抗伏马菌素B1单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及ELISA试剂盒

中国医科大学硕士学位论文抗伏马菌素B,1单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及ELISA试剂盒的研制姓名：宫慧芝申请学位级别：硕士专业：儿少卫生与妇幼保健学指导教师：杨军20050501抗伏马菌素B,1单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及ELISA试剂盒的研制作者：宫慧芝学位授予单位：中国医科大学相似文献(8条)1.期刊论文江涛.宫慧之.李凤琴.计融.JiangTao.GongHui-zhi.LiFeng-qin.JiRong抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备及试剂盒的研制-卫生研究2006,35(2)目的为了能够快速检测粮谷类食品中伏马菌素B1的污染水平,研制具有我国自主知识产权的针对伏马菌素B1快速检测试剂盒.方法制备了能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了敏感、特异、快速的酶联免疫吸附试验检测方法,最终形成具有中国自主知识产权的伏马菌素B1快速检测试剂盒.结果该试剂盒所用单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,亲和常数为8.3×10-8mol/L.该抗体与其他结构类似物无明显交叉反应,具有较高的特异性.试剂盒对伏马菌素B1最低检出限5ng/ml,标准曲线的线性范围(50～500ng/m1),回归方程Y=-0.582X+1.793(r=0.99,P＜0.05);对玉米作50ng/ml,200ng/ml和500ng/ml3个加标浓度的回收率在71.89%～112.95%之间;试剂盒在常温状态下有效期至少10个月;实验室内的变异系数和实验室间的变异系数均小于20%.2.期刊论文江涛.王玉平.韩春卉.宫慧之.计融抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备和特性-军事医学科学院院刊2004,28(6)目的:建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisinB1,FB1)的酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法:利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果:用伏马菌素B1-牛血清白蛋白(FB1-BSA)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为5A9.将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到单克隆抗体.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为2.56×106,参考工作浓度为3.2×105.纯化后抗体的IgG含量为10.4g/L,亲和常数为8.3×10-8mol/L.该抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒.3.期刊论文许金俊.陈飞.秦爱建.陶建平.彭金彪.邵红霞.金文杰抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备与特性鉴定-细胞与分子免疫学杂志2007,23(10)目的:制备抗伏马菌素B1(FumonisinB1,FB1)单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定.方法:人工合成免疫原BSA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的mAb,通过间接ELISA和间接竞争ELISA筛选阳性克隆.以间接竞争ELISA法对mAb的敏感性、特异性、亲和力等特性进行检测,并对其效价、亚类、稳定性等特性进行鉴定.结果:获得了1株稳定分泌抗FB1mAb的杂交瘤细胞(命名为5H12-C6-C2),其亚类为IgG2b,腹水和上清效价分别为1∶1.28×106和1∶3.2×103,亲和常数为3.13×106M-1.mAb的间接竞争ELISA法灵敏度为0.09088mg/L,与FB1的类似物FB2有轻微交叉反应,与污染玉米的另外5种真菌毒素ZEN、AFB1、DON、T-2、OA以及载体蛋白BSA和OVA无交叉反应性,稳定性良好.结论:成功地制备了抗FB1特异性mAb,为开展FB1免疫学检测方法的研究提供了有力的工具.4.期刊论文宫慧芝.计融.杨军.江涛.GONGHui-zhi.JIRong.YANGJun.JIANGTao伏马菌素B1单抗制备及其ELISA方法的研究-中国医科大学学报2008,37(5)目的建立应用单克隆抗体的伏马荫素B1(FB1)的间接竞争酶联免疫吸附检测方法.方法利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗FB1单克隆抗体,建立FB1间接竞争酶联免疫吸附方法.结果制备了稳定分泌抗FB1毒素单克隆抗体的杂交瘸细胞株,分泌的抗体为IgGl亚类,亲和常数为6.72×109L/mol.该方法最低检出浓度为5μg/L,校正曲线的线性范围50～500μ/L,线性方程Y=-0.582X+1.793(r=0.99,P0.05).回收率在71.89%～112.95%之间,平均凹收率为100.23%.实验室内的变异系数和实验室间的变异系数均小于20%.结论分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株稳定,检测方法快速、灵敏、特异.5.期刊论文宫慧芝.计融.杨军.江涛.李凤琴伏马菌素B1免疫学检测方法的建立-中国公共卫生2006,22(7)目的建立应用单克隆抗体的伏马菌素B1(fumonisinB1,FB1)间接竞争酶联免疫吸附检测方法.方法利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗FB1单克隆抗体,建立FB1间接竞争酶联免疫吸附方法.结果建立稳定分泌抗FB1毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体为IgG1亚类,分子量150KD,腹水稀释度为1:2.0×108,亲和常数为6.72×109L/mol.FB1间接竞争酶联免疫吸附方法的最低检出浓度为5μg/L,校正曲线的线性范围50～500μg/L,线性方程Y=-0.582X+1.793(r=0.99,P＜0.05);与脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T-2毒素均无交叉反应.回收率71.89%～112.95%,平均回收率100.23%.结论所建立的检测方法具有快速、简便、灵敏的特点,可满足实际工作需要.6.期刊论文许金俊.陈飞.秦爱建.陶建平.彭金彪.邵红霞.金文杰.戴先礼.XUJin-jun.CHENFei.QINAi-jian.TAOJian-pin.PENGJin-biao.SHAOHong-xia.JINWen-jie.DAIXian-li伏马菌素B1免疫学检测方法的研究-中国人兽共患病学报2007,23(11)目的制备抗伏马菌素B1(FumonisinB1,FB1)单克隆抗体,在此基础上建立一种可用于定量检测玉米中FB1含量的间接竞争ELISA方法.方法人工合成免疫原BSA-FB1和包被抗原OVA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的单抗,并对其特性进行鉴定.以OVA-FB1作为包被抗原,FB1为竞争抗原,两者与一定量的抗FB1单抗竞争反应,建立检测FB1的间接竞争ELISA方法,对玉米样品进行初步检测应用.结果获得了1株稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞(命名为5H12-C6-C2).对间接竞争ELISA方法进行反应条件优化后,建立了检测FB1的标准曲线,回归方程为y=1.113-0.313x,相关系数R2为-0.990,最适可测范围为10ng/ml～1000ng/ml,灵敏度为90.88ng/nl,最低检测限为7.83ng/ml,方法的批内和批间平均变异系数分别为3.24%和2.45%,样品添加平均回收率为94.32%.结论成功地制备了抗FB1特异性单抗,建立了FB1的间接竞争ELISA检测方法,为进一步研制FB1检测试剂盒奠定了基础.7.期刊论文宫慧芝.计融.杨军.江涛.李凤琴.韩春卉伏马菌素B1单抗ELISA检测试剂盒研制-中国公共卫生2007,23(8)目的研制快速检测粮食中伏马菌素B1(FB1)的试剂盒.方法在制备抗FB1单克隆抗体基础上,利用间接竞争酶联免疫吸附方法研制FB1快速检测试剂盒.结果该试剂盒最低检出浓度为5ng/ml,校正曲线线性范围50～500ng/ml,线性方程Y=-0.582X+1.793(r=0.99,P＜0.05).与脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T-2毒素均无交叉反应.回收率在71.89%～112.95%之间,平均回收率为100.23%.试剂盒常温下可保存225d,实验室内的变异系数和实验室间变异系数均＜20%.结论该试剂盒快速、简单、灵敏,可满足实际工作需要.8.期刊论文郭云昌.刘秀梅.刘江.GuoYunchang.LiuXiumei.LiuJiang伏马菌素B1免疫检测方法的研究-卫生研究1999,28(4)本研究建立了用于检测粮食、饲料中伏马菌素B1(FB1)的快速、灵敏、简便的免疫检测方法-建立在单克隆抗体基础上的直接竞争性酶联免疫吸附测定方法(DC-ELISA法);其最低检出浓度为10ng/ml,线性范围在10ng～5μg/ml.对新疆、安徽、黑龙江、哈尔滨四省市玉米样品中的FB1含量进行了测定,结果表明156份样品中有34份检出FB1,阳性率为21.79%,含量在0.18～31.32μg/g范围内,平均含量为12.04μg/g.本文链接：授权使用：上海海事大学(wflshyxy)，授权号：cfe6fe44-0ae0-425b-8171-9dec012b9c17下载时间：2010年9月9日