糖化血红蛋白

糖化血红蛋白测定的临床意义主讲人：王秀糖尿病（DM）•糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各种致病因子作用于机体导致胰岛素功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合症。我国糖尿病现状•随着国内人民生活水平的提高，膳食结构和生活方式的改变导致了与糖脂代谢紊乱相关的疾病迅猛增加。•其中，糖尿病人群已接近1亿，糖尿病前期人群大约2亿•但我国患者知晓率、治疗率和达标率却很低！•知晓率（36.1%）•治疗率（33.4%）•糖尿病患者血糖控制率（13.5%）现在，我国已成为世界上糖尿病人口最多的国家。糖化血红蛋白•糖化血红蛋白为血红蛋白两条ß链N端的颉氨酸与葡萄糖化合而成。是不可逆反应，其量与血糖浓度成正相关，其中以HBA1C为主。红细胞在血循环中的寿命为120天，所以可以观测到之前120天的平均血糖水平。HBA1C与血糖区别•空腹血糖和餐后血糖反映某一具体时间的血糖水平，容易受到进食和糖代谢等相关因素的影响。•糖化血红蛋白不受抽血时间、是否空腹、是否使用胰岛素等因素的干扰，可以稳定可靠的反映出检测前120天内的平均血糖水平。国内目前糖尿病诊断标准•确诊为糖尿病1.具有典型症状，空腹血糖7.0MMOL/L或餐后血糖11.1MMOL/L2.没有典型症状，仅空腹血糖7.0MMOL/L或餐后血糖11.1MMOL/L者应再重复一次3.没有典型症状，仅空腹血糖7.0MMOL/L或餐后血糖11.1MMOL/L者OGTT2H血糖11.1MMOL/L者可以确诊为糖尿病•可排除糖尿病1.OGTT2h血糖7.8-11.1MMOL/L为糖耐量减低；如空腹血糖6.1-7.0MMOL/L为空腹血糖受损，均不诊断为糖尿病。2.若餐后血糖7.8MMOL/L及空腹血糖5.6MMOL/L可以排出糖尿病。HBA1C的特点•与血糖值相平行血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖控制水平。•生成缓慢由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化血红蛋白则是逐渐生成的，短暂的血糖升高不会引起糖化血红蛋白的升高；反过来，短暂的血糖降低也不会造成糖化血红蛋白的下降。由于吃饭不影响其测定，故可以在餐后进行测定。HBA1C的特点•一旦生成就不易分解糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短时间内的血糖波动，却能很好的反映较长时间的血糖控制效果，能反映采血前2-3个月内的平均血糖水平。•较少受血红蛋白水平的影响糖化血红蛋白是指其在总血红蛋白中的比例，所以不受血红蛋白水平的影响。HBA1C的临床意义•评价糖尿病长期控制水平，反映出病人在抽血前2-3个月内的平均水平•可作为糖尿病的病情监测指标，亦可作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标•作为监测指标来了解患者近阶段的血糖控制情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况HBA1C的临床意义•对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿，畸形胎，死胎，以及急慢性并发症发生发展的监督具有重要意义•对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值•对于糖化特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸中毒等急性并发症的发生HBA1C的控制标准•中华医学会糖尿病分会推荐的一般HBA1C目标值为6.5%•4%-6%:血糖控制正常•6%-7%：血糖控制比较理想•7%-8%：血糖控制一般•8%-9%：控制不理想，需加强血糖控制，多注意饮食结构及运动，并在医生指导下调整治疗方案•9%:血糖控制很差，是慢性并发症发生发展的危险因素，可能引发糖尿病性肾病、动脉硬化、白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒的急性合并症血糖达标的三个标准•空腹血糖控制在4.4-6.1MMOL/L之间•餐后两小时血糖控制在4.4-8.0MMOL/L之间•糖化血红蛋白控制在6.5%以下达到理想的控制目标，即不仅要控制基础状态下的空腹高血糖，还要控制负荷状态的餐后高血糖，者两个血糖都控制好了，糖化血红蛋白才能达到理想水平，进而延缓和防止多种并发症的发生。HBA1C临床使用周期美国糖尿病协会建议：1.血糖控制满意且稳定的糖尿病患者，至少一年测两次2.若血糖控制不满意且需调整方案，应一年测四次3.计划怀孕的糖尿病妇女初期每月测一次；血糖控制满意后，应每6-8周测一次,直到受孕HBA1C监测的注意事项•糖化血红蛋白可作为糖尿病的普查和健康检查项目，但不能取代糖耐量试验作为糖尿病的诊断依据•对昏迷病人的鉴别：在脑血管急症时，由于应急反应可使血糖增高，但糖化血红蛋白监测正常。若糖化血红蛋白增高则预示患者处于高血糖状态•糖化血红蛋白很高的患者要警惕酮症酸中毒的发生•对于妊娠糖尿病仅测定血糖是不够的，一定要监测糖化血红蛋白，并使其保持在8%以下。如此可避免巨大胎儿、死胎和畸形胎的发生•指导治疗HBA1C的检测方法糖化血红蛋白的检测方法很多，常用的有微柱法离子交换层析、亲和层析、高压液相、免疫荧光、离子捕获、电泳法等。金标准：高压液相法（HPLC）HBA1C检测试剂盒（HPLC法）•包装规格400人份•预期用途用于体外定量检测人全血中的糖化血红蛋白A1C。该试剂盒与Bio-Rad血红蛋白测试系统（D-10HemoglobinTestingSystem）配合使用，采用离子交换高压液相法测定人全血中的糖化血红蛋白。检测原理Bio-Rad血红蛋白测试系统（D-10HemoglobinTestingSystem）应用离子交换高压液相法（HPLC）对人全血中的糖化血红蛋白A1c的自动化和准确的测定。标本可被自稀释，之后注入分析柱。血红蛋白测试系统（D-10HemoglobinTestingSystem）将预先编程设置的由低到高离子浓度的缓冲液注入系统，在这一过程中，血红蛋白经和柱中物质离子反应后达到分离。处理好的样本自动被注入分析通路，分离的血红蛋白随后在流经光感测量计时，测量其在415nm光波吸收情况。血红蛋白测试系统（D-10HemoglobinTestingSystem）临床数据处理软件（CDM）将每次分析过程中收集到的数据还原。此间要经过两个水平的计算。然后得出分析结果和分析图谱，A1c的峰被截断，该面积计算使用了指数模式的高斯对数（EMG），这样计算已经排除了可变部分的A1c和氨基甲酰血红蛋白等干扰成分。试剂盒主要组成成分产品目录号名称描述数量220-0110清洗缓冲液1Bis-Tris磷酸盐缓冲液，PH值6.02瓶*2000ml220-0111清洗缓冲液2Bis-Tris磷酸盐缓冲液，PH值6.71瓶*1000ml220-0112洗液/稀释液去离子水。1瓶*1600ml220-0113分析柱阳离子交换柱1个220-0115软盘含糖化血红蛋白A1c检测试剂盒（HPLC法）的参数1个220-0118校准品/校准品稀释液校准品：冻干的人红细胞裂解剂。校准品稀释液：去离子水校准品1：3瓶*7ml校准品2：3瓶*7ml校准品稀释液1瓶*100ml220-0148全血灌注液冻干的人红细胞裂解剂4瓶*1.0ml220-0149样本管聚丙烯小管，盖子可穿透100个*1.5ml试剂盒组成成分•注意事项：血红蛋白测定系统是按照每个月200个或200个以上的测试以及每次运行4个或4个以上的样本来计算缓冲液的水平和废液的水平。低测试量的用户可能在警告信息显示前就用完缓冲液并充满外部的废液桶。每次运行前要目测检测缓冲液的水平和废液的水平。试剂储存条件及有效期•清洗缓冲液1，清洗缓冲液2，洗液/稀释液和分析柱在15-30℃保存，有效期为2年。•校准品/校准品稀释液和全血灌注液在2-8℃保存，有效期为2年。样本要求•样本收集全血样本应收集在含EDTA的真空采血管中。全血样本在2-8℃可保存7天，或在室温（15-30℃）保存3天。•样本准备1样本管在使用前应达到室温（15-30℃），在室温下样本可保存3天。将样本管放在D-10标本架上，随后放入机器。确保标本的条形码朝向仪器的后方。对特殊的12，13和14mm直径的管子可参见内附说明。对16mm的管子去除其内插部分。高度为75mm到100mm的管子可以使用。2若样本管形状或型号不规则，或样本管中的样本小于2.0ml,则需先稀释样本，吸取1.5ml的稀释洗液/稀释液加入1.5ml的安瓶中，接着加入5µl全血，盖好盖，彻底震荡。然后用1.5ml的载管装好。试剂的准备和保存参照当前批号的校准液和质控液中的说明书来获取参考值及其范围。当更换不同批号的试剂和分析柱时，一定要从相应的软盘上安装相应的参数。清洗缓冲液和洗液/稀释液1.在使用前清洗缓冲液和洗液/稀释液应将其平衡至室温（15-30℃）2.未开封前清洗缓冲液和洗液/稀释液在室温可保存至有效期，开封后在室温可保存8周。3.在完成200个测试后，应安装一瓶新的清洗缓冲液1.安装完试剂后在窗口上重新设置液量。4.不同批号的洗液/稀释液可以互换。•全血灌注液安装新的分析柱时应使用新复溶的全血灌注液。1.全血灌注液在2-8℃可稳定保存至有效期。2.将1ML去离子水加入瓶内复溶全血灌注液。3.轻摇瓶体使之溶解和充分混合。4.在室温下静置10-15分钟。5.在标签上注明复溶的日期，复溶的全血灌注液在2-8℃可稳定保存一天。•质控BIO-RADLYPHOCHEK糖尿病质控在使用前以1：300的比例稀释。吸取1.5ML洗液/稀释液加入一个贴好标签的1.5ML的样品管中，随后加入5微升复溶的质控。•试剂失效或变质的说明如果试剂在运输过程中冷冻了，在安装前要轻轻颠倒混匀。不要使用变色，浑浊或有沉淀的试剂。不要使用有遗漏的试剂。不要使用冻干品是棕色或瓶子损坏的校准品或全血灌注液。如冻干品中有不溶解的物质，则应丢弃，不能使用。参考范围•下述范围可作为结果并加以解释。然而糖尿病病程、治疗好坏、发病年龄等因素在评估血糖控制程度上加以考虑。这些结果均为非孕妇者的数值。“应采取的措施”应视个人具体情况而定。这些措施包括糖尿病病人加强教育，与医疗小组的协作，参考内分泌医师的意见，改变治疗方式，加强自我血糖监测，更多接触病人等。•HbAIc(%)血糖控制程度8建议增加措施（仍具有心、脑、肾等并发症的高风险度）7控制达标（I型糖尿病人可能有低血糖，一些糖耐量不良或亚临床型可有血红蛋白增高）6非糖尿病水平检验结果的解释•为了获得可接受的准确的结果，应遵从如下原则：1.D-10已经经过了测定测试。校准/稀释液的内附材料中有关于斜率和截距的参考值。2.每次分析的总面积范围在1000000到4000000µvot·S之间，若超出此范围则不能报出结果。3.各个峰应正确识别。在分析柱的内附说明书中有关于各分析物滞留时间的说明。4.质控值在正常范围。5.可报告值的范围：本机HBAIC的范围是3.8%-18.5%。该范围已由操作特点中提供的数据验证。简言之，这些数据说明该机测定的血红蛋白在3.8%-18.5%范围内时呈线性。当结果超出此范围时，在其结果旁将打上一个（*），并且结果不被报告。谢谢！