DB37T 3690.3-2020 液体菌种制备技术规程 第3部分：平菇

ICS65.020.20CCSB05山东省地方标准DB37/T3690.3—202037液体菌种制备技术规程第3部分：平菇Technicalspecificationsforthepreparationofliquidspawn—Part3:Pleurotusostreatus2020-12-04发布2021-01-01实施山东省市场监督管理局发布DB37/T3690.3—2020I目次前言.................................................................................II1范围...............................................................................12规范性引用文件.....................................................................13术语和定义.........................................................................14基本要求...........................................................................24.1工作人员卫生要求...............................................................24.2场所要求.......................................................................24.3厂房要求.......................................................................24.4生产设施与设备要求.............................................................25生产技术...........................................................................35.1工艺流程.......................................................................35.2母种活化.......................................................................35.3摇瓶液体菌种生产...............................................................35.4发酵罐液体菌种生产.............................................................45.5贮藏...........................................................................56生产档案...........................................................................6附录A（规范性）平菇液体菌种生产记录事项.............................................7DB37/T3690.3—2020II前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是DB37/T3690《液体菌种制备技术规程》的第3部分。DB37/T3690已经发布了以下部分：——第1部分：香菇；——第2部分：黑木耳；——第3部分：平菇；——第4部分：灵芝。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省农业农村厅提出并组织实施。本文件由山东省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：山东省农业技术推广总站、泰安市农业科学研究院、山东省农业科学院农业资源与环境研究所、济南市农业技术推广站、菏泽市定陶区特色农产品服务中心。本文件主要起草人：赵淑芳、高瑞杰、高霞、王庆武、高中强、司元明、张燕、崔慧、桑卫民、黄春燕、韩建东、王晓婷、彭玮航、孙振福、张晓雱、马化彬。DB37/T3690.3—20201液体菌种制备技术规程第3部分：平菇1范围本文件规定了平菇（Pleurotusostreatus）液体菌种的术语和定义、基本要求、生产技术和生产档案管理等要求。本文件适用于平菇液体菌种的制备。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB150.1压力容器第1部分：通用要求GB4789.28食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB5749生活饮用水卫生标准GB/T12728食用菌术语GB19172平菇菌种GB50073洁净厂房设计规范NY/T528食用菌菌种生产技术规程3术语和定义GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1食用菌液体菌种发酵罐ediblemushroomliquidspawnfermenter进行食用菌液体菌种培养的专用发酵设备，是利用生物发酵原理，给菌丝生长提供最佳的营养、酸碱度、温度、供氧量等生长条件，使菌丝快速生长，迅速扩繁，在短时间达到一定菌球数量的专用容器。3.2罐压jarpressure在液体菌种发酵制备过程中发酵罐内保持的空气压力（表压）。注：单位为MPa。3.3通气量ventilationvolume在液体菌种培养过程中发酵罐体积与每分钟通入发酵罐中无菌空气体积的比例。注：用V/V（发酵罐体积/通入空气体积）表示。3.4接种量inoculationamount液体菌种体积与培养基体积的比例。注：用百分数表示。DB37/T3690.3—202023.5液体菌种菌龄periodofliquidspawnrunning液体菌种接入培养基开始计算的液体菌种培养时间。3.6发酵罐空消emptyfermentersterilization对尚未加水投料的空发酵罐进行高压灭菌。3.7发酵罐实消fermentersterilization对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。3.8空气过滤器airfilter能对食用菌液体菌种发酵罐所用空气进行滤除杂菌和其他杂质，达到无菌洁净要求的设备。3.9摇瓶液体菌种liquidspawninshakeflask装至玻璃菌种瓶内在磁力搅拌器或恒温摇床上培养的液体菌种。3.10终止pHinitialpHvalueofmedium液体菌种达到放灌指标时的培养基pH。4基本要求4.1工作人员卫生要求工作人员应该保持个人卫生，进液体菌种发酵车间应穿戴经消毒处理的工作服、口罩、鞋、帽等。4.2场所要求生产场所应符合NY/T528的环境卫生要求，场地开阔、路面硬化。生产用水应符合GB5749要求。4.3厂房要求4.3.1厂房设计应符合NY/T528环境卫生要求，增设摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室。4.3.2应设置与工作人员数量相适应的更衣室，车间入口处应设置洗手、消毒和干手设施。过道应设置风淋室。4.3.3车间地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，有适当的排水坡度（1.0°～1.5°）和良好的排水系统；墙壁和天花板应能防潮、防霉、防水。4.3.4车间安装排气管道或者排风设备。4.3.5摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室应符合GB50073要求。4.3.6车间设封闭式废物桶。4.4生产设施与设备要求4.4.1生产设施培养基配制室、摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室规模要配套，布局合理，摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室要有调温设施，其中培养基配制室空间洁净度应达到万级以上。菌种检验室和母种制作室要有相应的实验检测设备和制种用的灭菌设施。DB37/T3690.3—202034.4.2生产设备与用具应具有称量器、高压蒸汽灭菌锅、液体菌种发酵罐、液体菌种接种器、超净工作台、调温设备、除湿设备、恒温培养箱、恒温摇床或磁力搅拌器、冰箱、显微镜等及常规用具。压力容器应经政府有关部门检验合格，符合GB150.1的要求。应具有备用电源。5生产技术5.1工艺流程工艺流程见图1。图1平菇液体菌种生产工艺流程5.2母种活化母种活化配方及操作流程应符合NY/T528要求。活化后母种质量应符合GB19172要求。5.3摇瓶液体菌种生产5.3.1容器要求使用无色或近无色专用玻璃菌种甁，可用棉塞（梳棉或化纤棉）、硅胶塞、专用封口透气膜封口。5.3.2培养基配方宜选用以下配方，且培养基质应符合NY/T528要求：a)配方1：马铃薯（煮汁）200g/L、葡萄糖20g/L，pH自然；b)配方2：葡萄糖20g/L、蛋白胨3g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、维生素B15mg/L，pH自然；c)配方3：马铃薯（煮汁）200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L，维生素B110mg/L，pH自然。5.3.3培养基配制按液体培养基配方配制，混合均匀，装入摇瓶中，装液量为摇甁容量的50%～60%，瓶塞封口，并用报纸或牛皮纸包扎。5.3.4灭菌DB37/T3690.3—20204将分装好的摇瓶放入灭菌锅内，锅内留有一定的空隙。检查锅内水位，立即灭菌。灭菌蒸汽压力升至0.11MPa～0.13MPa，恒压维持20min～30min。5.3.5接种待培养基冷却至室温，在无菌条件下，用接种针挑取5～6块（3～5）mm×（3～5）mm的母种块迅速转接于摇甁培养基内，封口。5.3.6摇瓶液体菌种培养23℃～25℃条件下，静置培养24h，然后置于摇床上震荡培养，转速140r/min～160r/min，培养时间4d～6d。5.3.7摇瓶液体菌种质量要求菌液澄清透明，菌丝体分布均匀，无异味，有平菇特有的香气；镜检无杂菌、菌丝形态正常。5.4发酵罐液体菌种生产5.4.1发酵罐空消发酵罐初次使用、出现杂菌、长期放置、更换品种等情况出现其一时，应空消。蒸气压力0.14MPa、温度126℃，维持40min。5.4.2发酵罐液体菌种培养基配方宜选用以下配方，且培养基质应符合NY/T528要求：a)配方1：马铃薯（煮汁）200g/L、葡萄糖20g/L、消泡剂0.3g/L，pH自然；b)配方2：葡萄糖20g/L、蛋白胨3g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、维生素B15mg/L、消泡剂0.3g/L，pH自然；c)配方3：马铃薯（煮汁）200g/L、葡萄糖20g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、维生素B110mg/L、消泡剂0.3g/L，pH自然。5.4.3上罐、定容用水把原料搅拌均匀，加入罐内，装液量为罐体容量的70%～80%，通入空气搅拌1min～2min，混合均匀，拧紧上料口盖。5.4.4发酵罐实消发酵罐夹套通入冷水，水位低于排水口20cm，关闭进水阀、排水阀后加热。待夹套蒸汽压力达到0.05MPa时，缓慢打开排气阀降压至0MPa，关闭排气阀，再次升压至0.1MPa～0.14MPa；待发酵罐罐内蒸汽压力达到0.05MPa时，缓慢打开排气阀降压至0MPa，关闭排气阀，再次升压至0.11MPa～0.12MPa，同时打开空气过滤器灭菌，微开排气阀，维持50min～60min。5.4.5冷却灭菌结束，关闭空气过滤器灭菌阀与排气阀，缓慢打开夹套排气阀降压至0MPa，通入冷水降温；同时缓慢打开发酵罐罐内排气阀降压，待压力接近0.02MPa～0.04MPa时向罐内通入无菌空气，调整排气阀，维持罐压0.04MPa～0.05MPa，培养液温度降