中药分析实验指导讲解

中药分析实验指导中药教学部重庆邮电学院生物信息学院二OO五年二月1前言《中药分析》是中药专业的一门专业课程，是以中医药理论为指导，应用现代分析理论和方法，研究中药制剂质量及控制方法的一门学科。《中药分析实验》是继《中药化学实验》、《无机化学实验》、《分析化学实验》和《有机化学实验》之后而开设的实验课程，是中药学专业应用性较强的一门实验课程。其目的主要是使学生掌握中药分析的基本原理和实验技能，熟悉常用中药及其制剂的定性鉴别、检查和含量测定方法，为进一步研究、整理和制定中药及其制剂质量标准打下一定的基础。本课程的主要任务是：通过实验训练进一步培养学生分析问题和解决问题的能力；培养学生的创新意识、创新精神和创新能力；培养和提高学生的科学实验素养。本教材的编写力求遵循中药专业的培养目标，适应药学类专业教育的需要，并注重突出实用性、先进性及中药分析的特色。本教材中收载了比较成熟且基本技能训练效果较好，又切合理论课程基本要求的中药分析实验共12个，实验性质涵盖验证性、综合性和设计性三种类型。每一实验都包括实验目的、实验提要、实验用品、实验步骤和思考题五个部分，实验内容项后附有涉及实验结果及相关内容的思考题，对开拓学生思路、加深对实验内容的理解大有裨益。本实验教材力求选用最新研究资料，密切联系教学、生产和科研实际，对中药类本科专业学生适用。生物信息学院中药学教学部赵颖编著2005年02月2目录中药分析实验的一般知识……………………………………………………………3实验一中药制剂的显微定性鉴别………………………………………………··5实验二中药制剂的理化定性鉴别………………………………………………··6实验三重量法测定苦参片中苦参总碱的含量…………………………………··7实验四甲苯法测定中药制剂中水分含量………………………………………··8实验五酸性染料比色法测定华山参片总生物碱的含量………………………··9实验六紫外分光光度法测定制剂中黄酮类成分的含量………………………10实验七高效液相色谱法测定苦杏仁中苦杏仁苷的含量………………………11实验八高效液相色谱法测定三黄片中大黄素和大黄酚的含量………………12实验九养胃舒胶囊的质量分析设计方案………………………………………13实验十小青龙颗粒的质量分析设计方案………………………………………14实验十一抗感冒注射剂的质量分析设计方案…………………………………15实验十二玉屏风口服液的质量分析设计方案…………………………………153中药分析实验的一般知识一、中药分析实验要求1．学生进入实验室必须严格遵守实验室规章制度，服从带教老师的指导。2．实验前必须做好预习工作，通过预习，明确本次实验的目的和要求，掌握实验原理及操作要点，严格按实验规程进行操作。3．实验中应认真观察实验现象，及时正确地将有关现象和数据记在规定的实验记录本上，不许后补或随意涂改。4．爱护实验室的仪器设备，不准将实验室的仪器设备私自带出室外。未经老师允许，不得擅自动用精密仪器，如使用精密仪器必须登记后在指导老师监督下使用。5．实验中如有仪器损坏应立即报告老师，并按规定及时办好报损或赔偿手续。6．实验过程中应严密注意防火灾，防爆炸，防腐蚀，防污染工作，牢固树立“安全第一”的观念。7．实验室内严禁吸烟，不准会客，不许带入食物。8．实验过程中应避免公用试剂的污染，并注意节电，节水，节约化学试剂。9．实验结束后，一切仪器试剂必须放回原处，玻璃仪器必须清洗干净，带有腐蚀性的废液应倒在废液缸中。10．值日生必须认真打扫实验室，清除垃圾和污物，检查水电，关闭门窗，完成后需经指导老师检查合格后才能离开。二、中药分析实验的基本操作技能根据药品质量标准规定，评价一个药物的质量一般包括鉴别、检查和含量测定三个方面；判断一个药物的质量是否符合要求，必须全面考虑三者的检测结果。这些检测结果的可靠性，又是建立在基本操作技能的基础上，过硬的基本操作技能是进行药品全面质量检测与研究的基本条件，也是使药品质量标准真正符合法规要求的必要条件，否则会使合格的产品被误认为“不合格”，给生产单位造成不必要的损失，或者使不合格的产品误认为“合格”，则危害更大。中药分析实验课正是培养学生掌握好基本操作技能的重要教学环节。学生在校期间经过中药制剂分析基础理论的学习和基本技能的严格训练，可获得检验和研究药品质量的基本思路和方法，从而为今后做好药品质量的控制和提高工作打下坚实的基础。中药分析实验将选择一些有代表性的内容，包括鉴别、检查和含量测定，以《中国药典》和中国药品检验标准操作规范》中的分析方法为主要内容，加强对学生基本操作的训练。中药制剂分析的对象大多是复方中药制剂，被测成分相对含量低，干扰大，会给分析上作带来一定的难度，再者有些分析方法(如薄层色谱法)易受众多因素影响，有时结果重复性、可控性不太理想，要想获得可靠、准确、重复性好的分析结果，需要学生有过硬的基本操作技能，规范的操作理念，科学、严谨的工作作风，以满足药品检验和药品研究工作的实际需求。实验中所用术语要规范、准确，要与《中国药典》相一致。为了保证药物分析结果的准确性和可靠性，《中国药典》对一些基本操作中的专用术语都有严格的定义，现将《中国药典》规定的取样量的准确度和试验的精确度摘录如下：(1)称取“0.1g”系指称取量可为0.06—0.14g，称取“2g”系指称取量可为1.5—2.5g；称取“2.Og，系指称取量可为1．95—2．05g，称取“2.00g”系指称取量可为1．995—2.005g。4(2)“精密称取”系指称取重量应准确到所取重量的千分之一：“称定”系指称取重量应准确至所取重量的百分之一：“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求；“量取”系指可用量简或按照量取体积的有效数位选用量具。取用量为“约”若干时，系指取用量不能超过规定量的±10％。(3)恒重，除另有规定外，系指连续两次干燥或灼烧后的重量差异在0.3mg以下的重量。干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行，炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30分钟后进行。《中国药典》有关温度的规定为：水浴温度指98℃—100℃，热水指70℃—80℃的水；微温或温指40℃一50℃；室温指10℃—30℃；冷水指2℃—10℃的水；冰浴指2℃以下；放冷指放冷至室温。三、实验数据的记录、处理和实验报告1．实验数据的记录学生应备有专用的记录本，不允许将数据记在小纸片上或随便记在其他地方。实验过程中所得的各种测量数据及现象，应及时记录下来，有特殊要求的，要按规定进行，如薄层色谱法要用绘图、复印件或彩照表示。记录数据时，要实事求是，决不能拼凑数据。若发现数据读错、弄错，而需要改动时，可将该数据用一横线划去，并在其上方或旁边写上正确的数据。记录内容一般包括供试药品名称、来源、批号、数量、规格、外观性状、包装情况、检验中观察到的现象、检验数据等。记录实验数据时，保留几位有效数字应和所用仪器的准确程度相适应。2．实验数据和处理在实验中，测得一组数据后，对其中可疑数据是保留还是舍弃，可用Q检验法或Grubbs检验法进行检验，决定取舍，然后算出平均值，作为实验数据，决不允许主观臆断，随意取舍。3．实验报告中药制剂分析实验报告一般包括以下内容：(1)实验名称、实验日期：要写清实验名称及实验日期。(2)实验目的：写明通过本实验要达到的训练目的。(3)实验原理：用文字表述本实验的基本原理。(4)操作步骤：简明扼要叙述实验的操作步骤。(5)实验数据的处理及结果：定性鉴别和检查实验要写明本次实验的结果如何；鉴别要说明是否可检出被测成分、检查项目是否符合规定。(6)问题及讨论：应对实验中观察到的现象及实验结果进行分析和讨论，如果实验失败，要寻找失败原因，总结经验教训，以提高自己的基本操作技能。5实验一中药制剂的显微定性鉴别一、实验目的熟悉中药制剂的常规分析方法——显微鉴别方法。二、实验提要通过用显微镜来观察中药制剂中保留有原药材的组织、细胞或内含物等显微特征，从而鉴别制剂的处方组成。三、实验用品（1）显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、乳钵、擦镜纸、小镊子、小刀（2）水合氯醛试液、甘油醋酸试液、稀甘油(AR)。（3）牛黄解毒片、蛇胆川贝散、银翘解毒片、六味地黄丸(市售品)。四、实验步骤(一)牛黄解毒片显微鉴别操作方法：取本品片心，研成粉末，取少许，置载玻片上，滴加适量水合氯醛试液透化后加稀甘油l滴，盖上盖破片，用吸水纸吸干周围透出液，置显微镜下观察。1．草酸钙簇晶大，直径60—140µm。2．不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽。(二)蛇胆川贝散显微鉴别操作方法：取本品粉末少许，置载玻片上，用甘油醋酸试液装片，置显微镜下观察：淀粉粒广卵形或贝壳形，直径40—64µm，脐点短缝状、人字状或马蹄状，层纹可观察。(三)银翘解毒片显微鉴别操作方法：取本品粉末少许置载玻片上，用水合氯醛试液装片，透化后加稀甘油l滴，盖上盖玻片，置显微镜下观察：1．花粉粒黄色，类球形，直径54—68µm，有三孔沟；表面具细密短刺及圆粒状皱纹。2．草酸钙簇晶成片，直径5—17µm，存在于薄壁细胞中。3．联结乳管直径14—25µm，含淡黄色颗粒状物。(四)六味地黄丸显微鉴别操作方法：取本品适量，采取适当方法解离后，取少许，观察淀粉粒和不规则分枝状团块，用甘油醋酸试液装片，其他用水合氯醛试液透化后滴加适量稀甘油，置显微镜下观察。1．淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24—40µm，脐点短缝状或人字状。2．不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛试液溶化，菌丝无色，直径4—6µm。3．薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。4．草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行。5．果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。6．薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群。6五、思考题1．试述你观察到的显微特征，各代表何种中药材?2．通过对以上4种中成药的显微鉴别，请你总结出中成药显微鉴别的方法及注意事项。说明：实验类型：验证性实验。实验二中药制剂的理化定性鉴别一、实验目的通过对几种中成药的理化定性鉴别，掌握中药制剂理化定性鉴别的方法和原理。二、实验提要利用中药制剂中某些化学成分特有的颜色反应进行鉴别；利用标准品、对照药材作为对照进行TCL检识，以鉴别中成药的真伪。三、实验用品(1)烧杯、试管、蒸发皿等。(2)恒温水浴、恒温干燥箱、电炉。(3)紫外分析仪(254nm，365nm)。(4)对照品：胆酸、猪去氧丹酸。(5)对照药材：薄荷、荆芥。(6)样品：牛黄解毒片、银翘解毒片、板蓝根颗粒剂(均为市售品)。(7)试剂均为AR级。四、实验步骤1．一般理化定性反应(1)牛黄解毒片中大黄、黄芩的鉴别反应取本品6片(包衣者除去包衣)，研细，加乙醇l0m1，温热l0分钟，滤过，滤液作如下反应：A．取滤液5m1，加镁粉少量与盐酸0.5m1，加热，即显红色。B．另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，即显红色，再加30％过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸呈酸性，则红色变为黄色。(2)板蓝根颗粒剂A．取本品0.5g加5m1甲醇使溶解，静置，取上清液点于滤纸上，置紫外灯(365nm)下观察，显蓝紫色。B．本品0.5g，加10m1甲醇使溶解，滤过，置水浴中加热数分钟，显蓝紫色。2．TCL鉴别(1)牛黄解毒片的TCL鉴别：7A．薄层板制备硅胶GCMC—Na板(手工铺板或预制板)。B．供试品溶液制备取本品2片，加硅藻土2g，研匀，加氯仿15m1，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，加乙醇0.5m1溶解，作为供试品溶液。C．对照品溶液制备取胆酸、猪去氧胆酸对照品，分别加乙醇制成每m1含2mg的溶液，即得对照液。D.点样与展开分别吸取上述3种溶液各5µ1，点于同一硅胶G板上，以正己烷—乙酸乙酯—醋酸—甲醇(20：25：2：3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以l0％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10分钟，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的两个荧光斑点