AB-7500-2.0绝对定量简易操作流程

appliedbiosystems7500荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCR仪仪仪仪绝对定量绝对定量绝对定量绝对定量实验实验实验实验简易简易简易简易操作流程操作流程操作流程操作流程SDS2.0绝对绝对绝对绝对定量定量定量定量实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程27500定量定量定量定量PCR仪仪仪仪绝对绝对绝对绝对定量定量定量定量实验实验实验实验简易简易简易简易操作流程操作流程操作流程操作流程1.双击桌面图标，或从StartAllProgramsAppliedBiosystems7500Software7500V2.0开启软件。进入主界面后选择AdvancedSetup。2.默认进入Setup下的ExperimentProperties界面2.1输入实验名称（ExperimentName）2.2确认仪器型号2.3在实验类型中，选择Quantitation-StandardCurve2.4选择试剂种类2.5确认运行模式3.进入Setup下的PlateSetup界面，编辑基因（Target）及样本（Sample）：3.1在的基因，并在Target记的荧光基团及淬灭基团择NFQ-MGB；如果是荧光淬灭基团（如BHQ绝对绝对绝对绝对定量定量定量定量实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程3界面中设置基因及样品。利用TargetName中编辑基因名称，Reporter和Quencher记的荧光基团及淬灭基团。对于Quencher的选择，如果是MGB如果是TAMRA探针，请选择TAMRA；如果是其他形式的非BHQ），请选择None。实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程添加新Quencher中选择所标MGB探针，请选如果是其他形式的非绝对绝对绝对绝对定量定量定量定量实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程4还可以利用其他按钮将之前已添加的基因进行保存(SaveTarget)或删除(DeleteTarget)。利用添加新的样本，并编辑样品名称。3.2在界面中进行样品板的排布。利用鼠标单选或拖曳以选择反应孔，然后勾选左侧的基因及样本，同时在Task选项中指定该反应孔的类型（S代表标准曲线数据点，U代表未知样本，N代表阴性对照）。3.3设置标准曲线：利用鼠标单选或拖曳以选择反应孔（一般情况下，每个梯度设置三个副孔），而后勾选左侧的基因，在Task选项中选择S，然后在Quantity中输入拷贝数。按照相同操作，完成标准曲线其他数据点的设置（建议设置5个梯度）。4.在Setup下的RunMethod界面中，设定反应条件。绝对绝对绝对绝对定量定量定量定量实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程55.点击，文件储存成ExperimentDocumentSingleFiles（*.eds）格式，然后按下按钮，反应即开始进行。6.实验结束后，点击右上角的Analyze按钮，软件将显示实验结果：绝对绝对绝对绝对定量定量定量定量实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程66.1在扩增图中（见上图），可通过更改PlotSettings来改变扩增图的显示方式。如果想查看阈值线或基线，请将Threshold及Baseline打勾。6.2查看标准曲线时，可通过更改PlotSettings来改变标准曲线的显示方式。Eff%代表扩增效率。R2值代表标准曲线的数据点与回归曲线的接近程度，建议在0.99以上。6.3对于SYBRGreen法实验，可以在MeltCurve界面中查看熔解曲线。绝对绝对绝对绝对定量定量定量定量实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程实验简易操作流程76.4检查QCSummary结果，可以快速查看实验中是否有反应孔存在异常情况。黄色三角中的数字1代表有一种异常情况，2代表有两种异常情况，以此类推。详细信息及解决方案可以在FlagDetails中查看。7.分析之后的结果，可以利用菜单中的FileExport功能，导出Excel格式的结果（左图）。若想存储图片结果，可直接在图片上单击鼠标右键，选择SaveAs，存成JPEG格式的图片（右图）。