ANA实验室检测策略与临床意义

EUROIMMUN抗核抗体（ANA）检测与临床应用EUROIMMUN传统定义：针对细胞核成分的自身抗体的总称。广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称ANA的靶抗原分布：细胞核整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。ENA：抗可提取核抗原，包括RNP/Sm,Sm,SSA,SSB,Scl-70和Jo-1等六种靶抗原抗核抗体的定义EUROIMMUNANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标在非结缔组织病中也可出现阳性。正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。ANA检测的临床意义EUROIMMUN美国风湿学会(ACR)立场声明•HEp-2细胞包含大约100至150种自身抗原•其它初筛方法仅具有少量自身抗原(8-10)…大约35%SLE患者和IFT-ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果…建议：•IFT-ANA仍然为ANA检测的金标准!•医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它ANA检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性.•实验室在ANA报告当中必须注明ANA检测方法.EUROIMMUNEUROIMMUNANA筛查:间接免疫荧光法(IFT)抗原谱完整(细胞核、细胞浆)检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性基质组合:HEp-2细胞+灵长类肝EUROIMMUNHEp-2:筛查不同的自身抗体ANAhomogenNucleardotsCentromereANAnucleolarScl-70Sm/RNPSS-A/SS-BNuclearmemb.RibosomesMitochondriaGolgiapparat.LysosomesActinVimentinEUROIMMUN慢性炎症性结缔组织病(CICTD)慢性炎症性结缔组织病(CICTD)SystemischerLupusErythematodes(SLE)干燥综合征(SS)系统性硬化症(SSc)RheumatoideArthritis(RA)多肌炎/皮肌炎(PM/DM)夏普综合征(MCTD)系统性红斑狼疮(SLE)ANCA相关性血管炎dsDNAScl70andCenpBMyositisProfileSSAandSSBRNPEUROIMMUN慢性炎症性结缔组织病(CICTD)慢性炎症性结缔组织病(CICTD)SystemischerLupusErythematodes(SLE)干燥综合征(SS)系统性硬化症(SSc)RheumatoideArthritis(RA)多肌炎/皮肌炎(PM/DM)夏普综合征(MCTD)系统性红斑狼疮(SLE)ANCA相关性血管炎dsDNAScl70andCenpBMyositisProfileSSAandSSBRNPEUROIMMUN系统性红斑狼疮(SLE)红斑狼疮的特点临床大夫:容易误诊的一类致死性疾病免疫学家:所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程临床发病特点发病率:40/100,000(北欧);200/100,000(黑人);250,000(美国)患者寿命:4年/50%(1950);15/80%(当前);20岁诊断/35岁死亡几率1:6EUROIMMUNSLE–各器官的表现关节炎(至少2个关节以上受累;96%)皮肤(蝴蝶状皮疹,盘状狼疮;74%)血液系统受累(贫血等;60%)狼疮肾炎(51%)浆膜炎(胸膜炎,心包炎;77%)神经系统受累(30%)EUROIMMUN系统性红斑狼疮(SLE)CharacteristicAntibodiesdsDNA30-90%Nucleosomes50-95%Sm5-10%RibosomalP-Proteins5-15%EUROIMMUN核均质型HEp-2-Cells/PrimateliverEUROIMMUNEUROIMMUN-检测方法:IIFT,Farr-法(RIA),ELISAorBlot抗dsDNA自身抗体IIFTdsDNAHEp-2Crith.luciliaeEUROIMMUN高度特异性抗体;70%患者阳性，0.5%正常人或RA患者阳性滴度与疾病活动性相关，但不适用于所有患者抗体滴度上升但临床症状不明显的患者，抗体检测后5年内80%患者进入活动期抗dsDNA抗体与SLEEUROIMMUN最新版“Autoantibodies”描述不同实验方法的结果并无可比性：1、抗原来源不同；2、抗原展现形式不同；3、实验体系反应条件不同。EUROIMMUN核均质:抗核小体抗体(ANuA)靶抗原:dsDNA-组蛋白-复合物的构象决定簇方法:IIFAELISA,Blot临床意义:SLE,阳性率50-95%(100%specific)EUROIMMUN抗核小体ELISA:敏感性、特异性、疾病活动度ANuA与疾病的活动性相关性强(SLEDAIscore)分组n抗核小体阳性SLE233144(61.8%)干燥综合症411(2.4%)皮肌炎/多肌炎401(2.5%)系统性硬化症331(3.0%)类风湿/骨关节炎601(1.7%)强直性脊柱炎200健康对照组310特异性22598.2%Suetal.,ClinImmunol122:115-120,2007EUROIMMUNANuA与狼疮性肾炎LNTP(%)LN(%)CON(%)ANuA79189Anti-dsDNA434133LNTP=lupusnephritisrequiringrenaltransplantationLN=biopsyprovenlupusnephritisCON=SLEpatientswithoutnephritis•狼疮肾炎是SLE的一种潜在的严重并发症(高达50%)•~1.2%需要进行肾移植的患者有狼疮肾炎伴有狼疮肾炎的严重SLE的生物标记物Stintonetal.,Lupus15:394-400,2007EUROIMMUN抗U1-nRNP与Sm抗体EUROIMMUN抗U1-nRNP与Sm抗体HEp-2Anti-U1-nRNP/SmAnti-SmSLEAnti-U1-nRNPSLESharp-Syndrom(MCTD)EUROIMMUN抗U1-nRNP与Sm抗体AntiU1-RNPAnti-SmSLE:5-30%SLE:15-40%MCTD:95-100%Function:Pre-mRNAsplicingEUROIMMUNEUROLINEANA谱最多18种抗原，增加了RNP亚单位自动化操作全自动化结果判读EUROIMMUN实验结果的解释（ANA谱）：抗nRNP/Sm和Sm抗体抗nRNP/Sm抗体抗Sm抗体结果解释--nRNP:-Sm:-阴性++nRNP:?Sm:+SLE+-nRNP:+Sm:-SLE或MCTD-+结果不可靠无EUROIMMUN抗核糖体P蛋白抗体EUROIMMUN40Ssubunit60SsubunitP0P1P1P2P2accordingto:Mahleretal.,JMolMed,2003抗原:核糖体60S亚单位的3个蛋白：P0,P1,P2.在羧基末端有相同的免疫反应表位。核糖体P抗原的五聚体复合物。核糖体P蛋白EUROIMMUN核糖体P蛋白ELISA:敏感性和特异性(1)CohortnAnti-ribPpositiveSLE36034(9.4%)Othercollagenoses*790%Healthyblooddonors2060%*systemicsclerosis,Sjögren‘ssyndrome,dermato-/polymyositis对SLE100%特异EUROIMMUN核糖体P蛋白ELISA:敏感性和特异性(2)CohortnAnti-ribPpositiveSLE18510(5.4%)MCTD210SS550SSc660RA890HD1000Specificity310100%EUROIMMUN增殖型细胞核抗原(PCNA)EUROIMMUNEUROIMMUN增殖型细胞核抗原(PCNA)靶抗原:表达为细胞周期依赖性(S-期)三聚体(36kDa)，是DNA多聚酶的辅因子并参与DNA修复调控检测:IIFT,Blot临床意义:SLE高特异性(阳性率3-7%),与肾脏和CNS及血小板减少相关EUROIMMUN慢性炎症性结缔组织病(CICTD)慢性炎症性结缔组织病(CICTD)SystemischerLupusErythematodes(SLE)干燥综合症(SS)系统性硬化症(SSc)RheumatoideArthritis(RA)多肌炎/皮肌炎(PM/DM)夏普综合症(MCTD)系统性红斑狼疮(SLE)ANCA相关性血管炎dsDNAScl70andCenpBMyositisProfileSSAandSSBRNPEUROIMMUN干燥综合征（Sjögren‘sSyndrome）外分泌腺受累的自身免疫疾病症状:-口腔干燥-唾液及眼泪减少-腮腺肿胀-胰腺外分泌腺分泌不足口腔干燥腮腺肿胀EUROIMMUN干燥综合征CharacteristicAntibodiesSS-A(60kDa)40-95%SS-B(47kDa)40-95%EUROIMMUN抗SSA/SSB抗体EUROIMMUNSS-AAntigenBoireetal.,1995:-Ro-52抗体不与SS-A抗原结合-纯化的SS-A抗原不包含Ro-52RNA+SS-A(60kDa)+Ro-52hY-RNARNA+SS-A(60kDa)hY-RNAEUROIMMUNSS-A(Ro-60),Ro-52andSS-BAnti-SS-A(60kDa)SjögrenSyndr.:40-95%SLE:20-60%neonatalLE:96%Anti-SS-BSjögrenSyndr.:40-95%SLE:10-20%neonatalLE:78%Anti-Ro-52(52kDa)非特异功能:调控RNA翻译功能:RNA聚合酶III辅助蛋白XEUROIMMUNAnti-Ro52:不同组别中均可出现EUROIMMUNAnti-Ro52:风湿性疾病中的阳性率疾病nAnti-Ro-52positive干燥综合症8881%系统性硬化症8128%肌炎2631%SLE21038%MCTD2119%RA1655%Anti-Ro52在干燥综合症中阳性率较高，但没有疾病特异性Meyer,Schlumbergeretal.,4thAsianCongressonAutoimmunity,Singapore,Sept.2009EUROIMMUNAnti-Ro52:肝脏疾病中的阳性率疾病nAnti-Ro-52positivePBC10027%AIH6035%HBV5010%HCV5022%Blooddonors500Anti-Ro52没有疾病特异性Meyer,Schlumbergeretal.,4thAsianCongressonAutoimmunity,Singapore,Sept.2009EUROIMMUN抗SS-A(60kDa)和抗Ro-52总是分开检测!EUROLINEANAProfile3EUROIMMUN-天然SS-A=RNA+SS-A60kDa蛋白质-SS-A60和Ro-52抗原的混合包被会降低SSA抗体的疾病特异性-欧蒙产品始终分别检测SS-A60和Ro-52!结论EUROLINEANAProfile3EUROIMMUN慢性炎症性结缔组织病(CICTD)慢性炎症性结缔组织病(CICTD)SystemischerLupusErythematodes(SLE)干燥综合症(SS)系统性硬化症(SSc)RheumatoideArthritis(RA)多肌炎/皮肌炎(PM/DM)夏普综合症(MCTD)系统性红斑狼疮(SLE)ANCA相关性血管炎dsDNAS