DB3301T 1119-2023 杂交兰种苗组培快繁技术规程

ICS65.020.20CCSB053301浙江省杭州市地方标准DB3301/T1119—2023杂交兰种苗组培快繁技术规程2023-02-28发布2023-03-28实施杭州市市场监督管理局发布学兔兔—2023I前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由杭州市农业农村局提出、归口并组织实施。本文件起草单位：杭州市农业科学研究院。本文件主要起草人：李春楠、傅巧娟、张晓莹、赵福康、钱丽华、阮若昕、沈国正。学兔兔—20231杂交兰种苗组培快繁技术规程1范围本文件规定了杂交兰种苗组培扩繁的组培苗培养、组培苗驯化移栽、质量等级、包装、标签和运输的要求。本文件适用于杂交兰种苗组培扩繁至驯化栽培的生产过程。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则NY/T496—2010肥料合理使用准则通则NY/T1276—2007农药安全使用规范总则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。杂交兰Cymbidiumhybrid由国兰和大花蕙兰种间杂交选育的一类兰花杂交种。类原球茎protocorm-likebodies兰花外植体诱导培养时，茎尖生长点组织逐渐膨大形成的、可发育成完整试管苗的扁形球状物。4组培苗培养外植体的选择和处理4.1.1母株的预处理于春秋季，宜使用50%多菌灵可湿性粉剂800倍液等广谱杀菌剂，对长势均匀、无病虫害且带有新生芽的健康母株进行灌根处理，每隔3天1次，连续处理2次～3次，放置于通风良好、清洁、干燥的环境，温度宜15℃～25℃，光照宜8000lux～12000lux。4.1.2外植体的选取母株基质干透后，选择苞叶尚未展开、露出基质表面2cm～6cm的新生芽，从基部切断取下，置于无菌样品袋中带回实验室。学兔兔—202324.1.3外植体消毒4.1.3.1用洁净的软毛刷轻刷外植体表面，去除表面污垢，浸入洗洁精等清洁剂中震荡清洗50min～80min，再流水充分冲洗，置于超净工作台上。4.1.3.2剥去1片～2片外苞叶，75%酒精浸泡消毒90s，无菌水清洗2次～3次。4.1.3.3再剥去1片～2片外苞叶，浸入10%NaClO溶液，加入2滴～3滴吐温20，处理10min，无菌水清洗3次～4次。4.1.3.4浸入0.1%HgCl2溶液，加入2滴～3滴吐温20，根据芽的大小灭菌15min～17min，无菌水清洗5次～6次。4.1.3.5再剥去1片～2片外苞叶，将剥离的芽浸入0.05%HgCl2溶液中消毒60s，无菌水清洗5次～6次。初代培养4.2.1接种取消毒后的芽，剥离0.3cm～0.5cm的茎尖组织接种于初代培养基诱导类原球茎。4.2.2培养基培养基配方宜为：1/2MS+1mg/L6-BA+1mg/LIBA+1g/L活性炭+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值5.6～5.8。4.2.3培养条件光照16h/d，光照强度500lux～1000lux，温度（25±1）℃；暗培养时温度为（20±1）℃。继代培养4.3.1转接初代培养60d后，将诱导形成的类原球茎分割为体积约0.4cm×0.4cm×0.4cm的团块，接种于继代培养基上，每隔60d～75d继代一次，分割时去除类原球茎上分化的芽和根，继代次数不宜超过12代。4.3.2培养基培养基配方宜为：Hyponex1（花宝1号）+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+50g/L香蕉泥+2g/L水解酪蛋白+1g/L活性炭+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值5.6～5.8。4.3.3培养条件光照16h/d，光照强度500lux～1000lux，温度（25±1）℃；暗培养时温度为（20±1）℃。分化培养4.4.1转接将增殖的类原球茎分割为体积约0.4cm×0.4cm×0.4cm的团块，转接至分化培养基上分化成芽，类原球茎之间的距离不宜少于1.5cm。4.4.2培养基学兔兔—20233培养基配方宜为：1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+10%椰汁+0.2g/L活性炭+20g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值5.6～5.8。4.4.3培养条件光照16h/d，光照强度1200lux～2000lux，温度（25±1）℃；暗培养时温度为（20±1）℃。生根培养4.5.1转接待芽长至3cm～5cm时，将其切下接种于生根培养基培养50d～70d。4.5.2培养基培养基配方宜为：Hyponex1（花宝1号）+0.1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+100g/L香蕉泥+2g/L水解酪蛋白+1g/L活性炭+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值5.6～5.8。4.5.3培养条件光照16h/d，光照强度2000lux～2500lux，温度（25±1）℃；暗培养时温度为（20±1）℃。5组培苗驯化移栽瓶苗驯化当苗高长至8cm～12cm、根数达到3条～5条、根长3cm～5cm时，将瓶苗转移至温室驯化培养，覆盖70%遮阳率的遮阳网5d～7d，而后揭去遮阳网继续培养10d～20d，移栽前，打开瓶口放置2d～3d。光照强度宜4000lux～5000lux，白天温度宜25℃～30℃，夜间温度不宜低于20℃，宜春、秋两季驯化。瓶苗移栽取出幼苗，洗净根部培养基，宜用50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液等广谱杀菌剂浸泡15min，晾干至根变白后移栽至营养钵。宜选用经消毒的基质，体积比为松鳞、鹿沼土与仙土=1:1:1。幼苗栽培管理栽后具体管理措施详见附录A。6质量等级组培苗质量等级见附录B。7包装、标签和运输包装7.1.1组培瓶苗学兔兔—20234将符合质量标准的组培瓶苗用封口膜封住瓶口，整齐排列装于纸箱中，瓶与纸箱之间用海绵等缓冲物隔离填充。7.1.2营养钵苗将营养钵苗整齐排列于纸箱中，缝隙用海绵等缓冲物隔离填充。幼苗在包装前应根据运输时间和环境控制基质水分含量，一般包装时栽培基质含水量根据包装方式及贮运时间控制，通常应控制在50%以内，外观为表面基质较干，盆内基质湿润。密封的包装箱箱侧应设通风孔。标签每箱应贴上标签，标明品种名称、等级、数量、产地、出苗日期等，并在纸箱上做好“请勿倒置”的明显标志。运输运输时选择整洁的保温车辆，车厢内温度保持在15℃～25℃之间，车辆行驶过程中避免剧烈颠簸以防组培瓶破碎或幼苗脱落，并应在5h以内到达目的地。此外，不宜在严寒、酷热天气运输。8模式图杂交兰种苗生产模式图见附录C。学兔兔—20235AA附录A（资料性）杂交兰组培苗栽后管理杂交兰组培苗栽后管理措施参见表A.1。表A.1杂交兰组培苗栽后管理措施光照根据实际环境调节光照，加强通风，栽后15d内弱光照，遮阳70%～80%，光照强度不超过3000lux；15d～30d可适当增加光照强度，一般不超过5000lux；30d后进一步增加光照，但不宜超过8000lux。温度幼苗最适温度为15℃～30℃，早晚温差5℃～15℃。浇水幼苗移栽后第一次浇水浇透，之后视天气情况，基质见干即浇。一般春秋季每5d～7d浇一次，夏季每2d～4d浇一次，冬季每7d～10d浇一次。施肥幼苗定植缓苗15d后，施一次时效180d、N：P：K比例为13：13：13的颗粒缓释肥1g～3g，或每周施一次1500倍N：P：K比例为20：20：20的水溶性肥料。肥料使用应按照NY/T496—2010的要求执行。病虫害预防缓苗15d～30d后，每隔15d喷施杀菌剂，杀菌剂可选择戊唑醇、多菌灵、可杀得3000或咪鲜胺；根据虫害发生情况，杀虫剂可选用阿维菌素、爱卡螨或哒螨灵防治红蜘蛛，速勒马与盈辉优玛复配剂防治蓟马，吡虫噻嗪酮防治蚧壳虫，吡虫啉防治蚜虫。施药防治应按照GB/T8321（所有部分）和NY/T1276—2007的要求执行。学兔兔—20236BB附录B（资料性）杂交兰组培苗产品质量等级杂交兰组培苗产品质量等级参见表B.1。表B.1组培苗产品质量等级评级项目等级一级二级整体特征幼苗生长旺盛，粗壮，挺拔，有活力，色泽正常，与原品种保持一致。幼苗生长正常，符合原品种特征。苗高8cm～12cm。低于8cm或高于12cm。叶片数5片及以上。少于5片。根系根系粗壮结实，具有3条～5条根，最长根长5cm～8cm。具有2条～3条或＞5条根，最长根长＜5cm或＞8cm。整齐度整齐一致，同一批次90%以上的苗高达标。整齐一致，同一批次80%以上的苗高达标。有无污染无污染。无污染或有轻微污染。学兔兔标准下载