华北理工药物分析教案第8章 对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的分析

1课程名称：《药物分析》第8周，第16讲次摘要授课题目（章、节）第八章对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的分析第一节典型药物的结构和性质第二节鉴别试验第三节特殊杂质检查第四节含量测定第五节体内药物分析【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。熟悉本类药物杂质的结构,危害,检查方法与限度。了解:影响药物稳定性的主要因素,体内样品与临床监测【重点】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别含量测定的基本原理与方法。【难点】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别含量测定的基本原理与方法。内容【本讲课程的引入】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物是临床常用的一类局麻药，能在用药部位可逆性阻断感觉神经冲动发生与传导。板书“对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的分析”。写出章节的题目，参照讲稿列出标题；根据需要在每个标题下适当写出需解释的内容或强调重点、难点等。【本讲课程的内容】（一）对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质1．典型药物的结构本类药物均系苯胺的酰基衍生物，其结构共性是具有芳酰氨基2．主要化学性质（1）芳伯氨基特性：显重氮化-偶合反应。具有芳伯氨基(除盐酸丁卡因外)，故显重氮化-偶合反应；与芳醛缩合成Schiff碱反应；易氧化变色等。（2）水解特性：酯键或酰胺键的水解。（3）弱碱性：脂烃胺侧链叔胺氮原子具有碱性。（二）酰胺类药物的基本结构与主要化学性质1．典型药物的结构（1）水解后芳伯氨基特性结构中具有芳酰氨基，在酸性溶液中也可水解为芳伯氨基化合物，而显芳伯氨基特性反应。（2）水解产物易酯化（3）酚羟基的特性R3R4R1HNR2OOOR2R1HN2（4）弱碱性：脂烃胺侧链叔胺氮原子具有碱性。（5）与金属离子发生沉淀反应（三）鉴别试验1．重氮化-偶合反应盐酸普鲁卡因、苯佐卡因可直接发生重氮化偶合反应；对乙酰基酚可水解后发生此反应。分子结构中具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱性β-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。盐酸丁卡因分子结构中不具有芳伯氨基，无此反应，但其分子结构中的芳香仲胺在酸性溶液中与亚硝酸钠反应，生成N-亚硝基化合物的乳白色沉淀，可与具有芳伯氨基的同类药物区别。盐酸普鲁卡因ChP（2010）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。2．与金属离子的反应盐酸利多卡因可与铜、钴、汞离子反应而显色；盐酸普鲁卡因可与三氯化铁反应生成羟肟酸铁。盐酸利多卡因的鉴别方法取本品0.2g，加水20ml溶解后，取溶液2ml，加硫酸铜试液0.2ml与碳酸钠试液1ml，即显蓝紫色；加三氯甲烷2ml，振摇后放置，三氯甲烷层显黄色。说明：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因和盐酸丁卡因等，在同样条件下不发生此反应。盐酸利多卡因在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。盐酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞试液煮沸，显黄色；对氨基苯甲酸酯类药物显红色或橙黄色，可与之区别。盐酸普鲁卡因胺的鉴别方法取本品0.1g，加水5ml，加三氯化铁试液与浓过氧化氢溶液各1滴，缓缓加热至沸，溶液显紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色。羟肟酸铁盐反应3．水解产物的反应盐酸普鲁卡因碱水解可生成二乙氨基乙醇蒸汽均有碱性；苯佐卡因水解后生成乙醇可发生典仿反应。对氨基苯甲酸酯类药物分子中有些具有酯键结构，在碱性条件下可水解，利用其水解产物的特性或与某些试剂的反应可进行鉴别。盐酸普鲁卡因ChP（2010）取本品约0.1g，加水2mL溶解后，加10％氢氧化钠溶液1mL，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。4．制备衍生物测熔点盐酸利多卡因与三硝基苯酚形成的衍生物其熔点为194℃；盐酸丁卡因与硫氰酸盐形成的衍生物其熔点为131℃。35．紫外特征吸收光谱盐酸布比卡因（ChP2010）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释成每1ml中约含0.40mg的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸光度分别为0.530.58与0.430.48。。7．红外吸收光谱主要以盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺案为例进行解析。（四）特殊杂质的鉴别1．对乙酰氨基酚中的对氨基酚、对氯乙酰苯胺、偶氮苯等有关杂质的检查，采用比色法和薄层色谱法。2．盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查，采用TLC法。杂质来源：水解产生对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇结果导致注射液变黄、疗效下降、毒性增加。原料药及注射用灭菌粉末中杂质限量：0.5%注射液中杂质限量：1.2%检查方法：HPLC杂质对照品法3、盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质和光解产物的检查盐酸氯普鲁卡因在生产和贮藏过程中同样存在稳定性问题，其注射液在一定的灭菌温度、时间和溶液pH条件下，更易发生水解反应，生成4-氨基-2-氯苯甲酸降解产物。USP34-NF29：HPLC原料药中杂质限量：0.625%注射液中杂质限量：3.0%（五）含量测定1．亚硝酸钠滴定法（1）测定原理：芳伯氨基药物或水解后具有芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚4硝酸钠定量反应生成重氮盐（2）测定条件加适量溴化钾加快反应速度加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所以能加快重氮化反应速度。加过量盐酸加快反应速度：重氮化反应速度加快；重氮盐在酸性溶液中稳定；防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果。芳胺类药物与酸的摩尔比为1（2.56）。反应温度重氮化反应的速度与温度成正比，但是生成的重氮盐又随温度升高而加速分解。一般地，温度每升高10℃，重氮化反应速度加快2.5倍，但同时重氮盐分解的速度亦相应地加速2倍；所以滴定一般在低温下进行。由于低温时反应太慢，经试验，可在室温（1030℃）下进行，其中15℃以下结果较准确。室温（10－30°C）滴定速度：先快后慢。滴定管尖端插入液面下滴定，滴定管尖端插入液面下2/3处，滴定液一次大部分放下，然后将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定。尤其是在近终点时，因尚未反应的芳伯氨基药物的浓度极稀，须在最后一滴加入后，搅拌15分钟，再确定终点是否真正到达。（3）指示终点的方法：药品标准收载的方法为，①永定滴定法；②外指示剂法。2．非水溶液滴定法基于盐酸丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因侧链烃胺氮具有弱碱性。溶剂：冰醋酸与醋酐溶液滴定剂：高氯酸（0.1mol/L）指示滴定终点方法：电位法。在冰醋酸与醋酐溶液中，醋酐解离生成的醋酐合乙酰氧离子比醋酐合质子的酸性还强，有利于布比卡因碱性的增强，使滴定突跃敏锐。盐酸布比卡因的含量测定取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸20ml与醋酐20ml溶解后，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于32.49mg的C18H28N2OHCl。3．分光光度法对乙酰基酚的原料、片剂溶出度均采用此法测定。紫外分光光度法测定注射用盐酸丁卡因的含量取本品10瓶，分别加水溶解，并分别定量转移至250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取盐酸丁卡因对照品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各3ml，分别置于100ml量瓶中，加盐酸溶液(1→200)5ml与磷酸盐缓冲液(pH6.0)(取磷酸氢二钾20g与磷酸二氢钾80g，加水溶解并稀释至1000ml，用6mol/L磷酸溶液或10mol/L的氢氧化钾溶液调节pH至6.0)10ml，用水稀释至刻度，摇匀，照紫外-5可见分光光度法，在310nm的波长处分别测定吸光度，计算每瓶的含量，求出平均含量，即得。4．高效液相色谱法盐酸利多卡因注射液的含量测定色谱条件：固定相：C18；流动相：磷酸盐缓冲液（pH8.0）-乙腈(50∶50)检测波长：254nm。理论板数按利多卡因峰计算不低于2000精密量取本品适量(约相当于盐酸利多卡因100mg)置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20µL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取利多卡因对照品约85mg，精密称定，置50mL量瓶中，加1mol/L盐酸溶液0.5mL使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，并乘以1.156，即得。五、体内药物分析盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因、盐酸丁卡因和盐酸布比卡因是目前临床应用最多的局麻药物。由于这些药物均具有一定的毒副作用，加之其在临床应用甚为广泛，因此对其进行治疗监测一直为人们所重视。HPCE测定人血浆中的普鲁卡因、利多卡因、丁卡因和布比卡因实验方法：毛细管依次用1mol/LNaOH、0.1mol/LNaOH、蒸馏水各冲洗2分钟，再用运行缓冲溶液冲洗4分钟。每次分析后需用运行缓冲溶液冲洗2分钟，再进行下次分析。电泳分离条件：40mmol/L的H3PO4-Tris缓冲体系(pH5.0)，石英毛细管59.0cm(有效长度50.8cm)70m(id)，柱温18℃，压力进样3kPa5秒，工作电压20.0V，检测波长220nm。样品处理与测定：精密吸取含药血浆0.2mL，置2mL具塞刻度离心管中，加入1mol/LNaOH0.05ml，涡旋振荡1分钟，加乙醚-二氯甲烷(3∶7)混合溶剂1.2mL，振摇2分钟，以3500r/min离心10分钟，分取有机层，置2mL离心管中，30℃水浴氮气流下吹干，残留物加运行缓冲液溶解，进行毛细管电泳分析。【本讲课程的小结】今天我们主要讲了对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。本类药物杂质的结构,危害,检查方法与限度。学习了体内样品与临床监测。希望同学们重点学习。6【本讲课程的作业】1．盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是A.对氨基苯甲酸B.砷盐C.水杨酸D.有关物质2.直接和水解后能发生重氮化-偶合反应的药物有A.盐酸丁卡因B.盐酸普鲁卡因C.对乙酰氨基酚D.对氨基酚E.盐酸肾上腺素3.直接能与FeCl3产生颜色反应的药物有A.盐酸普鲁卡因B.盐酸去氧肾上腺素C.对乙酰氨基酚D.盐酸利多卡因E.盐酸丁卡因4.试述亚硝酸钠滴定法原理方法是什么？简述测定条件。