lipo2000转染操作步骤(精)

Stealth™RNAiorsiRNATransfection以24孔板为例，其余规格的转染见表11中板，细胞密度为30-50%适宜。注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。2第二天（24-36小时后）每个孔转染方式如下：A将20pmolsiRNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。B将1ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。C将AB两管混合，放置20min。3转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。PlasmidDNATransfectionDNA(ug):lipo2000(ul)=1:2-3转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。1中板。贴壁细胞：0.5-2X105cells/well，第二天待细胞密度达到90%以上时转染悬浮细胞：4-8X105cells/well，中板后随即转染。2转染。A将0.8ugDNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。B将2ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。C将AB两管混合，放置20min。转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。Table1.CultureSharedreagentsDNAtransfectionRNAitransfection中板密度*CulturevesselSurf.areaperwellVol.ofplatingmediumVol.ofdilutionmediumDNALipofectamine™2000RNALipofectamine™20001000-10000cell/well96-well0.3cm2100ul2X25ul0.2ug0.5ul5pmol0.25ul0.5-2X105cell/well24-well2cm2500ul2X50ul0.8ug2.0ul20pmol1.0ul1-3X105cell/well12-well4cm21ml2X100ul1.6ug4.0ul40pmol2.0ul2-3X105cell/well6-well(35mm)10cm22ml2X250ul4.0ug**10ul100pmol5ul8-10X105cell/dish60mm20cm24ml2X0.5ml8.0ug***20ul200pmol10ul2-3X106cell/dish10cm60cm215ml2X1.5ml24ug60ul600pmol30ul*：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参考**：6孔板细胞质粒转染量1-2ug足以。***：6cmdish细胞质粒转染量4-6ug足以。