SIGMA-葡萄糖HK检测试剂盒说明书

SIGMA葡萄糖HK检测试剂盒说明书（Glucose(HK)AssayKit;ProductCodeGAHK-20）一、产品介绍食品、生化和制药业普遍将酶作为分析工具。酶法具有特异性高、重现性好、敏感性高以及反应快速的特点，是用于分析的理想工具。由于酶具有高的特异性和敏感性，所以不需样品制备即可进行定量分析。本试剂盒以酶法定量测定食品和其他材料中的葡萄糖。原理：葡萄糖+ATP→6-磷酸葡萄糖+ADPG6P+NAD→6-磷酸葡萄糖酸+NADH葡萄糖在己糖激酶催化反应中被ATP磷酸化，然后G6P在NAD存在下被6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化，氧化为6-磷酸葡萄糖酸；反应中，等分子量的NAD被还原为NADH。随后的340nm吸光度的增加与葡萄糖含量成正比。二、试剂组成1、葡萄糖检测试剂用20ml水溶解小瓶内粉剂；加水后立即盖紧瓶塞，反转混匀数次，不可震动。加水20ml溶解后，每瓶溶液含有1.5mMNAD，1.0mMATP，1.0U/mlG6PDH；并含有防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾。小瓶粉剂保存于2-8℃。如果粉剂受潮结块、加水不能充分溶解、或水溶液浑浊，则应将试剂弃用。试剂水溶液比较稳定，18-26℃保存7天、2-8度保存4周不会有微生物生长。以水作为空白参照，新配置的溶液340nm吸光度如果大于0.350，则溶液不适合使用。2、葡萄糖标准溶液D-葡萄糖，1.0mg/ml溶于0.1%苯甲酸；该标准液为即用型，符合美国国家标准技术研究所标准；2-8℃可至少保存半年。期间如果溶液浑浊，则应弃用。三、需自备的实验仪器1、可测定340nm吸光度的分光光度计2、测量杯3、10μl-1ml量程的移液器四、注意事项和免责声明本试剂仅供科研使用，不能用于药品、家庭以及其他用途。涉及危害和使用安全性问题，参照材料安全数据表。五、存储及稳定性2-8℃保存。六、实验步骤1、样品制备液体：以去离子水稀释样品至0.05-5mg葡萄糖/ml。可过滤或去蛋白处理使样品澄清；样品葡萄糖含量较低而颜色较浓时，应予以脱色处理。含碳酸或发酵样品，须脱气处理。固体：称量0.1mg样品，用去离子水提取样品。可以加温溶液（＜75℃）以助提取。以去离子水稀释提取液至0.05-5mg葡萄糖/ml。可过滤或去蛋白处理使样品澄清。2、测定吸取0.5-50μg葡萄糖质量相当的溶液。为使ΔA360在0.03-1.6之间，必要时可重复测定并改变溶液体积。（1）吸取下列溶液到相应的试管中试管葡萄糖测定试剂（ml）样品体积（μl）去离子水（ml）样品空白-同测试（如100μl）1.0试剂空白1.0-同测试（如100μl）测试1.010-200（如100μl）-（2）混匀，室温（18-35℃）孵育15min（3）去离子水调零，测量340nm吸光度，3、计算总空白对照应包括样品和试剂空白。ATotalBlank=ASampleBlank+AReagentBlank葡萄糖mg/ml=(𝛥𝐴)(𝑇𝑉)(𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑒𝑀𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟𝑊𝑒𝑖𝑔ℎ𝑡)(𝐹)(𝜀)(𝑑)(𝑆𝑉)(𝐶𝑜𝑛𝑣𝑒𝑟𝑠𝑖𝑜𝑛𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟𝑓𝑜𝑟𝜇𝑔𝑡𝑜𝑚𝑔)葡萄糖mg/ml=(𝛥𝐴)(𝑇𝑉)(180.2)(𝐹)(6.22)(1)(𝑆𝑉)(1,000)葡萄糖mg/ml=(𝚫𝐀)(𝐓𝐕)(𝐅)(𝟎.𝟎𝟐𝟗)(𝐒𝐕)ΔA=A测试–A总空白TV=TotalAssayVolume(ml)总测试体积SV=SampleVolume(ml)样品体积GlucoseMW=180.2g/mole（葡萄糖分子量）F=制样稀释倍数ε=NADH/mmol/cm在340nm的毫摩尔消光系数d=光径=1cm1000=换算系数（μg到mg）七、参考文献（略）翻译：ZhangZhi-Qiang