《检验仪器分析》第2章-常用移液器

实验室常用移液器第二章主讲人：周振华教学基本要求掌握（1）移液器的工作原理（2）移液器的基本结构和性能要求（3）移液器的使用方法熟悉（1）移液器的维护（2）移液器常见故障的排除了解（1）移液器的种类（2）移液器的专业校准3第二章实验室常用移液器第二节移液器的基本结构、性能与使用2第一节常用移液器的工作原理31第三节移液器的维护与常见故障的排除33前言良好的分析技术对于临床检验是极为重要的，在各种临床检验分析技术中，首先要熟练掌握的就是准确的移液技术，它是检验技术人员的基本功，是保证检验结果准确的前提和条件。目前，移液器替代了过去的玻璃刻度吸管，作为一种方便有效的精密计量器材已广泛应用于各类实验室。返回目录第一节常用移液器的工作原理移液器（locomotivepipette）又名微量加样器或移液枪，是连续可调、计量和转移液体的专用器材。目前移液器的吸液范围从小于1μl至10ml之间。返回目录678根据其移液的物理学原理可分为使用空气垫(又称活塞冲程)加样的移液器和使用无空气垫的活塞正移动加样的移液器。根据移液量是否可调又可分为定量移液器和可调式移液器。第一节常用移液器的工作原理返回目录9一、移液器的工作原理移液器的基本工作原理是依据胡克定律。在一定限度内弹簧伸展的长度与弹力成正比，也就是移液器的吸液体积与移液器内的弹簧伸展的长度成正比。移液器内活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液和放液。在活塞推动下，排出部分空气，利用大气压吸入液体，再由活塞推动空气排出液体。返回目录10二、常用移液器的工作原理目前临床常用的移液器主要有空气垫移液器、活塞正移动移液器、多通道移液器和电子移液器。返回目录111．空气垫移液器空气垫移液器主要用于固定或可调体积液体的加样，加样体积的范围在1μl至l0ml之间。空气垫的作用是将吸至塑料吸头内的液体与移液器内的活塞分隔开，空气垫随着移液器活塞的弹簧伸缩而移动，进而带动吸头中的液体。空气垫移液器最大的不足之处就是容易受温度、气压和空气湿度的影响，导致加样的准确度降低。返回目录1213死体积活塞套筒吸嘴（一次性）液体142．活塞正移动移液器该类移液器可以在空气垫移液器难以应用的情况下使用。如移取具有高蒸汽压、高黏稠度以及密度大于2.0g/cm3的液体。活塞正移动移液器的吸头与空气垫移液器吸头不同，其内含一个可与移液器活塞耦合的活塞，这种吸头不能使用普通的吸头或不同厂家的吸头。返回目录活塞正移动移液器15活塞正移动移液器采用外置式活塞，活塞设计在吸头内部，直接与液体接触，活塞与液体之间没有空气段。16液体活塞（一次性）毛细吸管（一次性）尖头操作杆17两种移液器的比较18193．多通道移液器和电子移液器多通道移液器通常为8通道或12通道，与96孔（8×12）微孔板一致。多通道移液器的使用不但可减少实验操作人员的加样次数，而且可提高加样的精密度。返回目录20电子移液器多为半自动加样系统，加样重复性高，可减少人为误差和污染，应用范围广。返回目录2122232425第二节移液器的结构、性能与使用移液器是临床实验室中最常使用的移液器材之一，虽然其基本结构简单，使用方便，但对移液器的性能要求比较严格，作为专业的检验人员应当掌握移液器的基本结构和使用方法。返回目录26一、移液器的基本结构移液器是一种量出式量器，移液量由一个配合良好的活塞在活塞套内移动的距离来确定。移液器的基本结构主要由显示窗、容量调节部件、活塞、O-形环、吸引管和吸液嘴（俗称枪头）等部分组成返回目录27二、移液器的性能要求移液量能否按照实验的要求精确量取，直接关系到检测结果的准确性和可靠性。返回目录28（一）计量性能要求移液器在标准温度20℃时，其容量允许误差和测量重复性应符合《中华人民共和国国家计量检定规程——移液器》的要求.返回目录29（二）通用技术要求①标有产品名称、生产商、标称容量等基本信息②移液器外壳塑料表面应平整、光滑，外观要求按钮上下移动应灵活、分档界限明显，在正确使用情况下不得有卡住现象。按钮采用聚丙烯或性能相似材料制成，无明显弯曲，内壁光洁、平滑，排液后没有明显液体遗留，有相应配套的吸液嘴吸液嘴在0.04MPa的压力下，5s内不得有漏气现象。密合性可调移液器的容量调节指示部分在调节范围内转动要灵活，数字指示要清晰、完整。调节器返回目录30（三）移液器的检测1．气密性检测①目视法检测：将吸取液体后的移液器垂直静置15秒，观察是否有液滴缓慢的流出。若有流出，说明有漏气现象；②压力泵检测：使用专用的压力泵，检测压力情况，判断是否漏气。返回目录31（三）移液器的检测移液器漏气的处理可能原因处理办法吸头不匹配使用原装匹配的吸头装配吸头时没上紧注意装配吸头的方法（参考说明书）移液器内部气密性不好请厂商工程师处理返回目录32（三）移液器的检测2．准确性检测①量程小于1μl：建议使用分光光度法检测。②量程大于1μl：用称重法检测。通过对水的称重，转换成体积来鉴别移液器的准确性。返回目录33（四）移液器的专业校准移液器的工作量大，长期使用，将会使弹簧弹力发生变形，加之使用塑料材料，不耐磨擦，容易产生误差。新购进的移液器必须进行校准才能使用。正在使用的移液器，由于长期使用会造成其设定体积与吸取体积的误差。目前，由于实验室自身条件的限制，一般实验室进行的常规检测并不能完全取代专业的校准工作。返回目录34三、移液器的使用方法移液器的操作是科学试验的第一步，是一个非常基础的试验操作，而错误的操作容易产生移液偏差，导致实验结果不准确。返回目录35（一）设定移液体积从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可。从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过设定体积的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。返回目录36（一）设定移液体积千万不要将旋钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏移液器。返回目录37（二）装配吸液嘴单通道移液器，将移液端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可。多通道移液器，将移液器的第一道对准第一个吸头，倾斜插入，前后稍微摇动上紧，吸头插入后略超过O型环即可返回目录38（三）移液方法移液前，保证移液器、枪头和液体处于相同温度。吸液前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴。吸液时，保持竖直，枪头插入液面下2～3毫米。返回目录39前进移液法用大拇指将按钮按下至第一停点，(枪头插入液面下)，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体，最后松开按钮。返回目录40反向移液法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体。吸取液体时先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。将按钮按至第一停点排出液体，保持按钮位于第一停点，取下有残留液体的吸液嘴，弃之。返回目录41（四）移液器的放置使用完毕，可以将其竖直挂在移液器架上。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。返回目录42第三节移液器的维护与常见故障的排除移液器以操作简单，准确性高等优点得到了广泛应用，为使移液器始终保持最佳性能，必须定期进行维护，并及时排除故障。返回目录43移液器的拆卸方法返回目录44移液器的拆卸方法返回目录45（一）清洁和消毒内外部清洁①外壳的清洁：清洁液擦洗，双蒸水淋洗，晾干；②内部的清洗：拆卸移液器下半部分，按①步骤清洗后在活塞表面涂上一层薄硅酮油脂。消毒灭菌处理①常规高温高压灭菌处理：包装灭菌部件于121℃，100kPa，灭菌20分钟，室温下晾干，活塞涂一层薄硅酮油脂，再组装；②紫外线照射灭菌：表面消毒。DNA污染的去除移液器下半部分拆卸下来的内外套筒，95℃下于清洗液中浸泡30分钟，再用蒸馏水冲洗套筒，60℃下烘干或完全晾干后在活塞表面涂上硅酮油脂再组装。123返回目录46（二）不同性质液体移液时的操作特性和保养方法为确保移液的准确度，建议根据具体使用情况采用相应的清洗及保养方法，以延长移液器使用寿命。返回目录47移液器在不同使用情况下应采取的清洗和保养方法液体性质操作特性清洗和保养方法水溶液和缓冲液用蒸馏水校准移液器，结果非常准确打开移液器，用双蒸水冲洗污染部分，可以在干燥箱中干燥，温度不超过60℃。给活塞涂抹少量润滑油无机酸/碱如果经常移取高浓度的酸/碱液，建议偶尔用双蒸水清洗移液器的下半支。并推荐使用带有滤芯的吸嘴Eppendorf移液器使用的塑料材料和陶质活塞都是耐酸耐碱材料（除氢氟酸）。但是酸液/碱液的蒸汽可能会进入移液器的下部，影响其性能。清洁方法同“水溶液”部分具有潜在传染性的液体为了避免污染，应该使用带有滤芯的吸嘴。或者使用正向置换方法移取污染部分进行121℃，20分钟高压灭菌。或将移液器下部浸入实验室常规消毒剂中。随后用双蒸水清洗，并用如上所述的方法进行干燥。细胞培养物为了保证无菌，应使用Eppendorf带有滤芯的吸嘴参照“具有潜在传染性的液体”的清洁方法返回目录48移液器在不同使用情况下应采取的清洗和保养方法液体性质操作特性清洗和保养方法有机溶剂1．密度与水不同。因此必须调节移液器。2．由于蒸汽压高和湿润行为的变化，应该快速移液。3．移液结束后，拆开移液器，让液体挥发。通常对于蒸气压高的液体，任其自然挥发的过程就足够了。或者将下部浸入消毒剂中。用双蒸水清洗，并用如上所述的干燥方法将其干燥放射性溶液为了避免污染，应该使用带有滤芯的吸嘴。或者使用正向置换方法拆开移液器，将污染部分浸入复合溶液或专用的清洁溶液，用双蒸水清洗，并用如上所述的干燥方法将其干燥核酸/蛋白质溶液为了避免污染，应该使用带有滤芯的吸嘴。或者使用正向置换方法（1）蛋白质：拆开移液器，用去污剂清洗，清洗和干燥方法如上所述。（2）核酸：在氨基乙酸／盐酸缓冲液（pH2）中煮沸10分钟（确保琼脂糖凝胶电泳检测不到DNA残留），用双蒸水清洗干净，并用如上所述的干燥方法将其干燥。同时给活塞涂抹少量润滑油返回目录49二、移液器常见故障的排除移液器的使用频率较高，同时可能存在操作人员使用不当，易导致移液器出现故障，因此，操作人员应当熟悉移液器常见故障，并具备排除故障的基本能力。返回目录50移液器的常见故障及排除常见故障可能原因解决办法吸液嘴内有残液吸液嘴不适配吸液嘴塑料湿润性不均一吸液嘴未装好使用原配吸液嘴装紧吸液嘴重装新吸液嘴漏液或移液量太少吸液嘴不适配吸液嘴和连件间有异物活塞或O-形环上硅油不够O-形环与活塞未扣好或O-形环损坏操作不当需要校准或液体密度与水差异大移液器被损坏使用原配吸液嘴清洁连件，重装新吸液嘴涂上硅油清洁并润滑O-形环和活塞或更换O-形环认真按规定操作根据指导重新校准维修按钮卡住或运动不畅活塞被污染或有气溶胶渗透清洁并润滑O-形环和活塞清洁吸液嘴连件移液器堵塞，吸液量太少液体渗进移液器且已干燥清洁并润滑活塞和吸液嘴连件吸液嘴推出器卡住或运动不畅吸液嘴连件和/或吸液嘴推出轴被污染清洁吸液嘴连件和推出轴返回目录51思考题移液器的概念及基本工作原理。移液器的使用方法要点及注意事项。返回目录