双黄连注射剂的工艺与质量标准研究

双黄连注射剂的工艺与质量标准研究张清波黑龙江省药品检验所二九年八月十二日主要内容一、双黄连注射剂系列的品种概况二、双黄连注射剂系列的研究概况三、双黄连注射剂系列的指纹图谱研究四、双黄连注射剂系列的质量研究五、存在的主要问题FLOSLONICERAERADIXSCUTELLARIAEFRUCTUSFORSYTHIAE黄芩金银花连翘一、双黄连注射剂系列的品种概况功能与主治:清热解毒，清宣风热。用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。适用于病毒及细菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、咽炎等。收载标准：成方制剂十一册、中国药典2005年版一部一、双黄连注射剂系列的品种概况1、生产企业：黑龙江省生产双黄连注射剂企业共有11家（股份制企业5家、民营企业5家、私营企业1家），从业员工1.1万人。这些企业分别建厂于1950年至2001年。有20余年生产双黄连注射剂的历史，企业固定资产净值25亿元，年生产能力11.83亿支。2、剂型及规格：现有注射液、粉针剂、冻干粉针剂、滴注剂四个剂型；有20ml、300ml、500ml、0.6g、1.2g。3、生产量：现11家从2000年到2008年底共生产双黄连注射剂2万余批次、27亿支；2004年至2008年生产1.49万批次、20.53亿支。近三年来实现产值13.4亿元、利税2.1亿元，单品种产值占全行业总产值的12.96%。4、销售范围：目前这些企业的品种销往全国各地，分布最广的企业除台湾、香港、西藏外，各省市、自治区、直辖市均有销售和使用。二、双黄连注射剂系列的研究概况第一阶段:（2002年～2004年）1、对8家生产企业的近100批产品进行了初步质量分析；2、进行企业工艺调研与实验室模拟工艺的研究；3、与生产企业沟通，明确生产工艺应严格按照部颁标准执行4、药材样本的采集：共实地采集了不同产地的70多批药材；5、考察不同采收季节、不同来源，不同产地的药材对指纹图谱的影响；6、采用色谱指纹图谱技术，对双黄连注射剂指纹图谱的整个获取过程进行了方法学验证并测定了统一工艺路线后的样品7、考察了药材、中间体与成品指纹图谱的相关性；8、增加了成品中绿原酸、连翘苷的含量测定标准。二、双黄连注射剂系列的研究概况第二阶段（2006年～2008年）：1、根据样品的实测情况对双黄连注射液、注射用双黄连的指纹图谱的评价标准进行了改进；2、增加了异常毒性、降压物质、过敏试验安全性检测标准。3、注射用双黄连指纹图谱已收载于中国药典2005年版一部增补本。药厂实地调研，考察药材样品的采集成品样品的收集实验室模拟工艺小样统一生产工艺（中期会的召开）方法学验证双黄连注射剂系列指纹图谱的建立中间体指纹谱的研究相关性考察前期准备工作文献检索研究计划的制定会议召开三、双黄连注射剂的指纹图谱研究市场上近100批成品的摸底药材指纹图谱的研究双黄连注射剂系列质量标准的提高指纹图谱条件的确立技术报告的形成征求反馈意见生产工艺的追踪工艺参数变动的影响统一工艺前八个不同厂家的双黄连注射液指纹图谱的比较从这八个厂家的样品色谱图可以看出，无论从色谱峰的个数上，还是各峰面积的大小和相对比例，不同厂家的产品质量不尽相同，尤其是保留时间在1020分钟的色谱峰个数、510分钟的色谱峰面积，厂家之间差异很大。金银花与连翘分别煎煮提取与混合煎煮提取对指纹图谱的影响金银花、连翘混提与单提，特征色谱峰之间差异较大，表现在5、6、7号色谱峰在单提液中缺失或减弱。除1、3号色谱峰相对稳定外，大多特征峰的相对峰面积比值发生变化，混提比单提有增高的趋势，表明混提增加了某些成分的溶出量。实验室模拟小样金银花与连翘分别煎煮提取金银花与连翘混合煎煮提取金银花、连翘提取不同的煎煮时间对指纹图谱的影响峰号保留时间相对峰面积RSD（%）煎煮2小时/次煎煮1小时/次15.9790.2110.2804.85929.2621.0001.0000.000310.2790.2760.3535.484411.2870.0340.0380.275515.0960.0500.0480.127615.5250.0400.0420.152715.8960.0830.0770.446820.1500.2560.1994.019921.2160.4430.4963.7331022.1710.0600.0580.1481126.0660.5040.5513.317对金银花、连翘提取的煎煮时间分别进行每次煎煮1小时和每次煎煮2小时的考察，结果特征峰的峰数与峰位没有变化，相对峰面积的比值变化不大。金银花、连翘提取各步骤对指纹图谱的影响峰号保留时间醇沉纯化稀配RSD(%)15.9830.2800.1500.05511.29529.2361.0001.0001.0000.000310.2670.3530.1960.11412.184411.3300.0380.0210.0200.989515.1140.0480.0370.0350.689615.5440.0420.0320.0310.624715.9250.0770.0410.0352.286820.1640.1990.1030.1364.846921.1830.4960.3240.3349.6491022.1970.0580.0420.0361.1401126.0610.5510.3320.28214.292重点考察醇沉、纯化、稀配这三步留样。HPLC分析结果显示，特征色谱峰的峰数与峰位无大的区别，即成分未有变化，但来自金银花药材的2号特征峰（绿原酸）及1、3、9、11号特征峰的峰面积随着一步步生产而降低，其它特征峰相比受影响较小。醇沉纯化稀配金银花、连翘提取不同醇沉温度对指纹图谱的影响峰号保留时间相对峰面积RSD（%）20OC醇沉40OC醇沉60OC醇沉15.9860.1360.0820.0813.13229.2001.0001.0001.0000.000310.2670.1640.1670.1630.190411.2800.0250.0260.0260.019515.0830.0490.0660.0471.056615.5170.0420.0440.0420.070715.8920.0610.0630.0600.126820.1300.2560.2650.2530.607921.1640.4500.4680.4461.1381022.1660.0550.0560.0540.0811126.0550.3970.4070.3930.74240CO20CO60CO对金银花、连翘提取进行20C、40C、60C不同醇沉温度的考察，结果特征峰的峰数与峰位没有变化，相对峰面积的比值变化较小（RSD小于3%）金银花、连翘提取中冷藏放置与冷冻放置对指纹图谱的影响峰号保留时间相对峰面积RSD（%）冷藏冷冻15.9830.2720.2800.57629.2711.0001.0000.000310.2750.3340.3531.352411.2960.1590.0388.575515.1000.0470.0480.080615.5290.0430.0420.053715.9040.0810.0770.274820.1540.2170.1991.293921.2080.4880.4960.5721022.1710.0720.0580.9831126.0660.5630.5510.848对金银花、连翘药材水煎、浓缩后进行冷藏放置与冷冻放置对比考察，结果除4号特征峰差别较大外（冷藏的峰面积增值较大），其它均相差无几。以上研究结果表明：1、金银花、连翘药材的合煎与分煎对某些成分的溶出有较大的影响；2、生产工艺各步骤的一致性也是获得稳定的双黄连注射液指纹图谱的关键因素；3、在一定范围内，不同的煎煮时间、不同的醇沉温度对双黄连注射液指纹图谱的影响不大。三、双黄连注射剂的指纹图谱研究双黄连注射剂药材指纹图谱的研究连翘药材【中国药典】连翘为木犀科（Oleaceae）连翘属植物连翘Forsythiasuspensa（Thunb.）Vahl.的干燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘”。22批连翘药材的质量情况来源水分（%）连翘苷含量（%）三精6.90.134晨星6.00.295乌苏里江7.30.252福和华星6.10.183齐齐哈尔7.00.088哈中药二厂6.40.115浙江药检所提供（山东产）6.10.126河南淅川5.30.152三精河北安国（2003年10月上旬）6.40.200三精山西降县（2003年10~11月）7.10.068山西（青翘）12.10.612山西6.90.111山西陵川（老翘）6.60.098栾川县（伏牛山北）（2003年11月）7.10.083栾川县（伏牛山北）（青翘2003年9~10月）6.60.079辉县南塞镇（太行山02年老翘）7.70.047辉县南塞镇（青翘水煮后晒干）5.30.206辉县南塞镇（太行山03年老翘）7.60.312陕西商洛市山阳县玉竹乡7.20.091陕西临汾（青翘）6.50.122商洛市商州县（2003年）7.00.043编号保留时间山西陕西栾川辉南陵川812.74144.809254.42321.266115.767136.2261013.663160.6315.233395.051110.449214.5821214.5621385.105170.253135.429248.32470.0872021.346888.85232.18599.311824.281273.4932424.43514758.922557.8072055.913498.953993.9252625.76385.36559.82653.66944.99553.7362726.814616.897199.472263.935241.897317.0283637.035379.5276.96655.552230.448261.9013737.924962.039158.784100.574394.731207.0874440.924125.83273.951172.306104.606236.1944842.587264.63489.187159.407268.868474.2765244.23123.37159.18163.377218.658196.2245646.695414.1669.53982.698134.358177.1015949.95262.156150.72761.458145.694568.693不同产地青翘指纹图谱编号保留时间山西栾川辉南02辉南03陵川112.746244.096105.838148.517402.338292.936213.673333.769131.911174.775478.842359.515314.56969.824110.50642.545173.50191.267421.359173.135449.678398.463953.514421.195524.4821218.2141574.895741.3191671.2941519.973626.848161.595136.62656.855181.487168.898727.351102.1432.99759.298164.022150.951837.037216.25876.14348.68193.45103.987937.927228.20291.31248.804317.689201.4771040.903118.25768.01588.394197.192131.6021142.573274.572237.432164.058221.832458.2151249.951223.584106.84145.13684.168114.063不同产地老翘指纹图谱有3对相同产地的青老翘，分别是山西、栾川、陵川，把它们的图谱进行比较发现