农业农村部公告 第350号1 沙咪珠利残留检测方法标准(试行)

沙咪珠利残留检测方法标准（试行）鸡可食性组织中沙咪珠利残留量的测定高效液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了动物源性食品中沙咪珠利残留量制样和高效液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于新鲜或冷冻鸡肌肉、皮脂、肝脏及肾脏中沙咪珠利及去乙酰基沙咪珠利残留的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中的沙咪珠利及去乙酰基沙咪珠利用乙腈和10%碳酸钠溶液提取，正己烷除脂，高效液相色谱-串联质谱法检测，外标法定量。4试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1乙腈：色谱纯。4.1.2甲醇4.1.3甲酸：色谱纯。4.1.4乙腈4.1.5正己烷4.1.6碳酸钠4.2溶液配制10%碳酸钠溶液：取碳酸钠10g，用水溶解并稀释至100mL，混匀。4.3对照品4.3.1沙咪珠利：C18H16N4O4含量≥99.5%。4.3.2去乙酰基沙咪珠利：C16H14N4O3含量≥97.5%。4.4标准溶液配制4.4.1沙咪珠利和去乙酰基沙咪珠利标准贮备液（1mg/mL）：精密称取沙咪珠利和去乙酰基沙咪珠利对照品各10.0mg，分别置10mL量瓶中，用甲醇适量使溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL的沙咪珠利和去乙酰基沙咪珠利标准贮备液。4℃以下避光保存，有效期为1个月。4.4.2沙咪珠利标准工作液（100μg/mL）：精密量取1.0mg/mL沙咪珠利标准贮备液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为100μg/mL的标准工作液。4℃避光保存，有效期1周。4.4.3沙咪珠利标准工作液（10μg/mL）：精密量取100μg/mL的标准工作液1.0mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为10μg/mL的标准工作液。4℃避光保存，有效期1周。4.4.4沙咪珠利标准工作液（1.0μg/mL）：精密量取10μg/mL的标准工作液1mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配成浓度分别为1.0μg/mL。4℃避光保存，有效期1周。4.4.5沙咪珠利标准工作液（0.4μg/mL）：精密量取10μg/mL的标准工作液0.4mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配成浓度分别为0.4μg/mL。4℃避光保存，有效期1周。4.4.6沙咪珠利标准工作液（0.2μg/mL）：精密量取1.0μg/mL的标准工作液2mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为0.2μg/mL的标准工作液；4℃避光保存，有效期1周。4.4.7沙咪珠利标准工作液（0.1μg/mL）：精密量取1.0μg/mL的标准工作液1.0mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为0.1μg/mL的标准工作液；4℃避光保存，有效期1周。4.4.8沙咪珠利标准工作液（0.02μg/mL）：精密量取0.2μg/mL的标准工作液1.0mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为0.02μg/mL的标准工作液；4℃避光保存，有效期1周。4.4.9沙咪珠利标准工作液（0.01μg/mL）：精密量取0.1μg/mL的标准工作液1.0mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为0.01μg/mL的标准工作液；4℃避光保存，有效期1周。4.4.10去乙酰基沙咪珠利标准工作液（100μg/mL）：精密量取1.0mg/mL去乙酰基沙咪珠利标准贮备液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为100μg/mL的标准工作液。4℃避光保存，有效期1周。4.4.11去乙酰基沙咪珠利标准工作液（10μg/mL）：精密量取100μg/mL的标准工作液1.0mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为10μg/mL的标准工作液。4℃避光保存，有效期1周。4.4.12去乙酰基沙咪珠利标准工作液（1.0μg/mL）：精密量取10μg/mL的标准工作液1mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配成浓度分别为1.0μg/mL。4℃避光保存，有效期1周。4.4.13去乙酰基沙咪珠利标准工作液（0.4μg/mL）：精密量取10μg/mL的标准工作液0.4mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配成浓度分别为0.4μg/mL。4℃避光保存，有效期1周。4.4.14去乙酰基沙咪珠利标准工作液（0.2μg/mL）：精密量取1.0μg/mL的标准工作液2mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为0.2μg/mL的标准工作液；4℃避光保存，有效期1周。4.4.15去乙酰基沙咪珠利标准工作液（0.1μg/mL）：精密量取1.0μg/mL的标准工作液1.0mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为0.1μg/mL的标准工作液；4℃避光保存，有效期1周。4.4.16去乙酰基沙咪珠利标准工作液（0.02μg/mL）：精密量取0.2μg/mL的标准工作液1.0mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为0.02μg/mL的标准工作液；4℃避光保存，有效期1周。4.4.17去乙酰基沙咪珠利标准工作液（0.01μg/mL）：精密量取0.1μg/mL的标准工作液1.0mL，置10mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为0.01μg/mL的标准工作液；4℃避光保存，有效期1周。5仪器和设备5.1高效液相色谱串联质谱仪。5.2分析天平：感量0.00001g。5.3天平：感量0.01g。5.4均质机5.5离心机：转速4000r/min以上。5.6涡旋仪5.7移液器：量程为0.5～5mL、0.1～1mL、0.02～0.2mL。5.8具盖刻度离心管：50mL、15mL、2mL。5.9有机滤膜：孔径0.22μm。6试料的制备与保存6.1试料的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试鸡肌肉、皮脂、肝脏、肾脏组织，绞碎并使均质。——取均质的供试样品，作为供试试料。——取均质的空白样品，作为空白试料。——取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2试料的保存-20℃保存。7测定步骤7.1提取称取试料2.0g（准确至±0.02g）置50mL具盖离心管中，先加入10%Na2CO3溶液1mL，涡旋混匀，加入乙腈8mL，涡旋混匀，超声30min，涡旋，5000r/min离心10min，取上清液置15mL具盖离心管，用乙腈加至10mL，混匀，吸取1mL，置2mL具盖离心管中，加正己烷0.8mL，涡旋30s，5000r/min离心10min，弃上层，得提取液，精密量取提取液0.25mL于2mL具盖离心管，加水0.75mL稀释，混匀，12000r/min离心10min，取上层液体0.22μm滤膜滤过，取续滤液，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.2基质匹配标准曲线的制备7.2.1肌肉、皮脂与肝脏基质匹配标准曲线的制备分别取空白鸡肌肉、皮脂与肝脏试料，按照7.1项下方法提取后得组织提取液，加水4倍稀释后得基质匹配液，精密量取4.4项下制备的沙咪珠利和去乙酰基沙咪珠利标准工作液0.01、0.02、0.1、0.2、0.4、1.0μg/ml各50µl，分别加入900µl基质匹配液稀释至相应浓度的沙咪珠利和去乙酰基沙咪珠利基质匹配工作液0.5、1、5、10、20和50ng/ml，混匀，12000r/min离心10min，滤过后进行测定。以标准溶液浓度为横坐标，沙咪珠利或去乙酰基沙咪珠利特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，绘制基质匹配标准曲线。求回归方程和相关系数。7.2.2肾脏基质匹配标准曲线的制备取空白鸡肾脏试料，按照7.1项下方法提取后得组织提取液，加水4倍稀释后得基质匹配液，精密量取4.4项下制备的去乙酰基沙咪珠利标准工作液0.01、0.02、0.1、0.2、0.4、1.0μg/ml各50µl，分别加入950µl基质匹配液稀释至相应浓度的去乙酰基沙咪珠利基质匹配工作液0.5、1、5、10、20和50ng/ml，混匀，离心10min（12000r/min），滤过后进行测定。以标准溶液浓度为横坐标，去乙酰基沙咪珠利特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，绘制基质匹配标准曲线。求回归方程和相关系数。7.3测定7.3.1色谱条件色谱柱：C18（100mm×2.1mm，粒径1.7μm），或相当者。柱温：35℃。进样量：5L。流速：0.3mL/min。流动相：A-乙腈，B-0.1%甲酸溶液。梯度洗脱程序：见表1。表1液相色谱梯度洗脱条件表时间（min）A%B%曲线02377/3237765406068406068.12377612237767.4质谱条件离子源：电喷雾离子源。扫描方式：正离子扫描。检测方式：多反应监测。毛细管电压：3.0kV。离子源温度：150℃。脱溶剂温度：350℃。锥孔气流速：15L/h。雾化气流速：800L/h；定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表2。表2药物的定性、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量的参考值化合物定量离子对m/z定性离子对m/z碰撞能量eV锥孔电压V沙咪珠利353.1108.1353.1147.12456353.1108.12456去乙酰基沙咪珠利311.2108.1311.279.93432311.2108.118327.5测定法7.5.1定性测定通过样品色谱图的保留时间与对照品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度对照品各色谱峰的特征离子相对照定性。样品与对照品保留时间的相对偏差不大于2.5％；样品特征离子相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度＞50%＞20%至50%＞10%至20%≤10%允许的最大偏差±20%±25%±30%±50%将供试试料和标准溶液的定量离子面积之比作单点校正定量。7.5.2定量测定取试料溶液和相应的基质匹配标准工作液，取单点或多点进行校正，按外标法定量。标准工作溶液及试料溶液中的沙咪珠利和去乙酰基沙咪珠利的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，空白试料、试料添加和基质匹配标准溶液中特征离子质量色谱图见附录A。7.6空白试验除不加试料外，均按上述测定步骤进行。8结果计算试料中待测物残留按下式计算：单点法校正：………..………………………（1）或标准曲线校正：由求得a和b，则：按下式计算沙咪珠利或去乙酰基沙咪珠利的残留量：………………………………（2）式中：X——试料中沙咪珠利或去乙酰基沙咪珠利的残留量，单位为微克每千克（µg/kg）；Cs——基质匹配溶液中沙咪珠利或去乙酰基沙咪珠利的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；C——试料溶液中沙咪珠利或去乙酰基沙咪珠利的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；As——基质匹配溶液中沙咪珠利或去乙酰基沙咪珠利的峰面积；A——试料溶液中沙咪珠利或去乙酰基沙咪珠利的峰面积；V——样品加水稀释后体积，单位为毫升（mL）；m——试料的质量，单位为克（g）。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度和精密度9.1灵敏度本方法中沙咪珠利与去乙酰基沙咪珠利在肌肉、皮脂、肝脏中定量限分别为10μg/kg、20μg/kg、40μg/kg。本方法中去乙酰基沙咪珠利肾脏中定量限为40μg/kg。9.2准确度本方法中沙咪珠利与去乙酰基沙咪珠利的添加浓度在肌肉组织中为10μg/kg～200μg/kg时，在肝脏组织中为40μg/kg～400μg/kg时，在皮脂组织中为20μg/kg～400μg/kg时，回收率均在70%～120％范围内。本方法中去乙酰基沙咪珠利肾脏组织中的添加浓度在40μg/kg～800μg/kg时，回收率均在70%～120％范围内。9.3精密度本方法批内相对标准