载体去磷酸化步骤

载体去磷酸化步骤1、加过量酶将载体完全线性化（5小时。先取3ul进行鉴定，如果没有酶切完全可再加入酶继续切）。2、65度，20分钟，使酶失活。3、向酶切体系中（50ul）加入2ulCIAP，37度1小时。注：有些人喜欢结束第1步（即酶切）后，跑电泳，再回收（即提纯），然后再加入CIAP。若是这种情况，在加入2ulCIAP的同时，还需加入5ul的10*CIAPbuffer。但由于原酶切体系中加入的buffer已含有CIAPbuffer中的成份，所以个人认为结束第1步后不用回收载体，可以直接利用酶切体系中的buffer，不用额外加入CIAPbuffer。如果在此回收，会损失一部分载体）。4、电泳、切胶、回收载体。