岛津LC操作步骤

标准操作规程岛津LC-10ATvp色谱工作站操作规程登记号HD-WS-03-590-00共8页编制者/日期生效日期审核者/日期回顾日期批准者/日期颁发部门GMP认证小组变更记录修订号：批准日期：执行日期：变更原因重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司ChongqingHuadingModernBiologicalPharmaceuticalCo.,LTDCopyNO.分发部门财务部[]审计部[]行政部[]营销部[]物料管理部[]质量管理部[√]设备动力部[]生产技术部[]水针剂车间[]原料药车间[]固体制剂车间[]重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司HD-WS-03-590-008-11目的：制定岛津LC-10Atvp色谱工作站操作规程，确保操作人员正确使用色谱仪。2适用范围：适用于岛津LC-10Atvp色谱工作站操作。3责任者：岛津LC-10Atvp色谱工作站操作者。4正文：4.1仪器组成及开机4.1.1仪器组成LC-10Atvp泵、SIL-10Advp自动进样器、SCL-10Avp系统控制器、CTO-10Avp柱箱控制箱、SPD-10AvpUV-VIS紫外-可见检测器、CLASS-VP（Ver.6.12）LC工作站、EPSONStylusC41打印机，各仪器均有独立电源开关。4.1.2开机依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器、打印机、系统控制器、工作站的电源开关。4.2工作站启动及仪器配置4.2.1工作站启动电脑自检后，在Windows98开始菜单下，双击CLASS-VP窗口，显示ShimadzuaCLASS-VP主菜单，双击Instrument1,显示仪器注册对话框，输入用户名及密码，然后Login,进入仪器模式窗口，将会有“滴”的一声，表示工作站已经通过系统控制器与各组成仪器连接。4.2.2仪器配置4.2.2.1选择FileConfigure,显示InstrumentConfiguration(仪器配置)对话框，输入instrumentname及instrumenttype,然后单击Configure,显示一个ShimadzuHPLCsystemConfiguration(系统配置)对话框。4.2.2.2在ShimadzuHPLCsystemConfiguration(系统配置)对话框中双击左框中要选择的仪器图标或单击该图标后，再单击顶端绿色箭头，将它移到右边的Configuremodules(设置模式)框中。4.2.2.3对于每个设置的模式，双击响应图标并完成配置对话框。4.2.2.4单击OK，退出Instrument1至Class-vp主菜单，再重新进入Instrument1，使设定的仪器系统生效。重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司HD-WS-03-590-008-24.3仪器参数的设定和启动4.3.1泵和柱温箱的参数设置4.3.1.1选择MethodInstrumentsetup,显示仪器设置对话框。4.3.1.2单击对话框Pumps,在mode下拉菜单中选择流速方式，包括：Isocratic(等度)、Binarygradient(梯度洗脱)、LowPressureGradient(低压梯度)三种方式；此外需设置最大压力、最小压力、流速。设定完毕，单击Apply确认。4.3.1.3单击对话框TimeProgram,设定时间程序。4.3.1.4单击对话框CTO-Avp柱温控制，设定柱温。4.3.1.5单击Apply，确认以上设定。退出。4.3.2检测器参数设定4.3.2.1选择MethodPDAsetup，显示其对话框。4.3.2.2单击对话框中的General标签，设置数据收集参数，包括波长范围，灯的类型，采样频率，周期，采样时间以及图谱存储方式。其中图谱存储方式有3D和MultiChromatogram两种方式，一般情况选择多波长方式，以便减少文件占有的存储空间。单击Apply确认。4.3.2.3单击Multi标签，设置检测波长。首先单击通道号右边的Active方框，（出现红色标记），然后为每个通道输入检测波长，宽度。利用此项可以根据需要进行单波长或多波长的测定。4.3.2.4单击Apply,确认以上设定，退出。4.3.2.5系统设定完毕后，为使系统按设定条件运行，单击controldownloadmethod装载设定的方法后再击活系统，此时，在提示是否保存当前方法的对话框中选择Yes。4.3.2.6方法设定完毕后，应在File-Method-SaveAs中存储方法。4.3.3启动各仪器4.3.3.1选择ControlDirectcontrol,屏幕显示一排直接控制工具栏图标按钮。4.3.3.2按下工具栏图标中的控制器图标按钮、灯图标按钮，即可开启泵、检测器和柱温控制箱。重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司HD-WS-03-590-008-3注：开泵前需更换流动相：打开旁路阀，用针管抽出约20ml流动相，或者按下泵控制面板上的purge键，自动冲洗泵，冲洗完毕，关上旁路阀。（若使用自动进样器，每日工作前也应打开进样器内部右下角的帝路阀，用注射器抽出10ml清洗液，再旋紧旁路阀。）4.4采集数据4.4.1选择Control-PreviewRun，观察基线，等待基线走稳。4.4.2基线走稳后，选择Control-SingleRun显示SingliRunAcquisition对话框，在对话框中设置Datepath,Datefile,Vial,Injectionvolumn,然后单Start,开始自动单一进样。4.4.3选择ViewGallery观察即时色谱图，视图的显示方式有：三维图、混合视图、混合视图W/3D、等高线图、三维和等高线图、光谱图、多色谱图示、比例图。4.4.4使用Control菜单中的ExtendRun或StopRun来调整采样时间，使各组分峰采集完整。4.4.5根据完整采样所需的时间，打开MethodPDASetUp,修改runtime.4.5积分参数的设定4.5.1在色谱图上单击鼠标左键，激活屏幕下方的积分参数工具栏图标按钮。4.5.1.1按下要设定的积分参数图标按钮，然后按照状态栏的提示进行对话框的操作，设定积分参数并自动添加入IntegrationEventstablets。积分参数使用的对话框基本形式（图3）Start/Stoptime与予设值有同时，输入积分参数的的开始和结束时间Value与予设值不同时，输入积分参数的值。InsertintointegrationEventstable选择此项可向积分参数表中添加参数。单击AddtoTable，将积分参数添加入积分参数表中。4.5.1.2积分参数包括Width(宽度)、Slope（斜率）、Drift(漂移)、T.DBL（极限）、LockOn/Off(积分关闭)、TaillingOn/Off（拖尾峰切除）、HorizontalBaseline(水平基线)、Leadingpeakrejecton/off(前沿峰切除)、Minimum重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司HD-WS-03-590-008-4Area(最小峰面积)、NegativePeakrejectOn/Off（负峰切除）、NegativePeakinvertOn/Off(负峰转换)等。注意：在添加积分参数的时候，要保持窗口的检测波长选择通道处于正在使用的检测波长，否则积分参数的添加无法在积分参数表中看到。4.5.2打开MethodIntergrationEvents菜单查看积分参数表。4.5.3选择Anlysis-Analyze用所设定的积分参数对该色变图进行分析，根据要求适当调整积分参数，直至分析结果达到要求。4.6peak/GroupTables(峰表)的设定4.6.1在色谱图上单击鼠标左键，激活积分事件工具栏图标按钮，近下工具栏中的DefinePeak图标按钮，然后按状态栏的提示进行对话框的操作，将需要测不定期的峰的保留时间及保留时间窗口自动添加至峰表中。4.6.2选择Method-Peak/GroupTable图标按打开峰表。4.6.3在峰表中输入要校准的信息，其中ID、Ret、Window已经自动添加，其他需输入的内容包括：Name峰代表的各组分名称ISTDID#内标法内标峰的ID号Units报告结果的浓度单位AnalysisChannel选择使用的检测通道FitType选择标准曲线的类型，包括pointtopoint(点到点)、quadratic（二次的）、cubic（三次的）、AverageRF（平均RF）几种方式Zero选择此框后，强制校准曲线通过零点CalibFlag选择WeightAverageLevel1-10输入每份取样的各组分以及内标物质的量如果需要添加或修改其他信息或参考说明书。4.6.4退出4.7编制模式4.7.1选择MethldCoustomReport打开编制报告窗口。重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司HD-WS-03-590-008-54.7.2选择FileReportTempletOpen打开Classvp目录，其中列有多种标准报告模式，包括EsternalStandard.Srp(外标法)、InternalStandard.Srp(外标法)、Normalization.Srp(峰面积归一化法)等，选择需要的模式，单击Open,即显示所选Methodcustomreport的空白格式。4.7.2.1色谱图报告的设置4.7.2.1.1在空白格式图的位置双击鼠标左键，打开Datagraphproperties(图形性质)对话框，按下tracesetup(曲线设置)标签设定以下几项：show和lgnd单击复选框以确认图例的显示Datasource单击兰色按钮输入“currentdata”Trace在下拉菜单中选择当前所用的检测通道Scaleto利用下拉菜单，选择一个缩放的选项，包括atuoscaletolargestPeak、Atuoscaleto2nd3rdlargest[Peak、UserDefined、NormalizedYmin.Ymax在Userdefined情况下手动输入Annotation单击兰色按钮，打开TraceAnnotationproperties复选框，在左框AvailatbleAnnotations下双击想显示的条款或单击此条款后再单击顶端的绿色箭头，将其移到Showthefollowingannotations框下。4.7.2.1.2完成标签对话后，单击OK，则把所选的曲线加入到报告中当前的曲线窗口。4.7.2.2表格的报告设置4.7.2.2.1将光标移到空白格式的表格位置，然后在表格上单击鼠标右键，显示弹出菜单。4.7.2.2.2单击ReportProperties显示RunReport对话框添加此对话框。（1）DataSource编组框选择CurrentData或单击文件图标显示OpenData文件对话框，选择一个数据文件。（2）Report编组框重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司HD-WS-03-590-008-6NamePeaks选择All或DetectedonlyUnnamedPeaks报告未命名的峰Groups报告组峰Totals报告全部的数字栏的数据统计（3）AvailableParameters编组框双击需要报告的参数或单击后按绿色箭头将参数移到“ReportThefollowingParameters”表中。4.7.2.2.3单击OK，退出4.7.2.2.4选择弹出菜单“ShowDataAtDesignTime”察看报告数据。4.8选择FileMethodSave。整个方法设定完毕并保存。注：为了使每次测定所用的方法互不影响并完整保存，可以在仪器开启后选择FileMethodNew创建一个新的方法，此方法会暂时以untitled.met的名称储存，待各方法参数设定完毕后，再选择FileMethodSaveas输入一个方法名，Save,然后再打开此方法，即可使用