第七章芳香胺类药物的分析

第七章芳香胺类药物的分析对氨基苯甲酸酯类:盐酸普鲁卡因酰胺类:对乙酰氨基酚芳胺类季胺盐类：磺酰胺类：芳烃胺类苯乙胺类:拟肾上腺素类药物苯丙胺类第一节芳胺类药物的分析对氨基苯甲酸酯类:特点：芳伯氨基未被取代，芳环的对位有取代酰胺类:特点：芳伯氨基被酰化，且芳环的对位有取代芳胺类一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构和典型药物具有对氨基苯甲酸酯的母体结构中芳伯氨基未被取代，而在芳环对位有取代典型药物的结构COOC2H5H2N苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸普鲁卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸氯普鲁卡因Cl盐酸丁卡因CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐酸普鲁卡因胺H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸普鲁卡因酰胺键酯键COOCH2CH2N(CH3)2CH3(CH2)3NHHCl盐酸丁卡因（二）主要化学性质(1)芳伯氨基特性：可显重氮化-偶合反应(芳香第一胺类反应)与芳醛缩合易氧化变色(2)酯键易水解特性：(3)弱碱性：脂烃胺侧链为叔胺氮原子，具有弱碱性要采用非水溶液滴定法或亚硝酸钠滴定法测定含量与生物碱沉淀剂发生沉淀反应苯佐卡英除外（4）溶解性：具芳伯氨基，或同时具脂烃胺侧链，游离碱多为碱性油状物或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂盐酸盐均为白色结晶或结晶性粉末，具有一定的熔点。在水和乙醇中易溶，难溶于乙醚、氯仿等有机溶剂普鲁卡因盐酸盐水溶液加氢氧化钠或碳酸钠溶液，有油状的普鲁卡因析出二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构和典型药物☆芳伯氨基被酰化，并且在芳环对位有取代，☆共性为具有芳酰氨基典型药物的结构：HONHCOCH3对乙酰氨基酚（扑热息痛）SOONHCOCH3CH3CONH醋氨苯砜NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl盐酸利多卡因NHCONC4H9CH3CH3HCl盐酸布比卡因（二）主要化学性质（1）水解产物呈芳伯氨基特性:药物结构中具有酰氨基，在酸性溶液中易水解得具有芳伯氨基的产物对乙酰氨基酚水解速度较快，而盐酸利多卡因、盐酸布比卡因的盐水溶液较稳定（2）水解产物易酯化(3)酚羟基的特性—与三氯化铁发生呈色反应是对乙酰氨基酚专属反应，用于区别同类药物利多卡因（4）溶解性：对乙酰氨基酚在热水中或乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶三、鉴别试验（一）重氮化-偶合反应芳香第一胺类鉴别反应ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄～猩红色萘酚OH-注意：在鉴别时，首先要使溶液成酸性，然后才能滴加亚硝酸钠试液及碱性β一萘酚试剂。直接：盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺间接：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜鉴别时先用酸水解后，在滴加亚硝酸钠试液及碱性β一萘酚试剂。（1）盐酸普鲁卡因的鉴别（直接）盐酸普鲁卡因ChP（2005）[鉴别]（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录Ⅲ）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。（2）对乙酰氨基酚的鉴别（间接）对氨基酚对乙酰氨基酚、HCl对乙酰氨基酚ChP（2005）[鉴别]（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。特例：盐酸丁卡因COOCH2CH2N(CH3)2CH3(CH2)3NHHCl分子结构中不具芳伯氨基芳香仲胺芳香仲胺酸性亚硝酸钠试液乳白色N-亚硝基化合物沉淀与具有芳伯氨基的同类药物区别（二）三氯化铁反应对乙酰氨基酚（三）与重金属离子反应1、盐酸利多卡因的鉴别A、与重金属CU2＋的反应盐酸利多卡因NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl碳酸钠试液Cu2+蓝紫色配位化合物三氯甲烷提取提取液显黄色药典收载方法之一，相同反应条件下芳胺类药物（苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸丁卡因等）无此反应B、与钴盐反应盐酸利多卡因酸性氯化钴试液亮绿色细小钴盐沉淀C、与汞盐反应盐酸利多卡因硝酸酸化Hg+，Δ黄色区别于对氨基苯甲酸酯类（显红色或橙黄色）2、盐酸普鲁卡因胺的鉴别CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl酰胺键盐酸普鲁卡因胺H2O2，氧化羟肟酸FeCl3试液羟肟酸铁先显紫红色，随即呈暗棕色至棕黑色药典收载（四）水解产物的反应盐酸普鲁卡因ChP（2005）[鉴别]（2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。）对氨基苯甲酸（白色对氨基苯甲酸钠纸变兰色）（使湿润的红色石蕊试二乙氨基乙醇对氨基苯甲酸钠油状物（普鲁卡因）普鲁卡因盐酸普鲁卡因HClNaOH苯佐卡因的鉴别：苯佐卡因NaOH试液Δ乙醇Δ碘试液黄色沉淀碘仿臭气（五）制备衍生物测定熔点通常的衍生物为：三硝基苯酚衍生物硫氰酸盐衍生物（六）紫外特征吸收光谱☆具有的苯环结构，具有紫外吸收光谱☆针对不同的药物、不同的溶剂、不同的浓度、它们的吸收波长不同，吸收系数也不同盐酸布比卡因ChP（2005）[鉴别]（2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录ⅣA）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.53～0.58与0.43～0.48。（五）红外吸收光谱当该类药物采用其他方法难以进行区别时，用红外吸收光谱就比较容易区别。四、特殊杂质的检查（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查用对硝基氯苯、苯酚、硝基苯作原料，但都以对氨基苯酚为主要中间体制备对乙酰氨基酚。1、乙醇溶液的澄清度与颜色合成工艺中，用铁粉作还原剂乙醇溶液的澄清度如溶液浑浊，可与1#浊度标准液比较，不得更浓乙醇溶液的颜色：检查中间体对氨基酚的有色氧化产物。如显色，与棕红色2号或橙红色2号比较，不得更深2、有关物质主要杂质：中间体、副产物及分解产物。例如：对氨基酚、对氯乙酰苯胺、O-乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等检查对象：对氯苯乙酰胺方法：TLC法，杂质对照品法注意事项：☆尽量在较低温度下进行，减少乙醚的挥发☆供试品点样量大，点样直径不宜超过7mm判断方法：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深3、对氨基酚杂质来源中间体、水解产物反应原理兰色亚硝基铁氰化钠对氨基酚OH药物主成分对乙酰氨基酚无此呈色反应注意事项：对氨基酚对照液稳定性差，临用前配置用于原料药中对氨基酚的检查，制剂用HPLC法检查方法对照法%005.0%1000.11050%1006供试品量允许杂质存在的最大量L取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50g用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005％）。（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查原理：☆TLC杂质对照品法☆对氨基苯甲酸最低检出量为0.01μg☆苯胺最低检出量0.01μg≤1.2%H2NH2NCOOH-CO2O==O[O]黄色精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含30g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各10l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14∶1∶1∶4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。%2.1%100105.2101030%1003供试品量允许杂质存在的最大量L（三）盐酸氯普卡因注射液中有关物质和光解产物的检查由于盐酸氯普卡因注射液在生产和贮藏过程中会产生4-氨基-2-氯苯甲酸，影响疗效和成品的颜色，故此需要对降解产物进行检查1、高效液相色谱法（HPLC）2、液相色谱与质谱联用法（LC-MS）MSLCLC-MSLC-MS/MSLC-ESI-MS/MSLC-APCI-MS/MSLC-ESI-TOF-MS/MSLC-MALDI-TOF-MS/MSLC-MS分析：1、色谱条件ZobaxSB-C18(150mm×4.6mm,i.d.,5μm)Columntemperature:25℃Mobilephase:0.5%HAc-CH3CN(0.5%HAc)=87:13flowrate:1.0ml/minDetectionwavelength:254nm2、质谱条件PositiveScanmode80~600mau喷雾电压：4000V裂解电压：70VN2-9.5L/min干燥气压力：40psi干燥气温度：350℃4－氨基－2－氯苯甲酸（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查CH3CH3NHCONC3H7HCl长效酰胺类局麻药，R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大临床使用S－盐酸罗哌卡因高效毛细管电泳五、含量的测定(一)亚硝酸钠滴定法1、原理终点指示：永停法（外指示剂法）例：中国药典（2005年版）收载有☆具有芳伯氨基的药物——盐酸普鲁卡因及其注射剂、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射剂、注射用盐酸普鲁卡因☆具有潜在芳伯氨基的药物－醋氨苯砜及其注射液NHCOR+H2ONH2+RCOOHH+△NO2+6[H]NH2+2H2O具酰胺,经水解具硝基,经还原2、主要测定条件（1）加入适量KBr加速反应:KBr为催化剂不同的酸影响反应速度：HBrHClHNO3、H2SO4NN+Cl-快NNOH快NNOH慢NO+Cl-NH2NaNO2+HCl→HNO2+NaClOHNOBrHBrHNO22OHNOClHClHNO22K1K2K1≈300K2加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度在盐酸存在下重氮化反应与芳伯氨基的游离程度有关★若芳伯氨基的碱性较弱，则成盐的比例较小，即游离芳伯氨基较多，反应速度就快★若芳伯氨基碱性较强，则成盐比例较大，游离芳伯氨基较少，则反应速度就慢NN+Cl-快NNOH快NNOH慢NO+Cl-NH2（2）加过量盐酸的作用：胺类药物的盐酸盐比硫酸盐的溶解度大可以加快重氮化反应速度增加重氮盐在酸性溶液中的稳定性防止偶氮氨基化合物的生成结论：加速反应注意事项：酸度不能过大会阻碍芳伯氨基的游离，影响反应速度可使亚硝酸分解芳胺类药物:酸的摩尔比=1:2.5～6（3）控制温度：在10～30℃条件下滴定温度每升高lO℃，重氮化反应则加快2.5倍，但重氮盐分解速度亦相应地加速2倍若温度过低，反应又太慢（4）滴定管尖端插入液面下滴定滴定速度：先快后慢滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次把大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌下迅速加入，使其尽快反应将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定在近终点时，剩余的芳伯氨基的浓度极稀，需在最后一滴加入后，搅拌1～5min，再确定终点是否真正到达3、终点指示方法永停滴定法电位法外指示剂法内指示剂法（1）永停滴定法——中国药典收载终点：电极起氧化-还原反应，电流计指针偏转终点前：电极不起氧化-还原反应，电流计的指针指零（2）外指示剂法：KI—淀粉糊剂或试纸2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O碘化钾被氧化遇淀粉，显蓝色操作要点：①显色要立即原因：指示剂在酸性条件下置于空气中一段时间后，空气将指示剂中KI氧化为I2而使淀粉变蓝色②样品易损失弥补方法：通过滴定度计算，得大概的用量预先做一份求得大概用量，然后再准确测定，蘸取试验时取量一