲课程的内容】第二节、杂质的检查方法一、杂质的研究规范1.有机杂质在药品质量标准中的项目名（1）杂质的化学名：肾上腺素中的“酮体”（2）以某类杂质总称：利巴韦林中的“有关物质”（3）根据检测方法选用：“杂质吸光度”。2.杂质检查项目的确定：确定原则：针对性（1）新药：经研究和稳定性考察检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。对在合成、纯化和贮存中实际存在的杂质和潜在的杂质进行研究，包括无机杂质、有机杂质及残留溶剂。（2）原料药和制剂中的杂质：根据其生产工艺、起始原料情况确定检查项目规定降解产物和毒性杂质的检查项目（3）单一对映体药物：其可能共存的其他对映体应作为杂质检查（4）消旋体药物：当已有其单一对映体药物的法定质量标准时，应在该消旋体药物的质量标准中设旋光度检查项目。3.杂质限度的确定（1）确定原则：合理性，在确保用药安全有效的前提下，应考虑：生产的可行性及批与批之间的正常波动药品本身的稳定性（2）根据每日剂量来制订质控限度1）报告限度（reportingthreshold）：超出此限度的杂质均应在检测报告中报告，并应报告具体的检测数据。2）鉴定限度（identificationthreshold）：超出此限度的杂质均应进行定性分析，确定其化学结构3）质控限度（qualificationthreshold）：质量标准中一般允许的杂质限度，如制订的限度高于此限度，则应有充分的依据。（3）有机杂质的限度规定应包括：每一个已知杂质、未知杂质及总杂质。（4）仿制药品的杂质限度，应与已上市产品进行质量对比研究4.杂质检查方法的选择与验证：用于杂质检查的分析方法要求专属、灵敏5（1）专属性：根据原料药或制剂的生产工艺及储存条件，以中间体、立体异构体、粗品、重结晶母液、经加速破坏性试验后的样品作为测试品进行系统适用性研究，考察产品中各杂质峰及主成分峰相互间的分离度是否符合要求。采用HPLC法检查有机杂质时，常采用梯度洗脱（2）检测限：要符合质量标准中对杂质限度的要求，最低检测限不得大于该杂质的报告限度二、杂质的常用检查方法1.化学方法（1）显色反应检查法：杂质与试剂产生颜色----比色法(2)沉淀反应检查法：杂质与试剂产生沉淀1）比浊2）重量法测定杂质的量（3）杂质与试剂产生气体（4）滴定法：滴定剂只与杂质反应，以一定浓度的滴定溶液滴定药物的杂质，可以定量地测定杂质的含量2.色谱方法（1）TLC法：1）杂质对照品法：适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况判断结果：供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照溶液品溶液主斑点比较，不得更深。2）供试品溶液自身稀释对照法：适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的情况下使用。结果判断：供试品溶液所显杂质斑点与自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液所显主斑点比较，不得更深3）杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用：药物中存在多个杂质时，其中已知杂质有对照品时，采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品的杂质，可采用供试品溶液自身稀释对照法检查。结果判断：供试品溶液如显杂质斑点不得多于规定个数，其中在与对照品溶液相同的位置上所显杂质斑点的颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深，另外杂质的颜色与对照溶液主斑点比较，不得更深。4）对照药物法：当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同的药物作为对照品，此对照药物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。判断结果：高浓度供试品溶液主斑点的位置与颜色应与对照品溶液的主斑点一致，如显杂质斑点，其颜色不得深于对照品溶液对应的杂质斑点，并不得有对照品溶液以外的杂质斑点；低浓度供试品溶液除主斑点外，不得显任何杂质斑点。系统适用性试验：测灵敏度、分离效能、比移值（Rf）限量要求：规定杂质斑点数和单一杂质量、杂质总量（2）HPLC法：1）外标法测定供试品中某个杂质的含量供试品溶液进样记录色谱图AX和AR计算对照品溶液RXRXAAcc）＝含量（62）加校正因子的主成分自身对照法：适用于已知杂质的控制。用杂质对照品测定f杂质，f杂质和相对保留时间直接载入各品种质量标准中，在常规检验时用相对保留时间定位，以f杂质校正该杂质的实测峰面积。消除杂质与主成分的响应因子可能不同所引起的测定误差判断：供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的校正因子后，与对照溶液中主成分的峰面积比较3）不加校正因子的主成分自身对照法：适用于没有杂质对照品的情况对照溶液：供试品的稀释液判断：供试品溶液中各杂质的峰面积与对照溶液主成分的峰面积比较4）面积归一化法：适用于粗略测量供试品中杂质的含量计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积（含药物的峰面积，而不含溶剂峰面积）的百分率。该法一般不宜用于微量杂质的检查。（3）GC法：主要用于药物中挥发性杂质的检查方法：方法同HPLC标准溶液加入法：杂质对照液+供试液外标法或内标法测定总量总量-加入的杂质对照品的量=杂质的量（4）毛细管电泳法：毛细管电泳法可以用于酶类药物中酶类杂质的检查。检查方法与高效液相色谱法相同3.光谱方法：依据药物和杂质对光选择吸收性质差异进行检查（1）可见-紫外分光光度法：在某一波长处杂质有最大吸收，药物无吸收。（2）红外分光光度法：检查药物中无效或低效晶型（3）原子吸收分光光度法：通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的含量。4.其他方法：（1）热分析法(thermoanalysis）1）热重分析法(thermogravimetricanalysis,TGA)：在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在加热同时失重的情况下，所发生的质的变化应用：药物稳定性的研究；贵重和易氧化药物的干燥失重测定；药物结晶水和吸附水的区别以及结晶水含量的测定。2）差示热分析（differentialthermalanalysis,DTA）：是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间的温差与温度关系的一种技术。参比物是一种惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学变化。因此温差(△T)只与被测物质的质量变化有关。RRSSCACAf//%100%主AAALii7△T=0被测物未发生吸热或放热反应；△T=-为吸热峰(负峰)；△T=+为放热峰(正峰)。根据峰的数目、