华北理工水处理生物学实验指导06微生物的染色

实验六微生物的染色一、目的学习微生物涂片染色的操作技术、掌握微生物的革兰氏染色法。二、实验器材1．菌种(由实验室提供)。2．显微镜、载玻片、接种环、酒精灯等。3．染料革兰氏染色剂1)草酸铵结晶紫染色液甲液结晶紫2.5g95％酒精25mL乙液草酸铵1g蒸馏水100mL混合甲、乙两液即成。2)碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL先将碘化钾溶解在一小部分水中，再将碘溶解在碘化钾溶液中，然后加入其余的水即成。3)沙黄染色液沙黄(蕃红)2.5g95％酒精100ml取上述配好的沙黄酒精溶液10mL与90mL蒸溜水混匀，即成沙黄稀释液，作革兰氏染色用。三、操作方法及步骤革兰氏染色1．将实验所供菌种按单染色法作涂片、干燥并固定。2．在涂面上，加草酸铵结晶紫染色液一滴约1min后，水洗。3．加碘液1min后，水洗。4．斜置载玻片于一烧杯之上，滴加95％酒精脱色，并轻轻摇动玻片，至流出的酒精不现紫色时立即停止滴加(约滴加0.5—1min)，随即水洗。为了节约酒精，也可将酒精滴至涂片上，静置0.5—1min后水洗。酒精脱色程度必须严加掌握。如脱色过度，则阳性菌会被误染为阴性菌，而脱色不够时，阴性菌将被误染为阳性菌。5．加沙黄复染液0.5min，水洗。6．吸干，置于油镜下观察，阳性者为紫色，阴性者为红色。四、思考题1．微生物的染色原理是什么?2．你用革兰氏染色法染色后看到的细菌是什么颜色，属于革兰氏阴性还是阳性?革兰氏染色法在微生物学中有何重要意义?3．革兰氏染色法中若只做1—4的步骤而不用沙黄复染液复染，是否能分出革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，为什么?4．微生物经固定后，是死了呢还是仍活着?