第四章-人源性生物制品

第四章人源性生物制品3第一节人源性生物制品的特点与种类1.1人源性生物制品的特点1、效价高、疗效可靠2、安全性好、不易产生副反应3、稳定性好，便于保存和运输4、资源有限、研究意义重大41.2人源性生物制品的种类1、血液制品◆血液制品是指由健康人的血浆或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成分。用于治疗和被动免疫预防。◆血液制品属于治疗用生物制品。5血液制品全血血液成分制品血浆蛋白制品红细胞制剂白细胞制剂血小板制剂血浆制剂白蛋白类制品免疫球蛋白类制品等62、尿液制品人的尿液中含有许多重要的生理活性物质。目前产品有尿激酶、激肽释放酶、尿抑胃素、人尿胰蛋白酶抑制剂、人绒毛膜促性腺激素（HCG）等。73、胎盘制品人胎盘制品主要有人胎盘丙种球蛋白、人胎盘白蛋白、人胎盘RNA酶抑制剂等。84、人体液细胞中的活性物质人体液细胞包括红细胞、淋巴细胞、血小板、成纤维细胞等。这些细胞内的重要物质，也就是细胞因子具有重要的生理功能。91.3血液及其综合利用(1).血液的组成：A.无形成份——血浆50％～60%红细胞白细胞血小板40％～50%B.有形成份1.血液的成分11血浆蛋白的组成：A1b+IgG免疫球蛋白IgA、IgM、纤维蛋白原（Fg）等百余种微量蛋白成分12（2）血液的功能：A.输送氧气和二氧化碳，以进行肺与组织间的气体交换；B.维持渗透压，调节酸碱和电解质平衡；C.运输养份和代谢产物，传递维生素、激素和药物；E.防御和免疫；F.凝血和溶栓作用等。13（3）血容量、休克、渗透压、白蛋白：血容量指全身有效循环血量而言。有效循环血量是指单位时间内通过心血管系统进行循环的血量，而不包括贮存于肝、脾和淋巴血窦中或停滞于毛细血管中的血量。14休克：在医学上是指由于多种原因引起的全身微循环障碍导致的临床综合征。微循环是指微动脉和微静脉之间的血液循环，是血液与组织细胞进行物质交换的场所。失血性休克、心原性休克、中毒性休克、过敏性休克、神经原性休克15162、输血疗法的发展输血发展史的里程碑1628Harvey血液循环1901Landsteiner血型1914Hustin抗凝剂1917Robertson17常用的抗凝剂ACDCPD183、血液的综合利用全血的缺点：A.大量输全血可使循环超负荷。B.全血输入越多，患者的代谢负担越重。C.全血容易产生同种免疫，不良反应多。D.全血内所含的成分不浓、不纯和不足一个治疗剂量，疗效差。E.全血是宝贵的社会资源，盲目输注全血是对血源的浪费。19全血适应证：A.全血可用于急性大量血液丢失可能出现低血容量休克患者；B.存在持续活动性出血，估计失血量超过自身血容量30%的患者（我国临床输血技术规范规定）。20成分输血：把全血中的各种有效成分分离出来，分别制成高浓度的制品，然后根据不同患者的需要，输给相应制品。这是当前输血技术发展的总趋势，也是输血现代化的重要标志之一。21成分输血的优点：A.制剂容量小，浓度和纯度高，治疗效果好。B.使用安全，不良反应少。C.减少输血传播疾病的发生。E.便于保存，使用方便。F.综合利用，节约血液资源。22（1）、全血临床作用：缺点：输血反应4.血液制品的种类、性质和用途23（2）血液成分制品血液成分制品(bloodcomponents)专指用物理的或机械的方法分离出来的血液的一部分，如各种血细胞、血浆等，是从单个或血型相同的供者血液中采集的。24红细胞制剂浓缩红细胞洗涤红细胞添加液红细胞去白细胞红细胞冰冻红细胞25白细胞制剂生理功能：临床应用：缺点：TA-GVHD。。。。。。26血小板制剂常规浓缩血小板、单采浓缩血小板、照射血小板生理功能：临床应用：缺点：人类白细胞抗原（humanleucocyteantigen，HLA）27血浆制剂《血液制品管理条例》原料血浆必须使用单采血浆机械采集28新鲜冷冻血浆（FFP）普通冷冻血浆(frozenplasma，FP)新鲜液体血浆(freshliquidplasma，FLP)等29（3）血浆蛋白制品血浆蛋白制品(plasmaproducts)是指从人血浆中分离制备的有明确临床疗效和应用意义的蛋白制品的总称，国际上将这部分制品称为血浆衍生物(plasmaderivatives)。30白蛋白类制品生理功能：A.维持血液渗透压：lg白蛋白声生的渗透压相当于20ml液体血浆或40ml全血。B.抗休克作用：能增加血液的有效循环量，对创伤、手术或烧伤所引起的休克有明显疗效。31C.运输和解毒作用：白蛋白能结合阳离子，也能结合阴离子，故能输送性质不同的物质，如脂肪酸、激素、金属离子、酶和药物，并能结合有毒物质，运送至解毒器官。D.营养供给：组织蛋白和血浆蛋白可互相转化，白蛋白可作为机体内的氮源，为组织提供营养。32免疫球蛋白类制品A.肌注免疫球蛋白制剂临床作用：缺点：制造方法：33B.静脉注射免疫球蛋白制剂（IntravenousImmunoglobulin，IVIG）临床应用：原发性和继发性免疫缺陷症特发性血小板减少性紫癜川崎病34C.特异性免疫球蛋白制剂人乙型肝炎免疫球蛋白等35凝血系统蛋白制品我国现在能作的只有少数几种：凝血因子VIII凝血酶原复合物纤维蛋白原制剂等。365.血液制品的安全性◆血浆相关病毒的概念◆原料血浆筛查及检疫期管理◆血液制品生产工艺去除病毒能力◆血液制品病毒灭活/去除工艺◆保证血液制品病毒安全性的其他措施原料血浆的特殊性–具有潜在的病毒风险，若获得起始原材料的过程和生产过程控制不严密，可能导致血源性传染病感染：甲型肝炎病毒（HAV）乙型肝炎病毒（HBV）丙型肝炎病毒（HCV）丁型肝炎病毒（HDV）艾滋病病毒（HIV）巨细胞病毒（CMV）人类细小病毒（HPV）朊病毒（CJDV）其他可通过血液传播的病毒病毒名称大小（nm）病毒包膜核酸传播介质全血血液制品乙型肝炎病毒（HBV）42＋DNA＋＋丙型肝炎病毒（HCV）30-60＋RNA＋＋人类免疫缺陷病毒（HIV）100＋RNA＋＋人嗜T淋巴细胞病毒（HTLV）90-140＋RNA＋＋巨细胞病毒（CMV）200＋DNA＋－EB病毒（EBV）150-180＋DNA＋－甲型肝炎病毒（HAV）27-32－RNA＋－丁型肝炎病毒（HDV）28-39＋RNA＋＋人细小病毒（HPV）18-26－DNA＋＋克－雅氏病（CJD）蛋白质源性的传染因子（朊蛋白－PrionProtein)埃博拉病毒（Ebola）、西尼罗病毒（West-nile）、SARS病毒、禽流感病毒？？单采血浆站及单采血浆◆血液制品是以人血浆为原料生产的。◆原料血浆来自单采血浆站采集的血浆。◆单采血浆站由血液制品生产企业设置和管理，应遵守《血液制品管理条例》、《单采血浆站基本标准》、《单采血浆站管理办法》和《单采血浆站质量管理规范》等法律法规的相关规定。血浆运输和贮存◆血浆采集后，应在6小时内冻结，置-20℃以下保存，保存期不超过3年。◆血浆用专用冷藏车在-15℃以下运输。检验用国家中检所检定合格的批批检试剂测定HBsAg、HIV抗体、HCV抗体、ALT、梅毒、血浆蛋白、抗-HBs等其他抗体含量。原料血浆血清学的检测：HBsAg抗－HCV抗－HIVALT梅毒原料血浆检疫期◆2008年6月31日后建立原料血浆投料前的“检疫期”制度.◆血浆采集复检合格后放置90天等献浆员第二次献浆检测合格后投产。减少窗口期传染。◆若用NAT/PCR检测，“窗口期”可由90天缩短至60天.三种病毒的窗口期平均天数ELISANATHCV8223HIV2211HBV5934原料血浆采集管理流程（浆站）合格供浆员供浆员注册供血浆者档案查询建立首次供浆者档案新供浆员合格供浆员问询合格？NO拒绝YES体检合格？NOYES血清样本新供浆员*血清检验合格？NO新供浆员注册YES*血浆采集入浆站血浆库房•血浆检测合格供浆员合格？YES拒绝NO运输至血液制品厂家*检测用试剂经国家批批检和入厂确认*采浆耗材经入厂检验合格原料血浆管理（血液制品生产厂家）YES验收合格？NoSFDA监督下销毁血浆样品血浆抽样YES保留样品库房待检区*检测血浆投产2年后销毁合格？检疫期YESNO不合格合格？NO合格血浆QA放行投浆生产永久拒绝供血浆者淘汰不合格血浆省级监督员监督销毁/其他用途•检测试剂SFDA放行•检测试剂使用前蓉生确认保留样品血浆采集流程图投浆生产检疫期管理生产厂家复检询问/体检/血浆采集/筛查单采血浆站《单采血浆站管理办法》/《浆站GMP》《中国药典》三部《中国药典》三部《原料血浆检疫期指导原则》GMP冷链运输◆Cohn’s低温乙醇血浆组分法——低温乙醇沉淀法生产工艺中可去除一定量的病毒；◆过滤法——包括用于IVIG的深层过滤，经确证能大量除去脂包膜和非包膜病毒，模型病毒为HBV、HIV、ParvovirusB19、HAV。工艺技术去病毒能力白蛋白三步沉淀病毒Log减少数StepEthand（%）PHLogReductionFactHIVPRVSindbisBEVStepA195.853.33.74.24.2StepⅣ405.854.45.75.43.6StepD104.60.91.73.11.2工艺技术去病毒能力IVIG三步沉淀病毒Log减少数StepEthand（%）PHLogReductionFactHIVPRVSindbisBEVStepA195.854.03.63.23.4StepB125.155.34.74.64.1StepC257.04.04.72.93.8StepD2.23.01.72.8工艺技术去病毒能力血液制品的病毒灭活◆血液制品安全控制◆原料血浆安全控制◆-不同层次的病原体检测方法◆-检疫期制度：排除潜在危险的血浆◆病毒灭活/去除工艺及其效果验证◆生产与质量管理：cGMP◆质量标准与质量控制病毒灭活方法：1、巴氏消毒法◆巴氏消毒法（60℃/10h）即在60±0.5℃连续加热10-11小时。白蛋白采用这个方法进行病毒灭活，通常是在除菌过滤、分装到最终容器以后进行加热处理。通常，为防止蛋白质变性，在除菌过滤前要加入低浓度的辛酸钠或辛酸钠与N-乙酰色氨酸作为保护剂。几十年的临床使用情况证明，采用低温乙醇法和巴氏灭活方法生产的白蛋白对肝炎病毒和HIV是安全的。2、干热法(80℃/72h)冻干品加热法蛋白质冻干除去水分以后可以耐受60-80℃或更高温度。在80℃以上加热可以产生令人满意的对HBV、HCV、HIV和HAV的病毒灭活效果。冻干品加热法一般多用于凝血因子类产品。由于冻干后病毒也更稳定，因此，必须进行在规定条件下的病毒灭活验证。冻干品加热法的病毒灭活效果受产品的水分残留量、组成成分如蛋白质、糖、盐和氨基酸的含量以及冰冻与冻干时间的影响。由于病毒灭活对水分残留量特别敏感，因此要根据验证结果设置允许的水分残留限度，并保持瓶间残留水分的差异处于限度内。3、S/D法S/D法TNBP(0.3%)/Cholate(0.2%)（30℃/6h）TNBP(0.3%)/Tween-80(1%)（24℃/6h）TNBP(0.3%)/Triton-100(1%)（24℃/4~6h）有机溶剂与去污剂的混合物（S/D）能够破坏包膜病毒的脂膜结构，导致受到破坏的病毒无法与感染细胞结合。但该方法不能灭活非脂包膜病毒。4、低pH法（pH：４.00±0.20;24℃,21天）低pH法在某些酸性条件下,脂包膜病毒可以被灭活。免疫球蛋白经低pH如pH4）处理，可以有效灭活几种脂包膜病毒。如在免疫球蛋白生产中，通常采用20-22℃，pH4.1培育21天。灭活条件如pH值、孵放时间和温度、胃酶含量、蛋白质浓度、溶质含量等因素，可能影响灭活效果，应确定这些参数允许变化的幅度。5、ＭＢ（亚甲基蓝）法１μMMB在白色荧光45000lux照射１小时。MB法已用于临床血浆的病毒灭活6、荧光法补骨脂S-59(150μM)结合UVA(3J/cm2)7、纳米膜过滤法使用2