DNA单位换算

1DNA单位换算1.重量单位换算1ｕg=10-6g1ng=10-9g1pg=10-12g1fg=10-15g2.换算系数(核酸碱基对与分子量的换算)1KbdsDNA(Na+)=6.6×105Da1KbssDNA(Na+)=3.3×105Da1KbssRNA(Na+)=3.4×105Da脱氧核苷酸的平均分子量=324.5Da(～330Da)例：配制1pmolpBR322DNA溶液100ml需称取多少DNA？解：pBR322DNAMW=4363×330×2=2.8×1062.8×106×106ｕg1pmol=-----------------＝2.8ｕg(1L)10122.8100ml1pmolpBR322DNA＝------＝0.28ｕg103.DNA和RNA的定量(OD值换算)OD：opticaldensity光密度一般是应用紫外分光光度计检测核酸的浓度，它适用于DNA及RNA浓度的测定。核酸(DNA、RNA)、蛋白质以及盐和小分子都有吸收紫外光的性质，其吸收高峰分别为：核酸260nm波长处蛋白质280nm波长处盐、小分子230nm波长处A260单位(核酸OD值)的换算：1A260(1OD)单位的双链DNA＝50ｕg/ml1A260(10D)单位的单链DNA＝40ｕg/ml1A260(1OD)单位的单链RNA＝40ｕg/ml1A260(1OD)单位的寡核苷酸＝33ｕg/ml2例Ⅰ：取某DNA样品溶液5ｕl，加水至1000ｕl，在UV260nm时，测得的OD值是0.2，问原溶液中的DNA浓度(ｕg/ｕl)是多少？解：0.2×50ｕg/ml＝10ｕg这表示5ｕl样品溶液共有10ｕgDNA，所以该样品DNA浓度应是：10ｕg/5ｕl＝2ｕg/ｕl例Ⅱ..取某质粒DNA溶液3ｕl，加入到300ｕlTE中，测得的OD值A260＝＝0.134，问其DNA浓度为多少？解：0.134×50ｕg×300------------------------------＝0.6ｕg/ｕl3×1000即此质粒DNA浓度为每微升0.6ｕg。4.DNA溶液纯度测定一般情况下，应用紫外分光光度计测定DNA溶液在A230、A260和A280下的吸收光值，便可以很好地确定DNA溶液的纯度，通常只测A260和A280两个吸收光度便可满足要求。因为纯的DNA溶液其A260/A280的比值约为1.8-1.9，而其A260/A230的比值则应大于2.0，所以当：a.A260/A280＞1.8时，表明RNA污染严重b.A260/A280＜1.6时，表明有明显的蛋白质或苯酚的污染cA260/A280＜2.0时，表明溶液中有残存的核苷酸、氨基酸、酚、盐等小分子杂质这样的DNA样品溶液需重新处理：在a情况下，可考虑用RNA酶处理之，在b和c的情况下，可考虑用蛋白酶K以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀重新处理样品。在SDS和EDTA的存在的条件下，proteinaseK仍具有很高的活性，因此在DNA降解酶活力被抑制的情况下，使用proteinaseK仍可以消除蛋白质，为制备高纯度高分子量的DNA制品创造了条件。