DCFHDA活性氧检测方法

ROS活性氧检测试剂盒-DCFHDA法产品组成：产品编号BB-47053规格200-1000TDCFHDA100ul活性氧阳性对照诱导剂1000ul储存条件：-20℃保存。有效期：一年。注意事项：●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。●螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。●禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。●样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。●最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。●避免皮肤或粘膜与试剂接触。产品简介：活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。贝博活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被标记到细胞内。在活性氧存在的条件下，DCFH被氧化生成荧光物质DCF，绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比，检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。在激发波长502nm，发射波长530nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF荧光，从而测定细胞内活性氧水平。本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。产品特点：●使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；●背景低，灵敏度高；●线性范围宽，使用方便。试剂盒以外自备试剂和仪器●培养基●移液器及吸头●离心机●激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长500±15nm，发射波长530±20nm，或者按照FITC荧光检测条件检测。使用方法：使用注意事项：●螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。●荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。●探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。●尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。●对于药物作用时间较短(2小时以内)的细胞，先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照诱导剂或相应的药物刺激细胞，后标记探针。●阳性对照诱导剂可以按照1:1000的比例使用。例如标记好探针的细胞共1毫升，可以加入1微升的阳性对照诱导剂刺激。通常刺激后20-30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照诱导剂的浓度。●对于某些细胞，如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000-1:10000稀释DCFH-DA。探针标记的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整。探针标记：原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000-2000用无血清培养液稀释DCFH-DA。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。收集后标记：按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA。细胞收集后悬浮于稀释好的DCFH-DA中，细胞浓度为1*106-2*107/毫升，37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己研究的药物刺激细胞，或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照诱导剂在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。仅在阳性对照孔中加入阳性对照诱导剂，其余孔不必加入。检测：对于原位标记探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测DCF。相关产品：产品产品号产品产品号AnnexinV-FITC/PI凋亡试剂盒BB-4101细胞周期检测试剂盒BB-4104AnnexinV-EGFP/PI凋亡试剂盒BB-4102JC-1线粒体膜电位试剂盒BB-4105MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒BB-4201Caspase3活性检测试剂盒BB-4106CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒BB-4202Caspase8活性检测试剂盒BB-4107WST-1细胞增殖毒性检测试剂盒BB-4203Caspase9活性检测试剂盒BB-4108MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒BB-4204Caspase10活性检测试剂盒BB-4112Hoechst33342/PI双染试剂盒BB-4131细胞凋亡形态学检测试剂盒BB-4123DAPI染色试剂盒BB-4133Rhodamine123染色试剂盒BB-4137细胞存活率检测试剂盒BB-4122AO/EB双染试剂盒BB-4132