甾体激素类

甾体激素类药物的分析概述激素（Hormone，荷尔蒙）----是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。基本结构：环戊烷并多氢菲概述ABCD1234567891011121314151617甾体激素类药物的母核是由A、B、C、D四个环组成的。环上碳原子编号：1－17。D环：环戊烷结构A、B、C环：全氢化菲（菲烷)菲所以甾体激素类药物的母核叫环戊烷并多氢菲。三个六元环+一个五元环分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素盐皮质激素糖皮质激素风湿病学家PhilipHench致力于风湿性关节炎的治疗，他在1930年发现得黄疸或怀孕的病人，其风湿病情就会减轻。于是他就猜测关节炎不大可能是感染引起的疾病，而可能与内分泌有关，相应的治疗药物也应当是人体自身分泌的物质。他与同事Reichstein和EdwardKendall一起，研究肾皮质激素并分离了可的松。不过由于纯度不高而无法体现出疗效。最后，默克公司参与进来，默克公司的资深化学家LewisSarett通过36步全合成反应，打通了可的松的合成工艺。在1948-1949年左右，Hench得到了纯度较高的可的松并进行临床试验，临床效果非常喜人。由于发现用激素来治疗风湿性关节炎的方法，整个科学界为之震动。1950年，三人一起获得了诺贝尔医学奖。其颁奖速度可与胰岛素相媲美。虽然可的松的副作用太大，而无法在临床推广，但用激素治疗免疫性疾病的疗法却从此广泛应用，氢化可的松等相关衍生物也迅速被推向市场。少一个C这是苯环•环上双键的表示方法：•用“”表示,双键的位置写在的右上角。双键位置45414251,45651055(10)•环上取代基构型表示方法：＊构型：•与母核连接的取代基,指向环平面的前面时,为构型.用实线表示“———”＊构型：•与母核连接的取代基,指向环平面的背面时,为构型.用虚线表示“”OHOOHOHFHOCH3OHCH3肾上腺皮质激素氢化可的松醋酸地塞米松1.均有21个碳原子2.A环△4-3-酮基,UV、与羰基试剂反应3.C17位上有a-醇酮基,具还原性一、结构与性质OHOOHOCH2OHHHH1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–α–醇酮基还原性常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他米松等。OOHHHHO雄性激素及蛋白同化激素睾酮苯丙酸诺龙1.雄性激素母核有19个碳原子,蛋白同化激素C10位上一般无角甲基,母核有18个碳原子2.A环△4-3-酮基3.C17位上有β-羟基,或由它们形成的酯OOHHHHOCH3酯化吸收减慢，作用时间长。雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–β–羟基可成酯孕激素黄体酮1.母核有21个碳原子2.A环△4-3-酮基3.C17位上有甲酮基COHHHCH3O孕激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–甲酮基与亚硝基铁氰化钠反应雌性激素炔雌醇1.母核有18个碳原子,C10无角甲基2.A环为苯环,C3位上有酚羟基3.C17位上有β-羟基OHHO1718OHHOCCH雌二醇雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯•小结甾体激素碳原子数A环17位取代基肾上腺皮质激素214-3-酮-醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯环C3-酚OH-OH-C≡CH二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素药物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）显色荧光加水稀释泼尼松龙深红絮状↓灰泼尼松橙黄→蓝绿炔雌醚橙红黄绿↓红色炔雌醇橙红黄绿絮状↓玫红醋酸可的松黄或微带橙褪色并澄清2.官能团的呈色反应甾酮激素类药物呈色羰基试剂（1）C3–酮基和C20–酮基常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼异烟腙（黄色）睾酮肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OHˉ（2）C17–α–醇酮基具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化纳间二硝基酚、芳香醛（3）甲酮基黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色不显色黄体酮OH蓝紫色]NOCNFe[OH有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ（4）有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸-硝酸银AgCl↓呈蓝紫色肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性酒石酸铜2.沉淀反应（斐林试剂）含炔基的甾体激素白色的银盐沉淀硝酸银2）.与硝酸银的沉淀反应↓1）.与菲林试剂的沉淀反应3）、与氨制硝酸银试液的反应银（Ⅰ）在碱性条件下可被还原物质还原为黑色的金属银沉淀。如：中国药典鉴别醋酸去氧皮质酮OC=OCH2OCOCH3＋2Ag+2OH+-NH3+2Ag+CH3COOH黑色OC=OCH2OCOCH3OC=OCHOHOH4）.与硝酸-硝酸银的沉淀反应含有氯取代的甾体激素类药物。3制备衍生物测定m.p.（2）缩氨基脲的生成如苯丙酸诺龙（甾酮）+盐酸氨基脲苯丙酸诺龙缩氨脲熔点为178-185°C-H2O苯甲酸酯炔雌醇苯甲酰氯KOH℃~.p.m（1）酯的生成（4）.酯的水解丙酸睾酮醇制的氢氧化钾游离睾酮熔点为150～156°C（3）.肟的生成羰基与羟胺生成肟，测熔点黄体酮双酮肟黄体酮盐酸羟胺△℃240235..pm4.水解产物的反应戊酸戊酸雌二醇醇制NaOHH特臭△４-3-酮约240nm苯环约280nmOCCCCCCCCC5.UV法规定最大吸收波长最大吸收波长处的吸收度某两个吸收波长处吸收度的比值CHν3300～3000cm-1HC3000～2700cm-1OCν1900～1650cm-1CC1650～1450cm-11000～650cm-1CH6.IR法3750～3300cm-1νOH7.TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。炔诺酮TLC图8.HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。0.000.050.100.150.200.250.300.350.400.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00AUMinutesUracilEthylparabenPropylparaben（1）游离磷酸盐地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法二、特殊杂质检查磷酸酯化时残存的过量磷酸盐采用钼蓝比色法检查原理：　对照液供试液对样还原钼酸铵AAnm方法：OnHMoOPHPOHPOMoOH还原钼蓝（对照液0.035mg/mlKH2PO4）供试品中游离磷酸盐按磷酸计算的限量：POKHPOH%.%..L%.检查游离磷酸地塞米松磷酸钠精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。（2）甲醇和丙酮（残留溶剂）（灵敏度法）甲醇不得出峰检测限=3.1ng丙酮≤5.0%内标法+校正因子GC法（3）雌酮原理Zimmermann反应紫红色间二硝基苯碱性KOH乙醇OCCH2高纯度（4）硒的检查来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢有毒方法二氨基萘比色法测定nmA环己烷苯并苯硒二唑二氨基萘,Se,..pHSeSe盐酸羟胺氧瓶燃烧5.其他甾体甾体激素类药物多由其它甾体化合物或结构类似的其它甾体激素经结构改造而来，所以可能带来原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂等杂质。有些杂质与该甾体激素药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，“其他甾体”的限度检查显得很重要。1、定义：与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”2来源：原料、中间体、异构体、降解产物3、特点：（1）可能存在多个甾体杂质（2）结构类似检查方法：TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）（1）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色特点：（1）简便易行，不需特殊的仪器；（2）不需对照品；（3）只能控制单个杂质的限量；（4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。（2）HPLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积特点：（1）需特殊的仪器；（2）不需对照品；（3）可以控制杂质的总量；肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基（1）原理1.四氮唑比色法有色甲臜四氮唑盐醇酮基COH-[还原]还原性CNNNNH三苯甲瓒↓深红CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）nm~max490480e2OHCl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3蓝四氮唑（BT）OHe4nmmax525双甲瓒（暗蓝）醛基酮甾基甲酸衍生物醇酮基e[O]羧酸衍生物羟基OH-分子重排醋酸泼尼松龙软膏含量测定对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。供试液：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水乙醇约30ml，置水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法：精密量取上述溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃暗处放置40～50分钟，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。操作应避光。（4）影响因素1.结构的影响C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯2.溶剂、水分的影响含水量大时使呈色速度减慢，当含水量不超过5%时，对结果几无影响。故以无醛乙醇为溶剂。4、碱的种类及加入顺序：以氢氧化四甲基铵的结果最佳，加入顺序：碱试液四氮唑盐皮质激素溶液3.温度与时间：25℃暗处反应40-45min。5.O2与光线的影响：避光，隔绝空气or充N26.干扰物的影响：测定油膏、冷霜等制剂应先分离后测定肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基（1）原理异烟腙（黄）酮基异烟肼CHCl（缩合）1.异烟肼比色法（三）比色法对照品法℃异烟肼挥去乙醇对照液供试液ACHCl暗45min（3）讨论A.反应专属性：具有△4–3–酮基的甾体激素在室温不到1h即可定量的与异烟肼反应，本法对△4–3–酮基具有一定的专属性。C3-酮基＞C20-酮基、C17-酮基C11-酮基不反应B.溶剂的选择异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇C.水分、温度、O2与光线的影响含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓溶剂不挥发、不吸收水分时→O2与光线无影响D.酸的种类和浓度酸与异烟肼摩尔比2：1可获得最大吸收值异烟肼0.00365mol/LHCl0.0074mol/LH2SO40.0037mol/L醋酸4.4mol/L（1）原理λmax=465λmax=515雌激素3.Kober反应比色法△△桃红黄色雌激素OH乙醇SO