NYT 4195.4-2022 农药登记环境影响试验生物试材培养 第4部分：家蚕

20221111发布－－20230301－－实施农药登记环境影响试验生物试材培养第4部分：家蚕17中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ65.020CCSB4195.4—2022Guidanceonthehousingandcareoforganismsusedforenvironmentalimpacttestofpesticideregistration—Part4:Silkworm(Bombyxmori)ＮＹ／Ｔ中华人民共和国农业农村部发布NY/T４１９５􀆰４—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.NY/T４１９５«农药登记环境影响试验生物试材培养»分为８个部分:———第１部分:蜜蜂;———第２部分:日本鹌鹑;———第３部分:斑马鱼;———第４部分:家蚕;———第５部分:大型溞;———第６部分:近头状尖胞藻;———第７部分:浮萍;———第８部分:赤子爱胜蚓.本文件是NY/T４１９５«农药登记环境影响试验生物试材培养»的第４部分.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口.本文件起草单位:农业农村部农药检定所.本文件主要起草人:赵秀振、单炜力、赵巧玲、袁善奎、沈兴家、王胜翔、周欣欣、陈朗、王寿山.ⅠNY/T４１９５􀆰４—２０２２农药登记环境影响试验生物试材培养第４部分:家蚕１　范围本文件规定了农药环境影响试验用家蚕的引种、验收、催青、收蚁和饲育管理等技术方法,以及记录资料要求.本文件适用于试验用家蚕幼虫培养.适用于一代杂交种,包括春用蚕品种菁松×皓月,夏、秋用蚕品种两广二号、秋丰×白玉等.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.NY/T３２７　桑蚕一代杂交种检验规程NY/T１０９３　桑蚕一代杂交种繁育技术规程３　术语和定义下列术语和定义适用于本文件.３􀆰１滞育　diapause昆虫生命活动过程中某一特定的发育时期,出现生长发育暂时停止的现象.家蚕以胚胎(卵)滞育.３􀆰２催青　incubation给已经解除滞育的蚕卵适当的温度、湿度和光照条件,使其孵化的过程.３􀆰３蚁蚕　newlyＧhatchedsilkwormlarvae从蚕卵里孵化出来尚未取食的幼虫,身体呈现褐色或赤褐色,身体小如蚂蚁.３􀆰４眠　molting家蚕幼虫生长到一定程度后,吐出少量丝,将腹足固定在蚕座上.不吃不动,头、胸部昂起,如睡眠状态.３􀆰５饷食　firstfeeding家蚕幼虫眠起后第１次喂食.３􀆰６龄期　instar家蚕幼虫相邻２次蜕皮之间所经历的时间.３􀆰７熟蚕　maturedsilkworm５龄末期家蚕停止取食,将身体中的粪便排出,体躯缩短,丝腺充满整个体腔,身体呈半透明状,头胸部昂起,左右摆动,口吐丝缕,寻找结茧的位置.１NY/T４１９５􀆰４—２０２２３􀆰８羽化　eclosion蚕蛹经过发育变为成虫,并破茧而出的过程.４　饲养设备与饲料４􀆰１　饲养设备宜选用光照培养箱或人工气候箱,并配备培养皿、棉纸、蚕网、蔟具等蚕具,在催青前至少７d进行消毒处理.４􀆰２　培养箱消毒方法４􀆰２􀆰１　紫外消毒法先用清水擦拭内壁,再用７０％~７５％的酒精擦拭,通风１０min后,紫外灯照射３０min.４􀆰２􀆰２　化学消毒法先用清水擦拭内壁,再用有效氯１􀆰０％漂白粉溶液对培养箱进行喷雾或擦拭处理,密闭保湿３０min.４􀆰３　蚕具消毒方法４􀆰３􀆰１　高压灭菌法将洗净的培养皿等蚕具置于灭菌锅中１２１℃下灭菌３０min.４􀆰３􀆰２　煮沸消毒法:将培养皿等蚕具洗净后,置于沸水中消毒至少３０min.４􀆰３􀆰３　化学消毒法:洗净的蚕具可用有效氯１􀆰０％漂白粉溶液浸泡３０min.４􀆰３􀆰４　消毒后的蚕具宜放置在消过毒的场所晾干.４􀆰４　饲料４􀆰４􀆰１　应选用新鲜、清洁、无污染的桑叶作为家蚕饲料.４􀆰４􀆰２　于早晨雾散、露干后或傍晚夕阳未落时采摘新鲜桑叶.饲喂前用清水洗净,晾干或擦干叶面水分.５　引种与验收５􀆰１　引种５􀆰１􀆰１　应选择能够提供蚕种生产、经营许可证的供应商.５􀆰１􀆰２　蚕种生产应符合NY/T１０９３和NY/T３２７的规定,蚕种标签应当注明企业(种场)名称、企业(种场)地址、品种名称、期别、批次、执行标准、卵量等内容.５􀆰１􀆰３　尽可能缩短蚕种运输时间,运输过程中应避光及雨淋,防止剧烈震动和接触有毒物质,避免高温(＞３０℃)、低温(＜０℃)等恶劣情况,以保证蚕种质量.５􀆰２　验收５􀆰２􀆰１　引种后,实验室应进行验收检查,包括形态检查和孵化率检查.５􀆰２􀆰２　形态检查检查蚕卵的形态、色泽和饱满度等.正常蚕卵呈椭圆形扁平状,卵涡呈椭圆形,死卵的卵涡呈三角形或有棱角的下凹;受精卵呈灰褐色或灰绿色,未受精卵为黄色或浅黄色.５􀆰２􀆰３　孵化率检查在蚕种引入后或试验前,取少量蚕卵进行孵化率(按６的要求执行)检查,孵化率应＞９５％.５􀆰３　蚕种保存刚收到的蚕种应冷藏(２℃~８℃)避光保存,保存时间最长不超过２个月,并在规定期限内催青使用.６　催青与收蚁６􀆰１　催青日期根据试验用蚕日期确定催青日期,必要时可提前进行催青时间测试.标准条件下蚕卵胚胎发育时间２NY/T４１９５􀆰４—２０２２表见附录A.６􀆰２　催青方法６􀆰２􀆰１　蚕种从冷藏室中取出后,平摊于容器中,先置于１０℃~１５℃环境中平衡１h~２h,再放入培养箱培养.６􀆰２􀆰２　催青期间温度、湿度及光照条件见附录A,或简化为:温度(２５±１)℃,相对湿度７０％~９０％,自然光照或人工光照,光照周期为:１６h~１８h光照,６h~８h黑暗.蚕卵发育到己４(点青期)(附录图A􀆰１)时,转为黑暗培养.６􀆰３　收蚁６􀆰３􀆰１　孵化当天早上感光,２h~３h后收蚁,收蚁全过程不能超过２h.如需延迟收蚁,可在蚕卵发育到转青卵(附录图A􀆰１)时转为３℃~５℃避光冷藏保存,但延迟不宜超过５d.冷藏处理前后,需置于中间温度１０℃~１５℃平衡４h~６h.延期收蚁时,应检查孵化率不低于９５％,方可用于试验.６􀆰３􀆰２　收蚁方法可用桑叶收蚁法,将新鲜无污染的桑叶整片或切成条状置于蚕卵上.待蚁蚕爬上桑叶后,将爬有蚁蚕的桑叶移入饲育盒中.７　饲育管理７􀆰１　幼虫期７􀆰１􀆰１　幼虫期的饲育条件见附录B􀆰１,用叶要求见附录B􀆰２.７􀆰１􀆰２　幼虫眠前应及时除沙并换上消毒眠网,眠期应保持环境安静,空气新鲜,避免强风和振动,温度宜比同龄期降低１℃~２℃,相对湿度７０％~７５％.７􀆰１􀆰３　眠起饷食不宜过早,刚蜕皮的蚕头部为灰白色,变为淡褐色时,头左右摆动,显示求食状态时为饷食适期.饷食叶要求新鲜,适熟偏嫩,给桑不宜过多.７􀆰１􀆰４　饲育期间应淘汰弱小蚕、病蚕、迟眠蚕和晚起蚕,保证试验用蚕体质强健,发育整齐.７􀆰２　蛹期７􀆰２􀆰１　５龄末期,见有熟蚕征兆时可抓蚕上蔟.蔟具宜使用折蔟,并在蔟下铺放吸水性强的材料.蔟中温度(２４±１)℃,相对湿度６０％~７５％,弱光照,保持空气流通,避免直吹.７􀆰２􀆰２　熟蚕上蔟终了后５d~８d采茧,采茧时操作应温和.７􀆰３　羽化成虫蚕茧采收后平摊于容器中,温度(２４±１)℃、相对湿度６０％~９０％条件下,经２周左右完成成虫发育,蜕去蛹皮,吐出碱性肠液,润湿并疏解茧层,用胸足拨开茧丝钻出,羽化成蛾.８　记录资料对于每批次家蚕,实验室应保存完整的培养记录见附录C,包括:———家蚕引种记录见附录表C􀆰１;———家蚕催青与收蚁记录见附录表C􀆰２;———家蚕饲育记录见见附录表C􀆰３.３NY/T４１９５􀆰４—２０２２附　录　A(资料性)标准条件下蚕卵胚胎发育时间表　A􀆰１　标准条件下蚕卵胚胎发育时间表标准条件下蚕卵胚胎发育时间表见表A􀆰１.表A􀆰１　标准条件下家蚕卵胚胎发育时间表催青日期胚子发育阶段设定温度,℃相对湿度,％光照滞育期丙１(临界期Ⅰ)１５􀆰５~１７８０~８１第１d丙２(最长期)１９~２０７４~７９第２d丁１~丁２(突起发生期)２２７５第３d戊１(突起发达前期)２２７５第４d戊２(突起发达后期)２４７６自然光照第５d戊３(缩短期)２５７９第６d己１(反转期)２５７９第７d己２(反转终了期)２５􀆰５８１第８d己３(气管显现期)２５􀆰５８４每日光照１７h~１８h第９d己４(点青期)２５􀆰５８４第１０d己５(转青期)２５􀆰５８４全天黑暗第１１d孵化２５􀆰５８４早晨感光A􀆰２　蚕卵胚胎发育图蚕卵胚胎发育图见图A􀆰１.４NY/T４１９５􀆰４—２０２２标引序号说明:１———受精期;７———尾节分化期;１３———越冬Ⅳ期(乙２);１９———突起发达后期(戊２);２５———气管显现期(己２);２———核裂期;８———滞育Ⅰ期;１４———临界期Ⅰ(丙１);２０———头胸分节期(戊２缩短期);２６———点青Ⅰ期;３———胚盘形成期;９———滞育Ⅱ期;１５———临界期Ⅱ(丙２最长期);２１———反转期(己１)(２１A􀆰反转前期２１B􀆰反转中期２１C􀆰反转后期);２７———点青Ⅱ期;４———胚带形成期;１０———越冬Ⅰ期;１６———神经沟出现期(丁１肥厚期);２２———反转终了期(己２);２８———转青Ⅰ期;５———头叶分化期;１１———越冬Ⅱ期;１７———腹肢突起出现期(丁２);２３———毛瘤发生期;２９———转青Ⅱ期;６———匙形期;１２———越冬Ⅲ期(乙１);１８———上唇突起出现期(戊１);２４———刚毛发生期;３０———孵化期.图A􀆰１　蚕卵胚胎发育图５NY/T４１９５􀆰４—２０２２附　录　B(资料性)各龄期家蚕幼虫的饲育条件　B􀆰１　各龄期家蚕幼虫的饲育条件各龄期家蚕幼虫的饲育条件见表B􀆰１.表B􀆰１　各龄期家蚕幼虫的饲育条件家蚕龄期１２３４５温度,℃(２７±１),每增长一个龄期,最适温度降低１(２４±１),以２３~２５为宜相对湿度,％９０~９５８５~９０８０~８５７５~８０７０~７５光照周期(光暗比h∶h)１６∶８１６∶８１６∶８１６∶８１６∶８光照强度,lx１００~３００１００~３００１００~３００１００~３００１００~３００给桑次数,次/d２~３２~３２~３４~５４~５切桑大小,cm２０􀆰２５~１􀆰０１􀆰０~２􀆰５４􀆰０~６􀆰０片叶或粗切叶片叶或芽叶除沙次数眠除１次起、眠各１次起、中、眠各１次起、眠除,每日１次起除,每日一次B􀆰２　各龄期家蚕幼虫对桑叶的要求应使用新鲜、无污染桑叶作为饲料.各龄期家蚕幼虫对桑叶的要求见表B􀆰２.表B􀆰２　各龄期家蚕幼虫用叶要求龄期收蚁当日１２３４５春季叶色黄绿色嫩绿色绿色较深绿色深绿色深绿色叶位生长芽第１叶生长芽第２~３叶生长芽第３叶或止芯芽第１叶止芯芽叶、生长芽成熟叶止芯芽叶或生长成熟片叶所有叶均可秋季叶色黄绿色嫩绿色浅绿色绿色较深绿色深绿色叶位最大叶上１叶最大叶或最大叶上１叶最大叶下１叶第６叶~７叶第８叶~１２叶除基部５叶~６叶外６NY/T４１９５􀆰４—２０２２附　录　C(资料性)记录表格示例　家蚕引种记录见表C􀆰１.家蚕催青与收蚁记录见表C􀆰２.家蚕饲育记录见表C􀆰３.表C􀆰１　家蚕引种记录家蚕品种名称生产单位名称提供单位名称提供单位的地址蚕种期别蚕种批次执行的标准卵量引入方式运输条件接收时间接收时蚕种状态蚕种批号(实验室内)接收人/日期保存地点保存条件备注表C􀆰２　家蚕催青与收蚁记录家蚕品种:　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　光照周期:家蚕批次:　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　仪器编号:日期记录时间温度℃相对湿度％记录人备注收蚁日期:感光时间:收蚁时间:表C􀆰３　家蚕饲育记录家蚕品种: