NYT 4225-2022 天然生胶 脂肪酸含量的测定 气相色谱法

20221111发布－－20230301－－实施天然生胶脂肪酸含量的测定气相色谱法72中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.040.10CCSBRubber,rawnatural—Determinationofthecontentoffattyacids-GaschromatographyＮＹ／Ｔ中华人民共和国农业农村部发布4225—2022NY/T４２２５—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.请注意本文件的某些内容有可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部农垦局提出.本文件由农业农村部热带作物及制品标准化技术委员会归口.本文件起草单位:中国热带农业科学院农产品加工研究所、海南省天然橡胶质量检验站.本文件主要起草人:王兵兵、潘琪、张福全、黄世清、廖禄生、卢光、李一民.ⅠNY/T４２２５—２０２２天然生胶　脂肪酸含量的测定　气相色谱法警示———使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验.本文件并未指出所有可能的安全问题.使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件.１　范围本文件描述了天然生胶中脂肪酸含量的测定方法.本文件适用于天然生胶中肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、花生酸７种脂肪酸含量的测定.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法GB/T１５３４０　天然、合成生胶取样及其制样方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理天然生胶中的长链脂肪酸(碳原子数≥１４)经过甲酯化反应后,再进行萃取,然后对萃取物进行气相色谱分析,采用内标法定量计算各种脂肪酸的含量.５　试剂警示———处理甲苯溶液应在通风橱内进行.除非另有规定,仅使用确认的分析纯试剂.５􀆰１　水,GB/T６６８２,二级.５􀆰２　甲苯(CAS１０８Ｇ８８Ｇ３),ρ＝０􀆰８６６g/cm３,含量不低于９９􀆰５％(质量分数).５􀆰３　甲醇(CAS６７Ｇ５６Ｇ１),ρ＝０􀆰７９１g/cm３,含量不低于９９􀆰５％(质量分数).５􀆰４　浓硫酸(CAS７６６４Ｇ９３Ｇ９),ρ＝１􀆰８４g/cm３,含量不低于９８􀆰０％(质量分数).５􀆰５　无水硫酸钠(CAS７７５７Ｇ８２Ｇ６),ρ＝２􀆰６８g/cm３,含量不低于９９􀆰０％(质量分数).５􀆰６　碳酸氢钠(CAS１４４Ｇ５５Ｇ８),ρ＝２􀆰１６g/cm３,含量不低于９９􀆰８％(质量分数).５􀆰７　二氯甲烷(CAS７５Ｇ０９Ｇ２),色谱纯,ρ＝１􀆰３２５g/cm３,含量不低于９９􀆰９％(质量分数),含５０mg/kg~１５０mg/kg异戊烯稳定剂.５􀆰８　脂肪酸标准品,肉豆蔻酸(C１４H２８０２,CAS５７６７７Ｇ５２Ｇ８)、十五烷酸(C１５H３０O２,CAS１００２Ｇ８４Ｇ２)(内标物)、棕榈酸(C１６H３２O２,CAS５７Ｇ１０Ｇ３)、十七烷酸(C１７H３４O２,CAS５０６Ｇ１２Ｇ７)、硬脂酸(C１８H３６O２,CAS５７Ｇ１１Ｇ４)、油酸(C１８H３４０２,CAS１１２Ｇ８０Ｇ１)、亚油酸(C１８H３２O２,CAS６０Ｇ３３Ｇ３)、花生酸(C２０:０,CAS５０６Ｇ３０Ｇ９),纯度不低于９９％(质量分数).５􀆰９　甲苯/甲醇共沸混合溶剂,将２７６mL甲苯(５􀆰２)置于１０００mL单标线容量瓶(６􀆰９)中,并用甲醇(５􀆰３)稀释至１０００mL,制得甲苯/甲醇共沸混合溶剂.１NY/T４２２５—２０２２５􀆰１０　饱和碳酸氢钠溶液,称取６５g碳酸氢钠(５􀆰６),精确至０􀆰１g,置于５００mL广口锥形烧瓶(６􀆰８)中,加入４００mL温度为６０℃的蒸馏水,搅拌溶解冷却后,制得饱和碳酸氢钠溶液.５􀆰１１　内标十五烷酸溶液,准确称取(１􀆰２５０±０􀆰００１)g的十五烷酸标准品,置于２５０mL单标线容量瓶(６􀆰９)中,并用甲苯/甲醇共沸混合溶剂(５􀆰９)稀释至２５０mL,制得内标十五烷酸溶液.６　仪器设备实验室常规仪器及以下仪器设备.６􀆰１　实验室开炼机.６􀆰２　水浴锅,(７５±０􀆰２)℃.６􀆰３　电子天平,精确至０􀆰１mg.６􀆰４　气相色谱仪,带有氢火焰离子化FID检测器.６􀆰５　蛇形回流冷凝器,长度为３００mm,磨口为２４/４０.６􀆰６　圆底烧瓶,容量为１００mL,磨口为２４/４０.６􀆰７　锥形分液漏斗,容量为２５０mL.６􀆰８　广口锥形烧瓶,容积为５００mL.６􀆰９　单标线容量瓶,容量分别为５０mL、２５０mL和１０００mL.６􀆰１０　高形烧杯,容量为１００mL.６􀆰１１　玻璃止沸珠.６􀆰１２　一次性无菌注射针管,规格为１０mL.６􀆰１３　有机相滤膜,材质为尼龙６６,孔径为０􀆰４５μm.７　试验步骤警示———甲酯化萃取操作应在通风橱内进行.７􀆰１　取样和试样制备　标引序号说明:　１———冷凝水进口;　２———冷凝水出口.图１　回流冷凝器装置图按GB/T１５３４０的规定取样并对生胶样品进行均匀化.称取均匀化样品(１０±２)g,在(２７±３)℃下通过实验室开炼机(６􀆰１)过辊１０次;每次过辊时,应将胶片打卷或对折.调节辊距,使胶片最终厚度约２􀆰５mm,再剪成小细条(约１mm×１０mm)状试样待测备用.进行双份平行测定.７􀆰２　试样的甲酯化反应准确称取均匀化处理后的细条状生胶试样３􀆰０g(m０)(精确至０􀆰１mg),置于１００mL圆底烧瓶中,然后依次加入３个玻璃止沸珠(６􀆰１１)、５５mL甲苯/甲醇共沸混合溶剂(５􀆰９)、１mL内标十五烷酸溶液(５􀆰１１)和０􀆰５ml浓硫酸(５􀆰４),再将圆底烧瓶(６􀆰６)置于水浴锅(６􀆰２)中并将其与蛇形回流冷凝器(６􀆰５)连接(调整冷凝水流速,以确保回流完全),打开水浴锅使试样溶液在７５℃下回流反应１８h,得到试样的甲酯化溶液.回流冷凝器装置如图１所示.７􀆰３　脂肪酸标准品的甲酯化反应准确称取每种脂肪酸标准品各０􀆰０５g(mi)(精确到０􀆰１mg),置于圆底烧瓶中作为校准标准品,然后依次加入３个玻璃止沸珠(６􀆰１１)、５５mL甲苯/甲醇共沸混合溶剂(５􀆰９)、１mL内标十五烷酸溶液(５􀆰１１)和０􀆰５mL浓硫酸(５􀆰４),在７５℃下的水浴锅内回流反应１８h,得到校准标准２NY/T４２２５—２０２２品混合物的甲酯化溶液.７􀆰４　甲酯化产物的萃取将７􀆰２和７􀆰３所得到的甲酯化溶液分别转移至高型烧杯(６􀆰１０)中,加热浓缩至２０mL左右,加入１０mL饱和碳酸氢钠溶液(５􀆰１０),摇匀倒入２５０mL锥形分液漏斗(６􀆰７);将１０mL二氯甲烷(５􀆰７)和２mL水加入烧杯(促进溶液快速萃取分层),润洗后倒入分液漏斗.待溶液完全分层后,用干净的１００mL高形烧杯回收底相溶液(P１),再次加入１０mL二氯甲烷和２mL水进行二次萃取,用同一只烧杯回收二次萃取溶液的底相溶液(P２),得到混合底相溶液(P１＋P２)后,再加入５g无水硫酸钠(５􀆰５),旋转烧杯确保水分被完全吸干.将脱水后的混合底相溶液转移至５０mL单标线容量瓶(６􀆰９)中,使用二氯甲烷稀释至刻度,静置澄清后,用１０mL一次性无菌注射针管(６􀆰１２)抽取约９mL澄清液,取下注射针头,换上０􀆰４５μm有机相滤膜(６􀆰１３),推动注射器,分别过滤并收集所得试样与脂肪酸标准品的萃取待测溶液.７􀆰５　气相色谱分析７􀆰５􀆰１　气相色谱参考条件７􀆰５􀆰１􀆰１　色谱柱,甲基聚硅氧烷非极性毛细管柱.７􀆰５􀆰１􀆰２　载气,氮气,流速１mL/min,分流比２５∶１.７􀆰５􀆰１􀆰３　进样口温度,２３０℃.７􀆰５􀆰１􀆰４　检测器温度,２５０℃.７􀆰５􀆰１􀆰５　柱温箱温度,初始温度１５０℃,以２℃/min升温至２１０℃后保持５min,再以５０℃/min升温至２３０℃后保持５min.７􀆰５􀆰１􀆰６　进样量,１μL.７􀆰５􀆰２　标准品的测定移取２mL校准标准品混合物萃取待测溶液(７􀆰４)至进样瓶,按７􀆰５􀆰１的色谱条件进行气相色谱检测,得到内标十五烷酸甲酯的峰面积(An),各个标准品脂肪酸甲酯的峰面积(Ai)及各脂肪酸标准品的相应出峰时间(见附录A).７􀆰５􀆰３　样品的测定移取２mL试样萃取待测溶液(７􀆰４)至进样瓶,每个试样萃取液使用气相色谱法进行双份平行测定,得到生胶试样萃取溶液中内标十五烷酸甲酯的峰面积(Bn),各个脂肪酸甲酯的峰面积(Bi).通过与校准标准品混合物图谱比对定性,与内标物十五烷酸的峰面积比对定量,计算出试样中各个脂肪酸甲酯的含量(Wi).８　结果表示８􀆰１　标准品的校准响应因子按式(１)计算各标准品脂肪酸甲酯的响应因子(Rfi).Rfi＝An×miAi×mn(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:Rfi———脂肪酸甲酯i的响应因子;An———校准标准品混合物萃取溶液中内标十五烷酸甲酯的峰面积;mi———校准标准品混合物萃取溶液中脂肪酸甲酯i的质量数值,单位为克(g);Ai———校准标准品混合物萃取溶液中脂肪酸甲酯i的峰面积;mn———校准标准品混合溶液中内标十五烷酸甲酯的质量数值,单位为克(g).８􀆰２　试样中每种脂肪酸的含量生胶试样中脂肪酸i的含量(Wi),按式(２)计算.Wi＝Bi×mn×RfiBn×m０(２)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:３NY/T４２２５—２０２２Wi———生胶试样中脂肪酸i的含量数值,单位为百分号(％);Bi———生胶试样萃取溶液中脂肪酸甲酯i的峰面积;mn———生胶试样萃取溶液中内标十五烷酸甲酯的质量数值,单位为克(g);Rfi———脂肪酸甲酯i的响应因子;Bn———生胶试样萃取溶液中内标十五烷酸甲酯的峰面积;m０———生胶试样的质量数值,单位为克(g).双份平行测定结果的相对偏差不应大于１０％.试验结果以双份平行测定结果的平均值表示,数值精确至小数点后两位.８􀆰３　试样中总脂肪酸的含量生胶试样中脂肪酸的总含量(W),按式(３)计算.W＝∑Wi(３)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:W———生胶试样中脂肪酸的总含量数值,单位为百分号(％);Wi———生胶试样中脂肪酸i的含量数值,单位为百分号(％).双份平行测定结果的相对偏差不应大于１０％.试验结果以双份平行测定结果的平均值表示,数值精确至小数点后两位.９　试验报告试验报告应包括下列内容:a)　本文件编号;b)　标识样品的所有详细内容;c)　测定结果;d)　可能影响试验结果的任何异常现象;e)　试验日期.４NY/T４２２５—２０２２附　录　A(资料性)８种脂肪酸甲酯标准溶液参考图谱　标引序号说明:１———肉豆蔻酸;２———十五烷酸;３———棕榈酸;４———十七烷酸;５———亚油酸;６———油酸;７———硬脂酸;８———花生酸.图A􀆰１　８种脂肪酸甲酯标准溶液参考色谱图５NY/T４２２５—２０２２参　考　文　献[１]　IchiharaK,FukubayashiY􀆰PreparationoffattyacidmethylestersforgasＧliquidchromatography[J]􀆰JournalofLipidResearch,２０１０,５１(３):６３５Ｇ６４０􀆰[２]　KwangSeoPark,YunJuKim,EunKyungChoe􀆰CompositionCharacterizationofFattyAcidZincSaltsbyChromatographicandNMRSpectroscopicAn