清华大学-圆二色谱课件

圆二色谱CircularDichroism(CD)黄嘉欣清华大学2010.11.16基本概念•平面偏振光•右旋偏振光•椭圆偏振光•光活性•圆二色性平面偏振光（planepolarizedlight）右旋偏振光振幅保持不变，而方向周期变化，电场矢量绕传播方向螺旋前进椭圆偏振光（I）振幅、频率、相位完全相同，旋转方向相反的左右旋圆偏振光合成平面偏振光（II）两束振幅不同、但频率相同，旋转方向相反的左右旋圆偏振光将合成椭圆偏振光平面偏振光经过光学活性介质后，如两圆偏振光振幅相同（光吸收相同），但相位不同（传播速度不、同），合成的平面偏振光的偏振面旋转一个角度α.光活性（Opticalactivity）圆二色性(circulardichroism）吸收左右旋圆偏振光在介质中的传播速度不同，而且吸收也不相同，通过介质后平面偏振光成为椭圆偏振光Thepeptidebondisinherentlyasymmetric&isalwaysopticallyactiveCD应用1、蛋白质二级结构2、药物与蛋白二级结构的结合3、蛋白质折叠4、外界环境对蛋白质构象的影响5、膜蛋白的二级结构和超二级结构CDsignalofaproteindependsonitssecondstructure•近紫外CD谱可作为一种灵敏的光谱探针，反映Trp、Tyr和Phe及二硫键所处微环境的扰动，能用来研究蛋白质三级结构精细变化。•VIP:近紫外CD光谱测量所需蛋白质溶液的浓度一般比远紫外CD测量高1～2个数量级.蛋白芳香族氨基酸残基微环境蛋白质中芳香氨基酸残基，如色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)及二硫键处于不对称微环境时，在近紫外区250～320nm，表现出CD信号。吸收值在0.6~1.2之间能获得好的信噪比，若吸收值超过2，则数据变得不可靠。溶剂吸收BufferSystemsforCDAnalyses•Acceptable:1.PotassiumPhosphatewithKF,K2SO4or(NH4)2SO4asthesalt.2.Hepes,2mM.3.Ammoniumacetate,10mM.•Avoid:Tris;NaCl;Anythingopticalactive,e.g.Glutamate