T迷宫实验方法

安徽正华生物仪器设备有限公司T迷宫T迷宫是广泛用于研究空间学习，交替行为，条件识别学习和工作记忆的器具。根据它的模块化设计，我们的T迷宫系统能够以不同的配置运行。T-形迷宫使用的是食物常用这一模型来研究动物的空间工作记忆（spatialworkingmemory），即测定动物只在当前操作期间有用的信息。经改进后的T-形迷宫也可用来评价参考记忆（referencememory），即记录在这一实验中任何一天、任何一次的测试都有用的信息。T迷宫限制动物饮食,直至体重降低到最初体重的85%;适应迷宫阶段:目的是让小鼠熟悉迷宫并学会跑到左或右臂尽头来获得食物,每只小鼠要在迷宫中呆20-30分钟.测验阶段:每只小鼠要进行10回测验,每回包括两次,强制次和选择次。强制次方向左右各5次，但随机安排。具体过程是：首先进行强制次，按照事先随机安排好的方向，如果是右，则将隔板放在左侧，阻止小鼠进入左臂。当小鼠进入指定的目标臂后，在目标臂尽头放1小粒食物，待小鼠吃完食物后，将其放回笼内。30秒后开始选择次实验。移开隔板，小鼠被放在出发臂，观察小鼠所选择的目标臂。如果小鼠的选择方向与强制次的方向相同，则是”得到-停留“策略；反之，则是“得到-转移”策略。记录每只动物的测试结果，两种策略的选择次数，然后综合所有动物的结果进行统计分析。近半个世纪前，Kivy和Dember等人证明大鼠能辨别T-形迷宫（T-maze）两臂颜色的变化。他们发现，将雄性大鼠置于T-形迷宫的主干臂15~30min，让其能看见、但不能进入黑白两臂。然后，改变其中一个臂的颜色，使两臂同为黑色或白色。让大鼠自由选择T-形臂。结果显示，大鼠总是选择改变了颜色的那个臂（新异臂）。这一过程要依靠动物的记忆来完成。由此发展而成的T-形迷宫实验成为目前用于评价空间记忆的最常用的动物模型之一。当然，现在的T-形迷宫使用的是食物而不是臂的颜色作为动物探究的动力。通常用这一模型来研究动物的空间工作记忆（spatialworkingmemory），即测定动物只在当前操作期间有用的信息。经改进后的T-形迷宫也可用来评价参考记忆（referencememory），即记录在这一实验中任何一天、任何一次的测试都有用的信息。（一）实验设备这里介绍上海欣软信息科技游戏公司生产的T迷宫。迷宫由两个长46cm、宽10cm、高10cm的目标臂（goalarms）和一个与之垂直的长71cm、同样宽度和高度的主干臂（stem）或起始臂（approachalley）组成。主干臂内置一个16cm*16cm的起始箱，并有一闸门与主干臂的另一部分相联。实验用雄性成年大鼠。饮安徽正华生物仪器设备有限公司水不限，但进食控制在每天16~20g，以使体重保持在非进食大鼠体重的85%。在整个训练和测试期间，大鼠体重每周增加不超过5g。（二）实验方法这里介绍传统T-形迷宫实验和T-形迷宫自主交替实验。1.传统T-形迷宫实验（1）适应在T-形迷宫臂内分撒6粒食丸（45g），让大鼠适应迷宫5min，每天一次，连续5天。（2）强迫选择训练将大鼠放入主干臂的起始箱，打开闸门，让大鼠进入迷宫的主干臂。随机、交替选择左右两臂之一放入4粒食丸，同时关闭另一臂，使动物被迫选择食物强化臂并完成摄食；每天6次，连续4天。（3）延迟位置匹配（delayedmatching-to-position,DMP）训练1）将动物放入闸门关闭的起始箱，打开闸门，让动物进入主干臂。2）关闭一侧目标臂，强迫动物进入另一侧开放臂以获得2粒食丸奖赏。3）立即（最短延迟，少于5s）将动物放回主干臂，开始匹配训练中的第二次训练；此时两个目标臂均开放。动物将两前肢和至少两后肢的一部分置于一个目标臂时完成“一次选择”。动物返回到强迫选择训练时进入过的臂则获得食物奖赏（4粒食丸），记录一次正确选择；若动物进入另一臂，则没有食物奖赏，并且将其限制在该臂内10秒，记录一次错误选择。4）一次匹配训练结束后将动物放回笼内5~10min（与此同时训练其他动物），再重复下一次匹配训练。每天8次。动物连续两天的正确选择次数达到15/16，则认为达到标准，可以开始实验。如动物经过30天训练仍然达不到标准，则予以淘汰。5）动物训练达标后一天，给予一次匹配训练。所不同的是，强迫选择训练后，将T-形迷宫旋转180度，再进行上述开放臂的训练。这样做的目的是评价动物是否为定位性操作（有赖于迷宫外信号）或反应性操作（不依赖迷宫外信号）。6）接着两天，每天给予10次匹配训练，每次训练间隔为60s，用以评价动物的工作记忆操作。记录进入食物强化臂的次数和再次进入非强化臂的次数。后者被认为是工作记忆错误。正常健康年轻的大鼠几乎每次均能准确操作。当操作稳定、且选择准确率高（工作记忆错误少于10%）时，可进行药物测试或脑区毁损后的操作实验。2．T-形迷宫自主交替实验（spontaneousaltemationonaT-maze）1925年，Tolman首次报道了一个有趣的发现：在迷宫实验中，大鼠极少重复进入迷宫的同一臂。大鼠以这种重复交替的方式探究周围环境。因而，即使没有食物奖赏，大鼠仍然保留对所探究区域有一定的新奇感。正常的交替操作与完整的工作记忆能力相一致。用药理或解剖毁损的方法可改变这种交替操作行为。实验方法如下：（1）充分抚摸大鼠每天1~2min，连续5~7d。由于大鼠没有被剥夺进食，唯一对大鼠有驱动作用的是其探究迷宫的欲望。因此，动物必须对实验者和实验环境完全适应，没有恐惧感。充分触摸大鼠就显得尤为重要。安徽正华生物仪器设备有限公司（2）将大鼠放入T-形迷宫的主干臂；打开闸门，让大鼠离开主干进入一个目标臂（四肢进入臂内）。（3）将大鼠放回主干臂，限其在臂内一段时间（零倒数分钟，但开始时设定5s比较合适）。（4）将第2和第3步的操作重复9次，记录进入每一臂的次数。对照大鼠在每一实验间期（共10次训练）内应交替选择两目标臂。实验结果表述为同一实验间期内交替次数除以总的选择次数。当使用药物或相关脑区毁损等方法减弱记忆力时，这个比率下降。（三）注意事项1．大鼠和小鼠具有良好的空间辨别功能，能很快学会并准确操作迷宫。因此，T-形迷宫和放射臂迷宫均被广泛用于测试动物的空间记忆能力。T-形迷宫用于研究不同脑区对空间记忆的影响。它对某些脑结构，尤其是海马的毁损作用敏感。此外，许多药物或毒素都可增强或削弱动物在T-形迷宫的空间记忆。实验所用的动物除大鼠和小鼠外，还包括猪、羊、乌龟和鸽子等。2．动物选择的准确性与两次选择之间的间隔及每一训练间期内的选择训练次数等有关。正常动物经短时间的间隔（例如5s），其选择准确性非常高。而经过极长时间的间隔（例如超过1h），其选择接近随机性操作。强迫选择训练后。如只给一次目标臂选择，准确性通常很高。但是，如给予多次选择，则选择次数越多，准确性越差。3．啮齿类动物有单向偏爱的特性。这种单向偏爱与动物种属和品系有关。例如，C57BL/6J小鼠、ICR小鼠和Purdue-Wistar大鼠更偏爱左侧，而Spague-Dawley大鼠和Wistar大鼠更偏爱右侧。研究表明，超过2/3的雄性Spague-Dawley大鼠偏爱右侧，而偏爱左侧的不到1/5。这种单向偏爱可影响对动物学习记忆的评价。4．主干臂的闸门是T-形迷宫的重要特征。它既可用于在两次选择之间将动物限制在起始箱内一定的时间，也可防止动物在两次选择训练之间探究迷宫。因此，两次选择训练之间应将动物迅速放回主干臂内的起始箱。这一点很重要，它可确保动物不会去探究对侧目标臂。5．当动物对迷宫或实验者的应激恐惧超过其对探究和觅食的渴望程度时，动物对迷宫的探究减少，甚至呆在迷宫某处不动而不去探究迷宫。这种恐惧表现为动物在迷宫内排便和排尿；当抓它时，动物还会发出尖叫声。因此，足够的应激适应是必要的。否则，如果动物在迷宫内不进行臂的选择，就无从得知它的记忆力是正常还是减弱。T迷宫-学习记忆的行为学研究方法（3）为经典的实验，后续还会进一步介绍更多的迷宫实验。