DB21T 3924-2024 欧美杨组培育苗技术规程

—2024欧美杨组培育苗技术规程Technicalregulationsfortissue-culturedseedingsofPopulus×euramericana2024-01-30发布2024-03-01实施辽宁省市场监督管理局  发布—2024I目录前言..................................................................................II1范围.................................................................................12规范性引用文件.......................................................................13术语和定义...........................................................................14环境及器具灭菌.......................................................................15培养基制备...........................................................................26外植体选择及处理.....................................................................27初代培养.............................................................................28继代培养.............................................................................29生根培养.............................................................................310炼苗................................................................................311室内移栽与管理......................................................................312大田移栽与管理......................................................................313病虫害防治..........................................................................414档案管理............................................................................4附录A（资料性）MS培养基配方...........................................................5附录B（资料性）欧美杨组培育苗病虫害种类及防治措施......................................6—2024II前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机关不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省林业和草原局提出并归口。本文件起草单位：辽宁省杨树研究所。本文件主要起草人：矫丽曼、杨成超、冯连荣、纪纯阳、彭儒胜、李晓宇、李晓鹏、梁立巍、张妍、李文颖。本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门通讯地址：辽宁省林业和草原局（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：[phone]。文件起草单位通讯地址：辽宁省杨树研究所（辽宁省盖州市北海新区），联系电话：[phone]。—20241欧美杨组培育苗技术规程1范围本文件规定了欧美杨组培育苗的环境及器具灭菌、培养基制备、外植体选择及处理、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗、室内移栽与管理、大田移栽与管理和病虫害防治等技术要求。本文件主要适用于欧美杨组培育苗。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321.10农药合理使用准则（十）LY/T1882林木组织培养育苗技术规程LY/T2280林木种苗生产经营档案3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1欧美杨Populus×euramericana（Dode）Guinier指欧洲黑杨与美洲黑杨的杂交品种及品种间优良杂种，又称欧美杨无性系。3.2外植体explant用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。4环境及器具灭菌4.1培养室灭菌用消毒液（75%酒精等）对地面、组培架等室内设施进行消毒。4.2超净工作台灭菌打开工作台通风系统，用75%酒精棉擦拭台面，再用75%酒精喷洒内部空间，关闭玻璃罩，紫外灯照射25min～35min，关闭紫外灯30min后进入工作。4.3接种室灭菌接种室内喷洒75%酒精，紫外灯照射25min～35min，关闭紫外灯30min后进入工作。—202424.4器具灭菌将剪刀、镊子等接种器具清洗干净，用报纸包好，放于耐高温湿热灭菌袋中，121℃高压灭菌30min。使用前在超净工作台内用酒精灯外焰灼烧30s，或用接种器具灭菌器直接灭菌。5培养基制备5.1基本培养基MS培养基，配方见附录A。5.2培养基配制、灭菌及保存按LY/T1882有关规定执行。6外植体选择及处理6.1外植体选择欧美杨萌动前，选择无病虫害、生长健壮1年生嫩枝，切枝水培，待芽展叶后，剪取萌发伸展长度在1cm以上的幼叶和叶柄，用流水冲洗1min左右。6.2外植体处理在无菌条件下，外植体用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%升汞溶液浸泡5min，再用无菌蒸馏水冲洗3次，取出后沥干水分备用。7初代培养7.1初代培养基初代培养基配方为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L～0.1mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.0g/L，pH6.5。7.2接种在超净工作台内，叶片用无菌剪刀剪掉叶子边缘并在叶片中间与叶脉平行处剪开1～3个裂口，用无菌镊子夹取平铺于初代培养基中，每瓶接种3～4个；叶柄用无菌剪刀剪掉两端，接种方法同叶片。7.3培养条件在温度25℃±1℃、光照强度2000Lux、光照12h/d～16h/d的培养室内进行培养。8继代培养8.1继代培养基—20243继代培养基配方为：MS+6-BA0.3mg/L～0.5mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖25.0g/L+琼脂6.0g/L，pH6.5。8.2接种初代培养愈伤组织大于1cm2或不定芽大于5个时进行继代培养。将愈伤组织（含不定芽）剪成2～3块转接于继代培养基中。8.3培养条件培养条件同7.3。9生根培养9.1生根培养基生根培养基配方为：1/2MS+IBA0.3mg/L～0.4mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.0g/L，pH6.0。9.2接种继代培养不定芽长度≥2.0cm时进行生根培养。选取健壮不定芽，用无菌剪刀剪去下端的叶片，并在培养基上方剪下主茎，用无菌镊子夹出插入生根培养基中，插入深度1cm，每瓶接种3个。9.3培养条件培养条件同7.3。10炼苗选取苗高≥4cm、根长1cm～2cm、不定根5个以上的生根培养瓶，将瓶盖打开，室内放置2d～3d。11室内移栽与管理11.1室内移栽选择根系发达、苗高≥4cm的组培苗，用镊子轻轻从炼苗培养基中拔出，用清水洗去附着在根部的培养基，剪去较长的根系，室内移栽到塑料营养杯中，营养杯规格上口径8cm、底径6cm、杯深12cm。使根系在营养杯中均匀分布，并与基质紧密接触，基质装到营养杯口下1cm处。基质为腐殖土、大田土、河沙按2﹕1﹕1比例混合均匀，经121℃高压灭菌30min。11.2管理移栽完立即浇透水，并搭建塑料拱棚保持拱棚内温度25℃～30℃、空气湿度80%～95%、土壤湿度50%～60%。5d～7d后去掉拱棚，适时浇水。待苗高≥10cm时，转移至室外培养，定期浇水。12大田移栽与管理—20244当苗高≥15cm时，选择阴天或傍晚进行移栽，移栽前7d大田灌足底水，去掉营养杯，带基质栽植于大田，株行距20cm×50cm，栽完立即浇水。移栽后根据土壤墒情适时浇水，保持土壤湿度不低于40%。每隔15d除草一次，定期松土，保持土壤通透性。13病虫害防治欧美杨组培育苗病虫害种类和防治措施见附录B，农药使用符合GB/T8321.10有关规定。14档案管理按LY/T2280有关规定执行。—20245附录A（资料性）MS培养基配方MS培养基配方参照表A.1执行。表A.1MS培养基配方类型成分母液浓度（g/L）培养基母液用量（mL）培养基剂量（mg/L）名称分子式大量元素（20倍）硝酸铵NH4NO333.00050.0001650.000硝酸钾KNO338.0001900.000磷酸二氢钾KH2PO43.400170.000硫酸镁MgSO4·7H2O7.400370.000氯化钙CaCl2·2H2O8.800440.000微量元素（200倍）硫酸锰MnSO4·H2O3.3805.00016.900硫酸锌ZnSO4·7H2O1.7208.600硼酸H3BO31.2406.200碘化钾KI0.1660.830钼酸钠NaMoO4·2H2O0.0500.250氯化钴CoCl2·6H2O0.0050.025硫酸铜CuSO4·5H2O0.0050.025铁盐（200倍）硫酸亚铁FeSO4·7H2O5.5605.00027.800乙二胺四乙酸钠Na2-EDTA·2H2O7.46037.300有机物（200倍）肌醇20.0005.000100.000盐酸硫胺素0.0200.100盐酸吡哆素0.1000.500烟酸0.1000.500甘氨酸0.4002.000—20246附录B（资料性）欧美杨组培育苗病虫害种类及防治措施欧美杨组培育苗病虫害种类及防治措施参照表B.1执行。表B.1欧美杨组培育苗病虫害种类及防治措施病虫害种类防治措施基腐病1．组培苗移栽基质使用前先灭菌，并用0.1%高锰酸钾水溶液进行消毒。2．发病时要适当减少湿度，加强通风，并用3%甲霜·噁霉灵800倍液进行灌根。立枯病用70%甲基硫菌灵1000倍液～1200倍液或50%多菌灵500倍液～800倍液喷施2次～3次，每次间隔7d～9d。蚜虫用20%灭蚜松可湿性粉剂1000倍液～1500倍液、10%吡虫啉4000倍液～6000倍液交替喷洒，每7d～10d喷1次，连喷2次～3次。黑绒金龟子1．成虫盛发期，直接向被害苗木部位喷洒拟除虫菊酯类杀虫剂1