实验六根系活力

实验六根系活力的测定（TTC法）福建农林大学生命科学院植物生理生化实验室根系活力的测定（TTC法）一、测定意义二、实验目的三、测定原理四、仪器设备五、试剂配制六、测定材料七、操作步骤八、结果计算九、思考题十、注意事项一、测定意义根的生长情况和活力水平直接影响植物个体的生长情况、营养状况和产量水平。合成氨基酸和植物激素（ABA、CTK、GA等）H2O无机盐理解植物根系活力的内涵掌握根系活力测定的原理与方法比较玉米完全液和缺素苗根系活力的差异二、实验目的a-萘胺氧化法甲烯蓝法TTC法三、测定原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙（TTF）。生成的TTF比较稳定，不被空气中的氧自动氧化。TTCTTF（无色，溶于水）（红色，不溶于水）根系活力脱氢酶琥珀酸延胡索酸苹果酸丙二酸碘乙酸促进抑制四、仪器设备五、试剂配制1.乙酸乙酯（分析纯）。2.次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。3.0.4％TTC溶液：准确称取TTC4.0g，溶于少量水中。定容到1000ml。4.磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。5.1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。六、测定材料玉米根尖(完全苗、缺素苗)七、操作步骤1.TTC标准曲线的制作:略取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的三苯甲腙。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲腙25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。2.把根洗净，吸干水分，剪取根尖1cm。完全苗根尖0.2克两份，缺素苗根尖0.2克两份。移入青霉素瓶中样品根系鲜重（g）1mol/L硫酸0.4%TTCpH7PBS混合液37℃（黑暗）保温1mol/L硫酸完全苗CK0.21ml5ml1h完全苗处理0.25ml1h1ml缺素苗CK0.21ml5ml1h缺素苗处理0.25ml1h1ml根尖处理用镊子取出根，吸干水分，与2～3ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎，红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml。以空白试验作参比测485nm下吸光度消光值查标准曲线，求四氮唑还原量（OD/0.952)八、结果计算四氮唑还原强度（ug∙g－1根鲜重∙h－1）四氮唑还原量（ug）根重（g）×时间（h)＝九、注意事项1、要剪取根尖作为测定材料；2、测定的同时要做空白对照；3、TTC容易氧化，要现用现配，避光保存；4、反应结束后，根系要吸干水分才能研磨，否则溶液容易混浊；5、要用少量多次的乙酸乙酯把残渣中的红色三苯甲腙提取干净。十、思考题1、为什么要测定根系活力？植物的根与地上部分有何关系？2、测定根系活力时最好选择根的哪个部位？为什么？3、比较完全液培养的玉米苗与缺素玉米苗根系活力的差异，并解释原因。