西南林大现代生化仪器分析课件11高效毛细管电泳分析第4节 高效毛细管电泳分离模式

2023/3/10第十一章高效毛细管电泳分析法一、毛细管区带电泳(CZE)capillaryzoneelectrophoresis二、毛细管凝胶电泳(CZE)capillarygelelectrophoresis三、胶束电动毛细管色谱micelleelectrokineticcapillaryelectrophoresis四、毛细管等电聚焦(CIEF)capillaryisoelectricfocusing五、毛细管等速电泳capillaryisotachophoresis第四节高效毛细管电泳分离模式highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCEseparatetypesofHPCE2023/3/10分离类型八种分离类型，介绍常用的几种；根据试样性质不同，采用不同的分离类型；每种机理的选择性不同；2023/3/10一、毛细管区带电泳capillaryzoneelectrophoresis，CZE带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出；阴离子：两种效应的运动方向相反；ν电渗流ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。最基本、应用广的分离模式；2023/3/10二、毛细管凝胶电泳capillarygelelectrophoresis，CGE将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DAN排序的重要手段。特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高。无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。2023/3/101.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。三、胶束电动毛细管色谱（MECC，MEKC）micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKC在电场力的作用下，胶束在柱中移动。2023/3/102.电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流ν电泳，负电胶束以较慢的速度向负极移动；5.色谱与电泳分离模式的结合。3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长；4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围；2023/3/101.根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术；2.毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度；3.氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零；四、毛细管等电聚焦capillaryisoelectricfocusing，CIEF2023/3/104.聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离；5.阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液；6.加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测；7.电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。2023/3/101.将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。2.负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。五、毛细管等速电泳capillaryisotachophoresis，CITP2023/3/103.不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小；沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队；4.特点：界面明显，富集、浓缩作用；capillaryisotachophoresis，CITP2023/3/10在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程；六、毛细管电渗色谱capillaryelectroosmosticchromatography，CEC2023/3/10请选择内容第一节概述generalization第二节高效毛细管电泳的理论基础basictheoryofHPCE第三节高效毛细管电泳仪器highperformancecapillaryelectrophoresisapparatus第四节高效毛细管电泳的分离模式separatetypesofHPCE第五节应用与进展applicationandadvancesofHPCE结束