华北理工药物分析教案第4章-1药物的含量测定方法与验证

1课程名称：《药物分析》第5周，第10讲次摘要授课题目（章、节）第四章药物的含量测定方法与验证第一节定量分析方法的分类与特点【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握药物的含量测定方法，滴定度与含量计算，系统适用性试验内容与要求【重点】滴定度与含量计算。【难点】滴定度与含量计算。内容【本讲课程的引入】评价药物质量的重要指标有哪些？板书“含量测定”。【本讲课程的内容】第一节定量分析方法的分类与特点一、容量分析法1.定义：也称滴定法，将已知浓度滴定液滴加至被测药物溶液中,至滴定终点,根据滴定液的浓度,体积和滴定度,计算含量二、特点：(1)方法简便易行(2)方法耐用性高(3)测定结果准确(4)方法专属性差3.适用范围：适用于原料药含量测定4.相关计算:①滴定度：每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量,mg②含量测定：1)直接滴定法:注意掌握滴定反应的原理,药物与滴定剂在反应中的摩尔比正确计算滴定度和百分含量2)生成物滴定法:药物与A作用生成B,用滴定液滴定B百分含量计算方法与直接滴定法相同DCBAdcbaBBAAbMWaMWABBABABBAMbaVmMbanaMbMWWBAVTWMbamT）（mg/ml%100(%)WTV含量规定摩尔浓度实际摩尔浓度F%100%100'100%'(%)WFTVWTVWTV含量%100(%)XWDc含量2注意摩尔比的替换3)剩余量滴定法(回滴法):加入定过量滴定液A,用滴定液B滴定剩余的A无空白进行空白校正注意:滴定度为滴定液A的滴定度滴定液A与滴定液B浓度是相当的滴定液A与滴定液B经浓度校正后的消耗体积(V’=V×F)是相当的二、光谱分析法1.定义:利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法2.分类:1）UV-Vis2）Fluor3）AA4）IR3.紫外-可见分光光度法：基于对紫外光区(200~400nm)和可见光区(400~760nm)单色光吸收特性的分析方法（1）原理:（2）特点：1)方法简便易行2)方法灵敏度高3)结果准确度较高4)方法专属性较差（3）适用范围：制剂含量测定与定量检查（4）仪器校正和检定：1)波长2)吸光度的准确度3)杂散光（5）测定法：1）对照品比较法：溶液浓度：原料药：制剂：2)吸收系数法溶液浓度：原料药：%100%100'100%'(%)WFTVWTVWTV含量%100)((%)ABBAAWTFVFV含量%100)((%)ABSBOBWTFVV含量EclTA1lgRRXXAcAc%100(%)XWDc含量%100(%)XBWWDc标示量100)ml/g(%11cmXEAcX%100(%)XBWWDc标示量RXRX)(AAcc含量3制剂：3)标准曲线法①作标准曲线，测出Ax，求Cx②求回归方程，y=aX+b，代入Ax，计算Cx4.荧光分析法（1）定义：物质受UV或Vis照射激发后能发射出比激发光波长长的荧光;激发光停止照射,荧光随之消失;激发和发射光谱用于定性,荧光强度用于定量（2）特点：1)高灵敏度2)荧光自熄灭3)易受干扰4)线性范围窄：(RX–RXb)/(Rr–Rrb)=0.5~2（3）消除干扰：1)溶剂:空白对照2)溶液:稀,净,充氮,pH3)器皿:洁净,无机清洁液（4）测定法:对照品比较2.色谱分析法1.特点：1)高灵敏度:ng-µg/ml2)高专属性:选择性检测3)高效能与高速度2.应用：复方制剂含量测定的首选方法3.分类：1）依据分离原理：吸附;分配;离子交换;分子排阻色谱法2）依据分离方式：纸色谱;薄层色谱;柱色谱;气相色谱;高效液相色谱法4.高效液相色谱法：HPLC（1）不得改变：固定相种类、流动相组分、检测器类型（2）可以改变：色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例柱温、进样量、检测器的灵敏度（3）仪器(RP-HPLC)：1)色谱柱:ODS最常用;粒径一般在3-10m;温度≯40℃2)检测器:UV(DAD,PDA);Fluor,ELSD,RID,ECD,MS3)流动相:首选甲醇-水(末端波长检测:乙腈-水),有机相≮5%;pH2-8（4）系统适用性试验：1)色谱柱的理论板数(n)：用于评价色谱柱的分离效能n=(tR/σ)2=16(tR/W)2=5.54(tR/Wh/2)22)色谱峰的分离度(R)：用于评价组分的分离程度；关键指标R1.53)色谱系统的重复性(RSD%)：用于评价连续进样系统响应的重复性能RSD≤2.0％4)色谱峰的拖尾因子(T)：用于评价色谱峰的对称性T=0.95-1.05（5）测定法与计算：1)内标法：RrbrXbXXcRRRRc212R1R)(2WWttR1h05.02dWTRRSS)(CACAf校正因子SScAAfcXX)(含量WWDAAcRXR)(mg/片含量42)外标法：5.气相色谱法：GC（1）色谱柱：常用毛细管柱：熔融石英或玻璃；内径一般为0.25mm、0.32mm或0.53mm;柱长5~60m，内壁或载体经交联或涂渍固定液;固定液膜厚0.1~5.0μm（2）固定液:甲基聚硅氧烷,苯基甲基聚硅氧烷,聚乙二醇（3）检测器：常用FID（4）进样方式：1)溶液直接进样:不超过数微升(μl);毛细管柱分流2)顶空进样:供试液于密闭小瓶中,加热至待测组分达到液-气平衡,进样器自动吸取一定体积的顶空气进样（5）系统适用性试验：同HPLC（6)测定法与计算：1)内标法：同HPLC2)外标法：同HPLC3)标准溶液加入法:对照品溶液适量,精密加入到供试品溶液中,测定含量,扣除加入的对照品溶液含量即得【本讲课程的小结】今天我们主要讲了药物的含量测定方法，滴定度与含量计算，系统适用性试验内容与要求。希望同学们重点学习滴定度与含量计算。【本讲课程的作业】三、取异戊巴比妥钠0.2052克，精密称定，依法用硝酸银滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去该滴定液8.10ml，已知每1ml的硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于24.38mg的C11H18N2NaO3，试计算异戊巴比妥钠的百分含量四、取维生素B120片，精密称定，20片片重为1.5786g，研细，精密称取细粉（约相当于维生素B125mg）0.4031g，置100mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70mL，振摇15分钟使溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取续滤液5mL，至另一100mL量瓶中。再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，在246nm波长处测定吸收度，为0.526，吸收系数E1％1cm421，计算维生素B1片含量相当于标示量的百分含量。维生素B1片的标示量为5mgXXXXiscccAA1)/(XisXXAAcc5课程名称：《药物分析》第6周，第11讲次摘要授课题目（章、节）第四章药物的含量测定方法与验证第二节样品分析的前处理方法第三节药品质量标准分析方法验证【目的要求】通过本讲课程,学习样品分析的前处理方法和药品质量标准分析方法验证【重点】样品分析的前处理方法和药品质量标准分析方法验证【难点】样品分析的前处理方法内容【本讲课程的引入】样品分析前都需要怎样的前处理？药品质量标准分析方法验证的项目和内容都有哪些？板书“前处理方法和方法验证”。【本讲课程的内容】第二节、样品分析的前处理方法一、不经有机破坏的方法1.水解法：适用于:结合不牢固的含金属或含卤素有机药物（1）酸水解法：水难溶性含金属有机药物与矿酸(盐酸)共热（2）碱水解法：含卤素有机药物(脂肪碳链)与氢氧化钠溶液回流有机结合的待测元素原子离解,转化为无机盐(离子)3.还原法：适用于:结合牢固的含碘有机药物(直接与芳环连接)碱性溶液中加锌粉回流,使碳-碘键还原转化为无机碘化物二、经有机破坏的方法适用于:含金属、卤素、氮、硫、磷等有机药物(待测原子与碳原子结合牢固者)1.湿法破坏：适用于含氮有机药物分析的前处理硫酸作为分解剂,氧化剂(硝酸,高氯酸)辅助分解剂注意：①空白校正②通风橱内（1）硝酸-高氯酸法：适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态不能用于含氮杂环药物的破坏（2）硝酸-硫酸法：适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为高价态不能用于含碱土金属有机药物的破坏（3）硫酸-硫酸盐法：往样品中加入浓硫酸作氧化剂，加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失常用于含砷或锑有机药物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价态（4）凯氏定氮法：1）消解剂与助剂:硫酸-硫酸钾-硫酸铜硫酸：消解剂;硫酸钾：提高沸点;硫酸铜：催化剂;硼酸：固氮(NH3·H3BO3)62）供试品:常量法含氮25~30mg;半微量法:1.0~2.0mg3）应用范围:含有氨基或酰氨(胺)结构（5）其它湿法1)硝酸—硫酸—高氯酸法2)硫酸—氧化剂法（过氧化氢法、高锰酸钾法）破坏后，金属呈高价态2.干法破坏：适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏（1）高温炽灼法：含卤素药物的鉴别、含磷药物含量测定无水碳酸钠,硝酸镁,氢氧化钙,氧化锌等辅助灰化(2)氧瓶燃烧法:1)将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据预测物质的性质，采用适宜的方法进行分析①有机结构:彻底分解为CO2和H2O②待测元素:转化为不同价态的氧化物(或无氧酸),被吸收于适当的吸收液中(多以酸根离子形式存在)2)适合于含X、S、N、Se等元素的有机药物3)特点：简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析4)仪器装置:①燃烧瓶:无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶(石英玻璃)500、1000或2000ml:10-20mg:500ml200mg:1000-2000ml②铂丝:瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状1mm;2/35）称样用材料：①固体样品：无灰滤纸②液体样品：纸袋③软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹6）氧气7）吸收液：①作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态②燃烧产物与吸收液氟：HF吸收液：水氯：HCl吸收液：水-氢氧化钠溴：Br2+HBr吸收液：水-氢氧化钠-二氧化硫碘：I2(+HIO)吸收液：水-氢氧化钠(二氧化硫)硫：SO3(+SO2)吸收液：水-过氧化氢磷：P2O5→H4P2O7,(HPO3)n:吸收液：水-硝酸(煮沸)8）注意事项：①根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶7正确选用燃烧瓶的目的：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性②测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶③铂丝燃烧时起催化作用④应同时做空白试验⑤燃烧时要注意防爆⑥燃烧要完全⑦燃烧产生的烟雾完全被吸收第三节、药品质量标准分析方法验证一、需验证的项目：1.鉴别试验2.杂质检查3.含量测定4.防腐剂5.溶出度,释放度三、验证的内容1.准确度（accuracy）（1）定义：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度（2）一般用回收率(%)表示：回收率%=（测定平均值—空白值）/加入量×100%（3）数据要求：9个测定结果3个不同浓度(80,100,120％)，每个浓度各3份报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。（4）化学药：1）原料药：用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。2）制剂：要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，计算RSD。（5）中药：加样回收试验1）回收率%=（C-A)/BA为供试品所含被测组分的量