PCR自测题

PCR自测题一、名词解释1.PCR2.变性3.退火4.延伸5.逆转录PCR6.停滞效应7.共享引物PCR8.多重PCR9.反向PCR10.原位PCR11.LCR二、单项选择题1．PCR反应中，所设计引物的长度一般为（）A．5～10核苷酸B.15～30核苷酸C.50个核苷酸D.长度任意E.以上答案均不对2．引物设计时G＋C含量在引物中一般占（c）A.20～40﹪B.30～60﹪C.45～55﹪D.越高越好E.含量随意3．以下说法错误的是（e）A引物中的碱基组成应该尽可能的随机分布。B引物自身不应该存在互补序列C设计引物时应考虑使3‘端引物和5‘端引物具有相似的Tm值D引物的5‘和3’端必须和模板严格配对结合E引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70﹪4．下列说法正确的是（）C.PCR反应常用的缓冲液为10－50mmol/L的Tris-HCl（室温PH8.3－8.8）D.10mmol/L的KCl能促进引物的退火E.加入的BSA有利于破坏模板的二级结构F.二甲基亚砜有利于保护TaqDNA酶的活性。E.Mg2+能降低TaqDNA聚合酶的活性。5.TaqDNA聚合酶活性需要以下哪种离子（c）A．K+B.Na+C.Mg2+D.Ca2+E.Cl-6．适用于DNA序列中单个碱基突变的检测的方法是：(d)A．筑巢PCRB.多重PCRC.锚定PCRD.LCR7．以下哪种PCR技术广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究（a）A．原位PCRB．差异显示PCRC．不对称PCRD．反向PCR8.已知一段设计好的引物的序列为GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC,其Tm值为（）A.78B.80C.82D.84E.无法计算9．以下哪种PCR技术可以克服序列未能全知的障碍而获取目的扩增片段（c）A.共享引物PCRB不对称PCRC锚定PCRD.筑巢PCR10．一位疑似杜氏肌营养不良症的患者，可以采用以下哪种方法协助诊断（）A.原位PCRB.多重PCRC.不对称PCR.D.锚定PCR11．以下关于dNTP的说法错误的是（e）B.dNTP具有较强的酸性，使用时应将pH调至7.0-7.5C.PCR反应中，四种dNTP必须按比例配制，以减少反应的错配率。D.dNTP的浓度过高会增加碱基的错配率E.dNTP的浓度低，反应速度下降，但特异性提高12.TaqDNA聚合酶可以不要模板在dsDNA的末端加上一个()碱基.A.dGTPB.dCTPC.dATPD.dTTP13.有关PCR的描述哪个不对(d)A.是一种酶促反应B.引物决定扩增的特异性C.扩增的对象是DNA序列A)D.扩增的对象是氨基酸序列14.催化PCR的酶是(c)A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶C.TaqDNA聚合酶D.反转录酶15.PCR产物具有特异性是因为(c)A.TaqDNA酶保证了产物的特异性B.合适的变性,退火,延伸温度C.选择特异性的引物D.引物的Tm值不同.16．LCR的说法正确的是()A.体系中采用DNA聚合酶B.须设计一对引物C.反应需经过变性,复性,连接D.LCR中,酶将dNTP加到引物的3-OH端E.LCR具有高度敏感性三、多项选择题1．下列关于退火温度说法正确的是（）A.合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右。B.引物与模板的退火温度一般在45－55℃之间C.在Tm值允许的范围内，选择偏低的退火温度可以提高PCR反应的特异性。D.退火时间至少需要一分钟。2．进行PCR实验时以下措施有助于防止污染和结果的假阳性（）B隔离不同的操作区C分装试剂，减少重复取样所致的污染D严格实验操作E设立实验对照3．适用于扩增3‘或5‘端未知序列的PCR技术是（）A．反向PCRB.锚定PCRC.多重PCRD.不对称PCR4．以下关于PCR技术应用说法正确的是（）B筑巢PCR和共享引物PCR有利于增强PCR反应的特异性，适用于模板含量极少的样品的检测C不对称PCR可以大量制备单链DNA，可用于DNA的序列测定D彩色PCR适用于基因诊断和自动化DNA序列测定E定量PCR可用于基因表达和调控的研究F差异显示PCR可用于筛选和克隆受发育，突变等各种因素影响下差异表达的基因5.关于引物设计说法正确的是（）B为保证PCR反应的特异性，所设计的引物长度一般30个核苷酸C引物设计时G＋C含量在引物中一般为45～55﹪D按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基E两个引物之间不应存在互补序列，尤其避免3‘端的互补重叠F引物的3‘端可以游离而不影响PCR反应的进行6.以下关于PCR的说法正确的是（）APCR的模板可以是DNA也可以是RNABPCR的模板必须从组织细胞中分离出来CPCR反应的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。DPCR反应初期，目的DNA片断的增加呈指数扩增。EPCR反应一般需要含102－105拷贝的模板7．以下关于PCR反应条件错误的是（）BPCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板的二级结构，提高反应的特异性。CMg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。D4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。E引物浓度一般为0.5-1umol/L8.PCR反应时应设立哪种对照（）A.阴性对照B.阳性对照C.试剂对照D.以上答案都正确9.逆转录反应体系包括（）B.RNA模板，四种dNTPC.RNA酶抑制剂D.合适的缓冲液体系E.逆转录酶F.寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物10.有关PCR的模板说法正确的是()A.模板可以是DNA也可以是RNAB.大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高C.模板用量低D.标本处理的基本要求是除去杂质11.以下有关RT-PCR反应的说法你认为正确的有()A.反应体系一般有20μlB.反应体系中有缓冲液,四种dNTP,MgCl2,DTT,牛血清白蛋白,Oligo(dT)引物RNA模板和逆转录酶C.逆转录于42℃进行,随后即进行PCRD.RT-PCR的最终反应过程依然是以DNA为模板的PCR反应12.PCR的产物累积的特征是()B.反应初期,目的DNA片断呈指数扩增C.PCR进行到一定时间出现反应中的停滞效应D.到达平台期的的PCR循环数取决于反应体系中酶的耗竭程度E.PCR平台期的出现多数不可避免F.到达平台期时若扩增目的DNA片断不足,可继续加入模板,酶和缓冲液进行PCR反应13.有关Mg2+在PCR中的作用说法不正确的是()A.TaqDNA酶的活性维持需要Mg2+B.TaqDNA酶的活性与反应体系中的Mg2+总浓度有关C.Mg2+过低,酶催化非特异性扩增增加D.Mg2+过高会降低酶的活性E.总量应低于dNTP的量,常用1.5mmol/L14.PCR中使用的底物dNTP应该是()A.使用前应将pH值调至7.0-7.5B.dNTP浓度高可以加快反应速度,但却增加了出错率C.降低反应速度可以提高反应特异性D.PCR中,4种dNTP必须按一定比例配制E.Mg2+会与dNTP结合,应注意二者浓度之间的关系15.TaqDNA酶的特点是()A.75-80℃时具有最高的聚合酶活性B.活性的维持需要Mg2+的参与C.TaqDNA酶和klenow片断一样具有校正功能D.TaqDNA酶的忠实性很高E.具有类似末端转移酶的活性16.有关引物的说法正确的是()A.引物浓度一般为0.1-1.5μmol/LB.引物与模板的的比至少为108:1C.引物浓度过高会引起错配和非特异扩增,降低扩增效率D.引物Tm值位于55-80℃较理想17.PCR反应温度应该是()A.为使DNA变性完全,变性温度越高,时间越长越好B.按模板DNA的复杂程度来调整变性温度和变性时间C.于反应管中加入1-2d石蜡油防止反应液的蒸发D.温度越高时间越长,dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响18.有关退火温度正确的是()A.引物与模板退火温度一般在45-55℃B.退火温度过低,使非特异扩增增加C.退火温度过高,PCR扩增含量下降D.退火时间一般为1-2分钟E.Tm值的允许范围内,应该选择较低的退火温度19.延伸温度应有如下特点()A.一般为72℃B.PCR延伸时间越长,产物的得率越高C.TaqDNA酶在延伸温度时有较高的酶活性D.PCR延伸时间根据待扩增片断的长度而定20.PCR循环次数设定时应注意()B.应由最初靶分子浓度而定C.理论上20-25个循环后,PCR产物累积达最大值D.PCR的循环次数一般为25-30次E.循环次数过多时会引起停滞效应21.PCR样品制备时应注意()B.应有专门的区域制备模板C.提取DNA样品和RNA样品时要带手套且经常更换D.纯化样品对污染有极大的影响E.普通分子克隆工具不能用做样品的处理和靶序列F.提取核酸所用的试剂要求新鲜配制或者适当储存未经使用的试剂.22.操作中应该注意()A.使用的溶液应该没有核酸,核酸酶B.试剂水都是高质新鲜蒸馏水C.工具(枪头,试管)都是一次性并且高压灭菌D.应有专门的操作区E.试剂应该分装保存23.PCR反应总为阴性时应该()A.增加TaqDNA酶的浓度B.增加靶DNA的量C.增加扩增循环或者降低退火温度D.提纯样品E.取10μl扩增液再行PCR24.PCR反应出现非特异产物时,应该采取的措施是()A.增加退火温度B.降低TaqDNA酶浓度C.减少退火及延伸时间D.减少引物浓度E.减少扩增循环次数25.PCR可以广泛应用于()A.遗传性疾病的基因诊断B.检测癌基因C.检测病原微生物D.法医鉴定E.DNA序列测定26.对RNA的体外扩增过程,描述正确的是()A.分为循环相和非循环相B.也具有变性,复性,延伸三步C.反应体系中含有dNTP和NTP两种类型的核苷酸D.反应中含有两种特异性引物E.待测RNA作为模板进入循环相27.RNA-PCR技术的特点为()A.扩增效率高B.扩增时间短C.特异性不强D.需严防DNA的污染28.下列说法错误的是()C.RNA-PCR中,非循环反应与循环反应不处在同一反应体系D.RNA-PCR中,扩增产物以2的指数递增E.反应温度一般为37-42℃,时间一般为30分钟到1小时F.RNA-PCR需采用25个循环达到需要量G.依赖于逆转录酶,RnaseH和T7RNA聚合酶共同作用29.利用PCR技术测序有下列哪几种方法()A.双链直接测序B.基因扩增转录测序C.不对称PCR产生单链测序D.双链克隆后测序四、填空题1.PCR反应体系含有，，，。2.PCR反应的基本过程为,,3.引物与模板的退火温度一般为，延伸温度一般为4.PCR循环次数一般设定为，过多的循环次数会导致的出现。5.，，可用于LCR产物的检测。6.引物3‘端最佳碱基选择是和。7.PCR的标本处理的基本要求是8.PCR的反应体系一般选用。9.PCR反应的缓冲液提供了PCR反应与常用的为10.PCR的反应体系中，Mg2＋的浓度一般保持在,常用的是11.TaqDNA聚合酶具有，缺乏因此无。12.在变性过程中，为防止反应液的蒸发，可在反应管中加入13.PCR反应时应设立以下实验对照：,,.14.定量PCR必须设立五、简答题1、简述PCR反应的基本步骤。2、简述PCR模板的种类及制备方法。3、简述PCR产物的积累规律。4、简述PCR的基本反应。5、简述PCR实验应注意的事项。6、简述连接酶链反应的基本原理。7、简述RNA体外扩增的特点。六、论述题1、试述PCR的基本原理及引物设计原则。2、试述PCR技术的特点。3、试述PCR反应条件的优化。4、试述PCR的主要类型及其工作原理。参考答案及题解一、名词解释1、PCR:即聚合酶链式反应。在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。2、变性：于PCR反应体系中，通过加热使温度至95℃左右，使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA作为反应模板。3、退火：PCR反应中，经变性后将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA模板互补区域结合，形成杂交链的过程。4、延伸：当反应体系温度升至70℃左右时，TaqDNA聚合酶催化