糖化血红蛋白检测标准化进程

糖化血红蛋白检测标准化进程会议汇报会议简介时间：2011.10.22-25举办方：上海临床检验中心会议主题：糖化血红蛋白标准化进程糖化血红蛋白糖化血红蛋白在糖尿病筛查、诊断、治疗效果评价上，有优越的特性和重要的意义，甚至可以称为金标准。一、糖化血红蛋白的形成GHb：顾名思义即糖基化的血红蛋白。是葡萄糖分子和HbA某些特殊部位分子经缓慢而不可逆的糖基化而形成的产物GHb包括HbA1和HbA0.糖基化：非酶促反应将糖基加到蛋白质氨基酸基团上，不可逆的。血红蛋白有四个亚基，成人内绝大多数为α2β2，这两种亚基都可被糖基化。血红蛋白血红蛋白属色蛋白,由血红素与珠蛋白组成。珠蛋白含四条肽链。成人血中,珠蛋白肽链主要有四种即α、β、γ和δ,构成三种血红蛋白。其中主要是HbA(α_2β_2),HbA_2(α_2δ_2),HbF(α_2γ_2)。血红蛋白Hb的蛋白质部分叫珠蛋白，它是由两对肽链组成的四聚体。每条肽链各结合一个血红素，故每分子Hb均含有4条肽链和4个血红素。HbA1c的形成过程葡萄糖与HbA的β链-N端的缬氨酸残基发生氨基反应，形成醛亚胺化物（前HbA1c），其性质不稳定。醛亚胺经脱水，分子重新排列，通过酮氨基和葡萄糖连接，成为氨基酮化合物，其性质稳定，此反应不可逆。葡萄糖+血红蛋白前HbA1c稳定HbA1c（醛亚胺）（氨基酮）Hemoglobin糖化反应Hemoglobinβchain-NH2+glucose快速慢速＋HCOIHCOHIHOCHIHCOHIHCOHICH2OHHCN-βchainIHCOHIHOCHIHCOHIHCOHICH2OHCH2NH-βchainICOIHOCHIHCOHIHCOHICH2OHAldimine（Schiff碱)(LabileHbA1c)不稳定型A1cKetoamine（酮胺化合物）(StableHbA1c)稳定型A1cHbA1的组成HbA1:HbA的组成HbA1：HbA1a，HbA1b，HbA1c。HbA1a：1.HbA1a1----β链-N端的缬氨酸残基与1，6二磷酸果糖发生氨基反应生成。2.HbA1a2----β链-N端的缬氨酸残基与6磷酸葡萄糖发生氨基反应生成HbA1b----β链-N端的缬氨酸残基与丙酮酸发生氨基反应生成HbA1c----β链-N端的缬氨酸残基与葡萄糖发生氨基反应生成HbA0----糖基化反应发生在β链末端以外位点时，如发生在赖氨酸残基或者α、γ和δ链。HemoglobinHbstructureβ-N%HbA0α2β2-90%HbA2α2δ2-2.5%*HbFα2γ2-1.0%*HbA1a1α2β2F-1.6-DP1.0%HbA1a2α2β2G-6-DP1.0%HbA1bα2β2?1.0%HbA1cα2β2Glucose4-6%*HbA1dα2β2?-HbA1的形成过程总结葡萄糖分子和血红蛋白A组分的β链-N端的缬氨酸残基经缓慢而不可逆的非酶促反应所形成的产物称为糖化血红蛋白（HbA1c）。特点：HbA1c的多少与葡萄糖的含量高低呈正相关系,间接反映一段时间内血糖浓度的改变,及机体糖代谢的状态.HbA1c的特点HbA1c的形成是不可逆的，其浓度与红细胞寿命、血红蛋白的结构和该时期内血糖平均浓度有关。不受每天葡萄糖波动影响，作为实验室指标是优于血糖的。不受运动与饮食的影响半衰期为35天反映过去6-8周平均血糖浓度评价血糖控制情况的可靠实验室指标参考值HbA1c正常参考值4～6%糖尿病患者HbA1c≦7%时，说明血糖水平控制较好HbA1C是血糖监测的重要标准4%~6%：正常值糖尿病人：6%~7%：控制理想。7%~8%：可以接受。8%~9%：控制不好＞9%：控制很差，慢性并发症发生发展的危险因素很大。HbA1C是血糖监测的重要标准血糖控制目标——达标！IDF2005:HbA1cFPSPBS6.5%6.07.0mmol/L二HbA1c的临床意义1、增高：过去一段时间血糖高于正常范围，测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。2、降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。HbA1c的临床意义3.作为糖尿病的病情监测指标HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。4.妊娠期糖尿病：对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。5、对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。6、对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，＞10％甚至更高的情况，应警惕如酮症酸中毒等急性合并症的发生。HbA1c的临床意义总结总结：糖化血红蛋白是不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应患者过去2-3个月的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。是糖尿病诊断及治疗效果监测评价的金指标。三HbA1c的检测原理GHb与非GHb的电荷差异:离子交换色谱(HPLC)电泳血红蛋白糖化基团的结构差异：亲和层析免疫法HbA1c的检测方法HPLC(1)离子交换层析(2)硼酸亲和层析◆免疫分析(1)放射免疫法、酶免疫法(2)乳胶免疫凝集法◆电泳法离子交换高效液相色谱HPLC原理：用高效微粒离子交换剂作固定相（层析柱），以具有一定pH值的缓冲溶液（洗脱液）作流动相，依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可逆性离子交换能力的差别而实现分离。在中性pH条件下,HbA1c携带的正电荷相对较少,因此可通过HPLC法将其与其它组分(HbA1b,HbA1a,HbF,HbA0)区分开,得到分离。Sysmex的G7应用HPLC原理，结果准确可靠。HbA1c的检测方法免疫法HbH1c的单克隆抗体与胶乳颗粒交联，形成致敏颗粒，遇HbH1c发生结合而进行凝集反应，其浊度与HbH1c量成正比，通过测定吸光度（透射比浊）计算HbA1c量。主要应用在大型生化分析仪。HbA1c的检测方法电泳琼脂糖凝胶电泳等电聚焦电泳胶体颗粒在一定条件下可以带有电荷，带有电荷的胶体颗粒可以借静电吸引力在电场中泳行，带正电荷者泳向负极，带负电荷者泳向正极，此种现象称为电泳。血清中各种蛋白质都有它特有的等电点，各种蛋白质在各自的等电点时呈中性状态，它的分子所带正电荷与所带负电荷量相等。糖化和非糖化的血红蛋白所带电荷不同四HbA1c标准化的必要性1.HbA1c检测有多种方法2.不同的方法可能应用的不同原理3.对糖尿病人而言，HbA1c值差1%就很大了4.同一个患者到一家医疗机构测定和到另一家医疗机构测定所得到的结果完全不同，这是一个严重的问题。达不到检验报告检验报告互认要求。标准化的目的目的：实现各实验室间结果的一致可比，即互认。。意义（益处）：–可以建立起普遍接受（可用）的参考区间–可以合并分析、比较不同医学中心的研究资料，促进医学研究和研究成果的转化–有效提高病人的诊疗效率，减轻经济负担。–节约医疗资源方法（手段）：溯源标准化的途径明确定义HbA1c建立一个特异测定HbA1c的参考方法制备高度纯化的一级标准物质建立国际参考实验室网络五影响糖化血红蛋白测定结果的因素仪器状态，操作规范性。一些血红蛋白亚型，如HbS、HbC、HbF和HbE，导致假性的升高或降低；任何改变红细胞寿命的因素，如溶血性贫血、慢性疟疾、再生障碍性贫血、大量失血或输血；有一些临床少见的情况，如进展迅速的1型糖尿病，这时HbA1c就可能没法“赶上”急性血糖变化的速度总结平时所说的糖化血红蛋白就是HbA1cHbA1c糖尿病诊断及治疗效果监测评价的金指标。HbA1c检测的重要性越来越明显，逐步为临床和病人接受，检测会越来越多HbA1c检测十分需要一个标准化谢谢！