SmartChip超高通量定量PCR系统简介中文

SmartChip超级通量荧光定量PCR系统SmartChip超级通量荧光定量PCR系统是美国WaferGenBiosystems公司推出的一款高通量、高密度、纳升级别的实时定量PCR系统。该系统包括一台纳升级多样品自动加样器、高密度实时定量PCR仪及分析软件，可广泛应用于基因表达定量、基因分型等研究领域。SmartChipreal-timePCRsystem平台优势：高通量一张SmartChip包含5184个微孔，一次运行可同时完成多达5184个独立的扩增反应。低起始只需500ng总核酸样品，单孔样品用量低至100pg即可完成扩增反应，大量节省样品的投入，尤其是珍贵样品的投入。低成本单个孔反应体积仅100nL，传统QPCR反应体系多为10μL~50μL，比传统QPCR节省试剂、引物用量高达80%以上。周期短平均2小时即可完成40cycle的QPCR反应，大大缩短项目周期，推进项目进展。简单灵活工作流程两种SmartChippanel：PredispenedSmartChipPanel和SmartChipMyDesignChips。PredispenedSmartChipPanel里面已经含有的PCR引物/探针，用户只需要将样品及试剂通过加样器加到芯片中即可；SmartChipMyDesignChips不包含PCR引物/探针，用户自行加入样品、试剂和PCR引物/探针。图1SmartChip实时定量PCR系统在一个整合平台上提供了极佳的灵活性：无论是单个样品成千个位点，多个样品数十个到数百个位点，还是成百个样品多个位点，都可以轻松完成实验。简单的、自动化的，两小时快速流程，准确的、低成本的表达谱及基因分型方案。多种应用SmartChip实时定量PCR系统是一个潜在的多功能技术平台，结合高通量测序技术和深入的信息分析，该平台可以为基因功能、致病机理、环境研究及单细胞分析等提供更广阔的思路。SmartChip实时定量PCR系统：1.SmartChip此芯片是一个包含5184个孔的纳米孔阵列（72×72），每个孔的反应体系为100nL。2.纳升级多样品自动加样器（SmartChipMultisampleNanodispenser,MSND）MSND是一款纳升级自动移液设备，可以将384孔板里的样品或试剂转移至SmartChip中，转移液体体积为纳升级别。3.高密度实时定量PCR（SmartChipcycler）SmartChipcycler是WaferGen推出的一款高密度实时定量PCR仪，用来运行和分析SmartChip中的QPCR反应，两小时即可获得研究人员想要的高质量QPCR扩增数据。SmartChip实时定量PCR系统性能表现：灵敏度10-20copiesofDNA特异性可辨别相似度90%的同源基因精确度重复样品间标准偏差0.2Ct重现性芯片间R20.95或4%CV表1在多个SmartChip实时定量PCR系统中SmartChipMyDesign芯片和predispensedSmartChip基因分型panel均能产生高检出率，高均一性以及重复性极高的结果。图2MyDesign芯片中运行的样品与predispensedSmartChip基因表达panel中运行的样品获得的mRNA表达水平一致。一个基因集合里的96个基因选取5个通过5个连续的倍比稀释实验后得到，浓度从0.025ng/孔到0.4ng/孔，两者的线性相关系数R20.99。图3(A)SmartChipMyDesign芯片（MD）和predispensedSmartChip基因分型panel（PD）在SmartChip实时定量PCR系统中实验结果没有显著差异，用两个有代表性的SNPassays检测五个完全独立的SmartChip实时定量PCR，每个系统中得到的数据都在SmartChipQPCR软件里分析，很容易做到多12SmartChipcycler技术参数位点的研究。(B)SmartChipMyDesign芯片（MD）和predispensedSmartChip基因表达panel（PD）在SmartChip实时定量PCR系统中实验结果没有显著差异，用两个有代表性的基因ARHGBIB和CCL2检测五个完全独立的SmartChip实时定量PCR，在多个系统以及多个使用者中所获得Ct值的一致性确保了SmartChip实时定量PCR系统在多位点研究中的广泛应用。反应反应数：5184孔/反应反应体积：100nL/孔精确度对照模板5000~10000个拷贝的标准差0.2Ct滤镜(中心宽度，nm)激发光发射光FAM™(475/35)FAM™(520/15)VIC®(520/15)VIC®(565/24)ROX™(543/22)ROX™(676/29)SYBR™(475/42)SYBR™(550/50)照相机冷却式CCD镜头，9.3万像素照明250瓦石英卤钨灯，额定1000小时热循环升降温速度：65~95℃20秒，95~65℃15秒运行40个循环需平均2小时溶解曲线用户可自行设置（范围：0.5~2℃每秒，推荐0.5℃每秒）热均匀性:76℃时±0.5℃电源要求100-120VAC/200-240VAC±10％，8.0/4.0A在47-63赫兹;两个出口（循环仪，CPU+监控器）气体要求清洁干燥的气体（建议露点温度-40℃）调节至6.9~8.3BAR（100~120PSI）稳压器输出：外径4毫米聚氨酯管，或M5或1/8NPT母口（其他螺纹形式咨询请WaferGen）环境条件环境温度15-30°C，相对湿度10%~70%，非凝结，2000米海拔，污染指数2尺寸热循环仪：长70厘米，高50厘米，宽60厘米CPU，显示器，键盘，鼠标：长60厘米，高50厘米，宽50厘米重量热循环仪：75kgCPU和监视器：12kg最大样本数384加样体积100nL/孔电源要求100-120VAC/200-240VAC，8/4A在60/50赫兹;四个出口（多样品移液器，冷却器，泵控制盒，电脑）环境条件环境温度15-30°C，相对湿度10%~70%，非凝结尺寸流体模块：长28厘米，高33厘米，宽45厘米泵控制盒：长26厘米，高38厘米，宽51厘米移液模块：长26厘米，高40厘米，宽60厘米冷却系统：长13厘米，高18厘米，宽20.5厘米控制电脑：长35厘米，高30厘米，宽27厘米重量多样品加样器：65kgCPU:2.7kg点样精度λDNA，CTSD0.2点样速度48个样品10分钟，384个样品60分钟SmartChipMultisampleNanodispenser技术参数