华北理工药物分析教案第7章 苯乙胺类药物的分析

1首页课程名称：《药物分析》第8周，第15讲次摘要授课题目（章、节）第七章苯乙胺类药物的分析Phenethylamine第一节典型药物的结构和性质第二节鉴别试验第三节特殊杂质检查第四节含量测定第五节体内药物分析【目的要求】通过本讲课程的学习，熟悉苯乙胺类药的结构和性质，掌握苯乙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。熟悉本类药物杂质的结构检查方法与限度。了解体内样品分析与监测。【重点】苯乙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。【难点】苯乙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。内容【本讲课程的引入】拟肾上腺素类药物，分子结构中大都具有苯乙胺基本结构。临床上应用广泛，本章主要介绍苯乙胺类拟肾上腺素药的性质及分析。板书“苯乙胺类Phenethylamine药物的分析”。写出章节的题目，参照讲稿列出标题；根据需要在每个标题下适当写出需解释的内容或强调重点、难点等。【本讲课程的内容】（一）苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质1．基本结构与典型药物RCHCHNHROHR123由于R1,R2,R3取代基的不同构成本类药物，药典收载的本类药物有20种，书中列举出14各品种的典型药物。例如：肾上腺素、去甲肾上腺素2．主要化学性质（1）弱碱性：烃氨基侧链，其氮为仲胺氮，故显弱碱性。（2）酚羟基特性：易氧化，可与金属离子络合呈色。邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。（3）光学活性：具有旋光活性。（4）苯环取代基特性：根据苯环取代基的电负性，最大吸收波长以254nm为中心红移或者蓝移；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。（二）鉴别试验21．与三氯化铁反应2．与甲醛-硫酸反应3．氧化反应酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色。4．紫外特征吸收与红外吸收光谱5．与亚硝基铁氰化钠反应（Rmini试验）为脂肪族伯胺的专属性反应。6．双缩脲反应为盐酸麻黄碱专属性的鉴别反应。盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。例：Chp2010，鉴别盐酸麻黄碱方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸铜试液2滴与20%氢氧化钠液1ml，即显蓝紫色，加乙醚1ml振摇、放置，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。盐酸去氧肾上腺素的鉴别：乙醚层不显色，可与盐酸麻黄碱区别(三)特殊杂质的检查1．酮体检查所有的典型药物中都要检查酮体。生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。例如：肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸甲氧明等2.光学纯度检查大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手性碳原子，通过比旋度测定控制药物的质量。手性药物光学纯度检查的最佳方法是实现对映体分离分析，目前常用的方法为色谱法和电泳法。例：重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度检查：称取重酒石酸去甲肾上腺素消旋体约50mg溶于5ml蒸馏水中，滴加氨水调pH为78；以乙酸乙酯萃取3次，所得乙酸乙酯层用蒸馏水洗涤2次，再用1g硫酸钠脱水，过滤除去硫酸钠，得到溶液置于50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得手性分离系统适用性溶液。同法制备(R)-重酒石酸去甲肾上腺素供试品溶液。取20l注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定。用ChiralpakAD-H色谱柱，；以正己烷-乙醇-乙醇胺(800∶200∶2)为流动相；检测波长为280nm；流速0.8ml/min。对映体的分离因子为7.2。通过手性高效液相色谱法分离，按峰面积归一化法，可以测定重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度33.有关物质的检查盐酸去氧肾上腺素和硫酸沙丁醇等药物列此项检查。TLC法检查有关物质例：盐酸去氧肾上腺素检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇－氯仿－浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查有关双胍取本品1.00g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录ⅤA）试验，精密吸取上述溶液0.2ml，分别点于两张色谱滤纸条(7.5cm×50cm)上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径均为0.5～1cm；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯－乙醇－水(6:3:1)为展开剂，展开至前沿距下端约7cm处，取出，晾干，用显色剂（取10％铁氰化钾溶液1ml，加10％亚硝基铁氰化钠溶液与10％氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15min，加水10ml与丙酮12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精密吸取甲醇各20ml分别进行萃取后，照分光光度法（附录ⅣA），在232nm的波长处测定吸收度，不得过0.48。（四）含量测定原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色谱法一、非水溶液滴定法非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行的酸碱滴定测定法。主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐以及有机酸碱金属盐类药物的含量。也用于测定某些有机弱酸的含量。非水滴定法表7-7中给出10种原料药的非水溶液测定法。①惰性溶剂：氯仿，甲苯，丙酮②酸性溶剂：冰醋酸③碱性溶剂：DMF4④两性溶剂：甲醇•非水溶液滴定法－弱碱性以冰醋酸为溶剂醋酸汞消除氢卤酸的干扰指示剂（终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将滴定结果用空白试验校正）若碱性较弱则加醋酐使突跃明显1.基本原理：BH+·A-+HClO4BH+·ClO4-+HA式中BH+·A-表示游离碱类盐；HA表示被置换出的弱酸。由于被置换出的HA的酸性强弱不同，因而对滴定反应的影响也不同。当HA酸性较强时，反应不能定量完成，根据化学反应平衡的原理，必须采取措施，除去或降低滴定反应产生的HA的酸性，使反应顺利地完成。因此，必须根据不同情况采用相应的测定条件。2．一般方法取经适当方法干燥的供试品适量（其量一般以消耗标准液约8ml为度），加冰醋酸10ml~30ml（必要时可温热使溶解，放冷）。若供试品为氢卤酸盐，应再加5%醋酸汞的冰醋酸溶液3ml~5ml，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至终点，并将滴定结果用空白试验校正。3．问题讨论（1）适用范围本法主要用于Kb＜10-8的有机碱盐，如有机酸盐、氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐及有机酸碱金属盐类的含量测定。（2）酸根的影响本类药物盐中被置换出的无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硝酸若在滴定过程中被置换出的HA，其酸性较强，则反应将不能进行到底，如测定杂环类药物氢卤酸盐时，由于被置换出的氢卤酸的酸性相当强，影响滴定终点，不能直接滴定，需要进行处理。一般处理方法是加入定量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其生成在醋酸中难解离的卤化汞，以消除氢卤酸对滴定的干扰与不良影响：2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2当醋酸汞加入量不足时,可影响滴定终点,而使测定结果偏低,但过量的醋酸汞(1～3倍)并不影响测定结果。5（3）滴定剂的稳定性本类药物的非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，且膨胀系数较大，因此温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品时与标定高氯酸溶液时的温差超过10℃时，则应重新标定。（4）终点指示方法非水溶液滴定法的终点确定，常用电位法和指示剂法。中国药典收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。二、溴量法利用分子结构中的酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量溴发生定量取代反应，再用碘量法测定剩余剩余的溴。盐酸去氧肾上腺素测定方法：取本品约0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)50ml，再加盐酸5ml,立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液(0.1mol/L)相当于3.395mg的C9H13NO2·HCl。三、亚硝酸钠法盐酸克仑特罗分子结构中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法测定方法：取本品约0.25g，精密称定，置100ml烧杯中，加盐酸溶液(1→2)25ml使溶解，再加水25ml，照永停滴定法，用亚硝酸钠滴定液(0.05mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.05mol/L)相当于15.68mg的C12H18Cl2N2OHCl四、紫外分光光度法&比色法利用分子结构中的酚羟基与铁离子络合呈色，测定盐酸异丙肾上腺素和盐酸多巴胺注射液；利用重氮化-偶合反应呈色，测定盐酸克伦特罗栓剂。盐酸甲氧明注射液含量测定：精密量取本品适量(约相当于盐酸甲氧明100mg)，置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在290nm的波长处测定吸光度，按C11H17NO3HCl的吸收系数()为137计算，即得五、高效液相色谱法高效分离，高灵敏度和高选择性－可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物6动力学研究。例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析色谱条件：色谱柱：ODS流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液－甲醇(65:35)，用磷酸调pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min，检测波长：280nm测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀释至刻度，摇匀，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重酒石酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。其他方法：提取酸碱滴定法苯法主要用于硫酸苯丙胺及其制剂的含量测定。荧光分光光度法利用本类药物分子结构中的邻苯二酚，可被弱氧化剂氧化而产生荧光。因此可采用此法测定其含量。体内药物分析(Bioanalysis)动物组织中的盐酸克伦特罗残留的测定—瘦肉精1.提取称取动物肝脏组织样品5g0.05g于带盖的聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸乙酯15ml，再加入10.0%碳酸钠溶液3ml，然后以10000r/min以上的速度匀质60秒，盖上盖子以5000r/min的速度离心2分钟，吸取上层有机溶剂于离心管中，在残渣中再加入乙酸乙酯10ml，在涡旋混合器上混合1分钟，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。在收集的有机溶剂中加入0.10mol/L的盐酸溶液5ml，涡旋混合30秒，以5000r/min的速度离心2分钟，吸取下层水溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液，用2.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至5.2。2.净化SCX小柱依次用甲醇5ml、水5ml和30mmol/L盐酸5ml活化，然后将上述萃取液上样至固相萃取小柱中依次用水5ml和甲醇5ml淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干SCX小柱，再用4%氨化甲醇溶液5ml洗脱，收集洗脱液。3.测定(1)衍生化：在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入甲苯100l和BSTFA(双三甲基硅烷三氟乙酰胺)100l，试管加盖后于涡旋混合器上振荡30秒，在80℃的烘箱中加热衍生1小时(盖住盖子)；同时吸取标准工作液0.5ml加入到4%氨化甲醇溶液4.5ml中，用氮气吹干后同样品操作，待衍生结束后加入甲苯0.3ml转入进样小瓶中，进行气相色谱-质谱(GC/MS)分析。(2)GC/MS测定参数：色谱柱HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm(内径)，0.25m(膜厚)；进样口温度220℃；进样方式不分流；