植物病理实验室基本仪器设备及其使用

植物病理实验室基本仪器设备及其使用植物病理实验室常需要进行病原菌的分离、纯化、接种和显微观察等，所需的基本仪器设备，除了本书各有关章节已专门介绍的以外，尚有一些常用的仪器设备。一、玻璃器皿使用及洗涤(一)常用玻璃器皿的种类及用途1．培养皿倒人适量的固体培养基制成平板，可用于病原菌的分离培养、纯化、鉴定、菌落形态观察等。是病理实验室中需用量最多的玻璃器皿之一。一般所用的规格为直径9cm，高1．5cm。质量，要求皿底要平，明亮无杂色，能耐高温、高压。2．试管用于分离培养保存菌种，也是病理实验室中需用量最多的器皿之一。一般所用规格以1．6cmxl3．6em为宜。试管口以无翻卷的或光滑的为好。3．三角瓶主要用于盛装培养基和灭菌水，需用量也较多。所用规格主要为250ml，其次为200ml及50ml。4．玻璃棒和玻璃管玻璃棒用于配置溶液时的混匀搅拌。一般使用直径0.5cm左右的玻棒较多，根据需要可配备长短不等的玻棒多个。玻璃棒和玻璃管还可烧制各种玻璃小用具。5．滴瓶主要用于盛装各种试剂及染液。其规格以60ml容量为宜。有无色透明的和棕色的。棕色滴瓶用于盛放应避光的试剂。6．吸管用于吸取各种溶液或菌液。其规格有0．5ml、1ml、2ml、5ml、lOml等，应各具备一定数量。有单刻度的移液管和多刻度吸管。使用时，对于lml以下的吸管都必须将尖端遗留的液体吹人配制溶液的容器中。lml以上(包括lml)的不应吹出尖端遗留的液体，当液体不再流出时，应使该管尖端紧靠容器内壁一段时间。7．烧杯用于各种溶液的配置。100--600ml不同规格的应各具备一定数量。另外，也应有少量的作为分离材料表面消毒用的lOml烧杯。8．载玻片用于病原菌的显微检查、临时性或永久性制片。有两种，一种为普通载玻片，是平的；另一种为凹载玻片，其上有一个或两个凹窝。普通载玻片以薄而无色的较好，厚而发绿的质量较差。普通载玻片大小为7．5cm×2．5cm×0．1cm。9．盖玻片用于显微检查，或用于临时性或永久性制片。薄而透明为好，其上有白色云斑的多为劣质品，对显微观察妨碍极大。规格通常为18mm×18mm，过大时易使浮载剂流失在显微镜载物台上。10．双层瓶由外层较大的瓶和内层较小的瓶组成。外层盛放二甲苯，内层盛放香柏油。11．树胶瓶用于盛放封片用树胶，一般为茶色。12．玻环为高1cm，内径lcm的磨口玻璃环，作真菌孢子萌发用。13．蒸馏水瓶用于盛放实验用蒸馏水。有5000ml、10ml等不同规格。在顶盖上有一小的进气孔，接近瓶底处有一出水口，可与橡胶管相连。14．干燥器可用于盛放需要干燥的样品或仪器部件(如显微镜镜头等)。干燥器的下部盛放干燥剂。常用干燥剂有硅胶和无水氯化钙等。15．量筒10ml、100ml、500ml、1000ml等各种规格的都应具备一定数量。量筒为粗量器，不需矫正，可粗略度量液体体积。使用时应根据所量溶液的多少来选择合适的规格，不可使用过大的量筒量取较小的体积。如用100ml或500ml量筒量取5ml或10ml溶液，显然误差太大。读数时，视线必须和溶液凹面成一水平，不可过高或过低。16．微量吸管(micropipette)微量吸管又称微量加样器。主要用来吸取微量液体，规格型号很多。每个微量吸管在一定范围内可调节体积，并都标有使用范围。例如，0．5～10μl、2～10μl、10～100μl、100～1000μl、5000μl等。使用方法：将合适大小的塑料嘴(tip)牢固地套在微量吸管的下端，旋动调节键，使数字显示器上显示出所需要吸取的体积，用大姆指按下调节键，并将吸嘴插入液体中；缓慢放松调节键，使液体进入吸嘴，并将其移至接收试管中；按下调节键，使液体进入接收管；按下排除键，以去掉用过的空吸嘴或直接用手取下吸嘴。微量加样器分为可灭菌式和不可灭菌式。进行无菌操作时，如果使用的是不可灭菌式微量加样器，则要尽量使用带有过滤棉纱的吸嘴。17．小塑料离心管又称Eppendorf管。有1．5ml和0．5ml两种型号。主要用于小量菌体的离心、核酸提取、PCR反应等。18．容量瓶有50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml等规格。用于配置一定体积的溶液。在瓶颈上有一刻度，加入溶液到此刻度时，就相当于瓶上所标明温度(通常为20C)时的体积。使用量瓶时，不要将溶质直接倒人量瓶然后加水至刻度，而应使溶质首先在小烧杯中加水溶解，再将溶液沿玻棒到人量瓶。在量瓶内，可事先加水至体积223或1／2。盖上磨口瓶塞子后，用食指或掌心顶住瓶塞，倒置量瓶，不时摇动和翻转量瓶，以使溶液充分混匀，然后加水至刻度。19．滴定管有带玻璃塞的酸性溶液滴定管和带橡皮管的碱性滴定管两种。不能用酸性滴定管装盛碱性溶液，以免把玻璃塞腐蚀。常量滴定管有25ml及50ml两种。这两种滴定管的最小刻度单位是0．1ml，滴定后读数时可以估计到小数点后两位数字，即液体的体积可量至0．01ml。此外，还有半微量滴定管，最小可读单位是0．01--0．02ml，读数可到小数点后第三位数字。此外，还应有广口瓶、细口瓶、漏斗、标本瓶、研钵、表面皿、滴管、染色缸；酒精灯、称量瓶等玻璃器皿及用具。(二)常用玻璃器皿的洗涤实验室的各种玻璃器皿，必须经过洗涤以后才能使用。清洁的方法和所用的洗涤剂因目的而不同。但需要注意：玻璃器皿用过后，最好在未干燥之前洗涤，尤其是滴管、吸管等，如不能立即洗，也应浸入水中；为了防止发生意外，器皿沾染了对人有传染性的或者是属于植物检疫范围内的微生物，应先用水煮沸或高压蒸汽灭菌，或在消毒液中浸过以后再洗，消毒可用5％福尔马林或漂白粉液(漂白粉10g，水140ml)。1．洗涤剂洗涤剂的种类很多，各种洗涤剂的性能和用途各不相同。水是用量最大的天然洗涤剂。但只能洗去可溶于水的污物，不能溶于水的污物，需先用其他方法处理后再用水清洗。要求比较洁净的器皿，清水洗过后，还需再用蒸馏水洗。常用的化学洗涤剂有以下几种。(1)铬酸洗涤液。这是常用的洗涤液，其成分和配法如下：浓铬酸洗涤液稀铬酸洗涤液重铬酸钾60g60g浓硫酸60ml60ml水300ml1000ml重铬酸钾溶解在温水中，待冷却后缓缓加入浓硫酸，边加边搅拌。配好的溶液呈深红色，并且可见均匀的红色小结晶。此外，也可用重铬酸钠代替重铬酸钾，按重铬酸钠60g浓硫酸100ml水100ml配制。配制铬酸洗涤液的浓硫酸，相对密度在1．84左右，可以利用废硫酸配制。铬酸洗涤液是强氧化剂，去污能力很强，但在玻璃器皿上如沾有油脂、凡士林和石蜡等时，用该洗涤液无效。同时沾有钡盐的玻璃器皿也不宜用铬酸洗涤液。因为铬酸洗涤液可与钡盐起作用形成硫酸钡，附着在玻璃器皿上，很难洗去。玻璃器如带有较多的还原性物质，要先用水洗过后再用铬酸洗涤液洗，否则洗涤液的去污能力会很快降低。经过初步洗涤的玻璃器皿在铬酸洗涤液中浸泡至少15min，再用清水冲洗。将洗涤液加热至45-50℃可以增加去污能力。稀的铬酸洗涤液可以煮沸用。此洗涤液可反复使用，直至呈青褐色为止，此时铬酸已被还原而无去污作用。铬酸洗涤液的腐蚀性很强，溅到桌、椅上应立即用水洗去，并用湿布擦净。沾到皮肤和衣物上应立即用水洗，再用苏打水(碳酸钠)或氨水冲洗。(2)高锰酸钾溶液。高锰酸钾溶液是很好的洗涤液，特别是在加酸和加热的情况下，它的氧化和去污能力更强。一般使用的是5％的高锰酸钾溶液。使用的方法是将高锰酸钾溶液加在需要洗涤的器皿中，加入少许浓硫酸(100ml溶液加浓硫酸3-5ml)，可加热至50～60℃。但需注意不能用盐酸代替硫酸，因为盐酸在高锰酸钾溶液中会分解产生有毒的氯气。玻璃器皿经高锰酸钾溶液洗涤后，必须用水冲洗干净，有时器皿上会残留一层褐色物质，可用硫酸酸化的5％草酸溶液洗去。(3)酸和碱。器皿上沾有煤膏、焦油和树脂等物质，可用浓硫酸或40％氢氧化钠溶液使它们溶解，处理时间5—10min。浓盐酸(工业用)可洗去水垢和某些无机盐沉淀。(4)有机溶剂。脂类、树脂和其他可溶于有机溶剂的物质，可用乙醚、丙酮、酒精、石油醚、苯、二甲苯、松节油及四氯化碳等有机溶剂洗去。二甲苯可洗脱油漆的污垢。但这些溶剂较贵，在必要时才使用。(5)5％～10％乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液。加热煮沸可洗脱玻璃仪器内壁的白色沉淀物。(6)肥皂和其他洗涤剂。肥皂是很好的去污剂，热肥皂的去污能力更强，可以洗去器皿上的油脂。10％磷酸三钠(Na3PO4)溶液去污去油脂的能力很强，比用肥皂洗得更洁净。总之，洗涤剂的种类很多，可以根据要求，选择经济而有效的洗涤液。一般实验室用得最多的是肥皂(包括合成洗涤剂)和铬酸洗涤液，这两种洗涤剂可以解决大部分器皿的洗涤问题。2．玻璃器皿的洗涤(1)新玻璃器皿的洗涤。新购置的玻璃器皿，无论是软玻璃还是硬玻璃，都会产生一些可溶性物质。这些物质会影响实验结果，使用前必须洗涤干净。最好的方法是先用2％的盐酸溶液处理数小时，再用清水洗净。必要时，再按一般的方法用肥皂和铬酸洗涤液洗，清水冲净。(2)一般器皿。试管、烧杯、烧瓶和培养皿等器皿，洗涤前应先用铁丝或铁片将其中的残渣清除，然后用水洗净，或者用肥皂水洗涤，再用清水冲洗。根据实验要求，必要时，用蒸馏水冲洗一次。需要更洁净的器皿，在上述洗涤的基础上，再用铬酸洗涤液处理10min，然后用清水将洗涤液彻底冲净。器皿中如有有害微生物，应先高压蒸汽灭菌处理后，将培养物倒去，再进行洗涤。(3)载玻片和盖玻片。载玻片和盖玻片可以按以上步骤，水洗后放在铬酸洗涤液中浸泡几小时，或者在稀的铬酸洗涤液(也可用浓的铬酸洗涤液稀释3--4倍)中煮沸半小时，然后取出用清水冲净，再用脱脂的干净纱布擦干。载玻片和盖玻片上如有油脂或加拿大树胶，可先用肥皂水或合成洗涤剂煮过再洗。经过染色和加拿大树胶封盖的载玻片，放在浓的硅酸钠中煮效果更好。细菌的鞭毛染色，要求用非常洁净的载玻片。应将载玻片在铬酸洗涤液中煮沸10min，取出用10％的氢氧化钠溶液冲净，然后再在铬酸洗涤液中煮沸，最后用水冲净。洗净的载玻片，可储放在酸化的95％酒精(滴人数滴浓盐酸)中，用时取出擦干或在酒精灯上将酒精烧去。而一般染色用的载玻片，在不太脏时，可用毛刷沾上去污粉，在载玻片上湿擦，然后用水冲净，以干净纱布擦干。(4)滴定管和吸管。滴定管和吸管可用铬酸洗涤液洗，但连在滴定管上的橡皮管不要沾上洗涤液，橡皮一旦吸收洗涤液就很难洗去。滴定管用洗涤液洗过后还不够清洁，可试用如下方法：先用少量95％酒精洗涤，然后在管中盛2ml的95％酒精，再加入5mi的浓硝酸。在滴定管上端，罩一试管，以免药物飞溅。当化学作用终止时，滴定管已洗涤干净。(5)特殊清洁法。精密的实验所用玻璃器皿只将表面附着物洗去是不够的，玻璃中的可溶性物质也影响实验结果。这些玻璃器皿，可先在0．1mol/L氢氧化钾或氢氧化钠溶液中煮1h，再在0．1mol／L的硫酸或盐酸溶液中煮1h，然后用蒸馏水洗几次，再在蒸馏水中浸泡几小时后取出于燥。二、金属小用具小镊子、小剪刀、解剖刀。这些用具是分离培养时剪取或解剖材料所必需的。拨针、三角针。在镜检时用于挑取病菌。接种针、接种环。接种针是在培养基上作真菌接种用；培养环是在培养基上作细菌接种用的。接种针是用铂金丝或普通钢针将端部弯成90’的钩状作成；接种环是用有弹性的铂金丝将端部弯成环形作成的。两者都装在铝度的长柄上，柄端连接一段胶柄，以减弱其导热性，防止烫手。双面刀片。主要用于徒手切片。保温漏斗。一般为铜质双层的，漏斗形，中间夹层可以盛装热水保温，在其上插入普通漏斗，漏斗下端接上橡皮管及夹子，即可作为向试管分装培养基用。消毒盒。有不锈钢质的和铝质的，用于盛装注射针筒、针头和其他需消毒的小用具。酒精喷灯。用于烧制各种玻璃小用具。手持喷雾器。用于小空间范围消毒喷雾及盆栽试验的喷药。孢子喷雾器。用于接种时喷洒孢子或细菌悬浮液。三、几种常用仪器(一)天平天平可分为两大类：一类是药物天平，或叫架盘天平，结构比较粗糙，用于不需要太精确的一般性称重；另一类是分析天平，结构精细，用于精确的称重。1．架盘天平根据其最大称量可分为100g(感量0．18)、200g(感